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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果三物黄芩颗粒抗动物型变态反应及其机制研究*【摘要】 目的 运用模型动物观察三物黄芩颗粒的抗过敏作用，并通过其作用环节的 影响 ，初步探讨其抗过敏机制。 方法 用大鼠被动皮肤过敏法建立型变态反应动物模型，观察反应蓝斑直径；测定血清中总IgE含量；观察颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒情况及对外源性组胺的拮抗作用。结果 该颗粒大、中剂量组能非常显著地抑制大鼠背部皮肤蓝色反应斑的直径，能够减低致敏大鼠血清中总IgE含量，大剂量组与模型组比较差异有显著性。显微镜下拍摄实验大鼠颅骨骨
2、膜贴片，可见大、中、小剂量组均有一定程度的肥大细胞脱颗粒现象，但与模型组比较有所减少。该颗粒大、中剂量组对外源性组胺引起的大鼠瘙痒致痒阈，与正常对照组比较有明显提高。结论 三物黄芩颗粒能有效对抗型变态反应，具有良好的抗过敏作用。 【关键词】 三物黄芩颗粒；型变态反应；动物模型；抗过敏 三物黄芩颗粒源于古方，本课题旨在从实验角度，探讨三物黄芩颗粒的抗型变态反应动物模型作用及其机制，从一个方面为该药的临床提供依据，同时探讨该药 治疗 型变态反应类疾病的可行性。 本次实验在我院动物室进行。实验药物三物黄芩浸膏粉由四川维奥制药有限公司提供，每克浸膏粉含原生药5g，批号：。临床拟定剂量为每日8g浸膏粉，
3、按成人一般体重60kg 计算 ，人日用剂量为原生药/kg。设三物黄芩颗粒大、中、小剂量组g，四川省医学 科学 院实验动物中心提供，并配给饲料。合格证号：川实动管质99-32。 实验药物和试剂 强的松片：5mg/片，每次510mg，每日1060mg，仙居制药有限公司提供，批号：。1%卵白蛋白： 中国 医药集团上海化学试剂公司生产，批号FXX0702。百日咳三联疫苗：成都生物制品 研究 所提供，批号XX0403。%伊文思蓝溶液：中国医药集团上海化学试剂公司生产，批号FXX0913。 实验仪器、设备 ACS-3H-B 电子 秤：中山市金利电子衡器有限公司；型离心机：北京医疗仪器修理厂制造。 实验方法
4、 动物分组 动物购回后，取体重160200g健康SD大鼠50只，按体重随机分为正常对照组、三物黄芩颗粒大剂量组、中剂量组、小剂量组、阳性对照组5组，每组10只，雌雄各半。 给药方法 正常对照组给予生理盐水，各组均以1ml/100g体重体积灌胃给药，每日1次，连续7天。 剂量设计 阳性对照组用强的松5mg/kg，相当于临床剂量的10倍。 观察指标及测试方法 抗血清的制备 取健康SD大鼠5只，用1%卵白蛋白生理盐水溶液按10mg/kg肌注射于后腿两侧，同时腹腔注射百日咳疫苗21010/只。12天后，处死大鼠采血，血液以500r/min低速离心，分离血清，此血清置冰箱备用。 正式实验 各组大鼠灌胃给
5、药，每天1次，连续7天。第6天用乙醚浅麻醉大鼠，在其背中线两侧、距脊柱处剪光被毛，每侧剪3点，每点间隔。取上述含IgE的抗血清，用生理盐水稀释成130、140、150三种不同稀释度，按不同浓度抗血清次序，皮内注射于剪毛的各点，每点。第8天进行抗原攻击：尾静脉注射%伊文思蓝溶液1ml，内含卵白蛋白1mg。经20min后，断颈处死大鼠，剪下背部皮肤，检查注射各点的蓝色反应斑直径。 实验结果 见表1。表1 三物黄芩颗粒对大鼠被动皮肤过敏反应的影响 注：与对照组相比，*P；*P 如表1所示，正常对照组皮斑直径最大，表明造模成功。三物黄芩颗粒大、中剂量组连续给药7天，能显著地抑制各个稀释度抗血清引起的大
6、鼠背部皮肤蓝色反应斑的直径，但不如强的松组g，四川省医学科学院实验动物中心提供，并配给饲料。合格证号：川实动管质99-32。 实验阳性药物和试剂 强的松片、1%卵白蛋白、百日咳三联疫苗来源同前。苦味酸由广东台山化工厂生产。 实验仪器、设备 血清总IgE免疫放射 分析 测定盒：北京北方生物技术研究所提供，批号。ACS-3H-B电子秤：中山市金利电子衡器有限公司。型离心机：北京医疗仪器修理厂制造。 动物分组 动物购回后，取体重160200g健康SD大鼠60只，按体重随机分为正常对照组、模型组、三物黄芩颗粒大剂量组、中剂量组、小剂量组、阳性对照组6组，每组10只，雌雄各半。 给药 方法 正常对照组及
7、模型组给予1ml/100g生理盐水，各组均以1ml/100g体重体积灌胃给药，每日1次，连续7天。 观察指标及测试方法 实验第1天，除正常对照组外，用卵白蛋白生理盐水溶液按10mg/kg肌内注射于后腿两侧，同时腹腔注射百日咳疫苗21010/只，各组按给药方法灌胃7天。第13天，处死动物采血，血液低速离心，分离血清，送成都中医药大学附属 医院 放免科测血清总IgE含量。 实验结果 见表2。表2 三物黄芩颗粒对致敏大鼠血清IgE含量的 影响 由表2可见，空白组与模型组比较差异有显著性(t检验，P），说明造模成功。三物黄芩颗粒大、中、小剂量组连续灌胃给药7天，能够减低致敏大鼠血清中总IgE含量，其中
8、大剂量组与模型组比较差异有显著性，说明三物黄芩颗粒大剂量组能够明显减低致敏大鼠血清中总IgE含量。 大鼠颅骨骨膜肥大细胞脱颗粒实验 实验动物 SD大鼠，雌雄各半，体重g，四川省医学 科学 院实验动物中心提供，并配给饲料。合格证号：川实动管质99-32。 实验阳性药物和试剂 强的松片、苦味酸、1%卵白蛋白、百日咳三联疫苗同前。%伊文思蓝溶液： 中国 医药集团上海化学试剂公司生产，批号FXX0913。 实验仪器、设备 ACS-3H-B 电子 秤：中山市金利电子衡器有限公司；型离心机：北京医疗仪器修理厂制造。 动物分组 动物购回后，取体重 160200g健康SD大鼠24只，按体重随机分为空白组、西药
9、组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组6组，每组4只，雌雄各半。 给药方法 空白组给予生理盐水，各组均以1ml/100g体重体积灌胃给药，每日1次，连续7天。 观察指标及测试方法 制备抗血清：另取健康SD大鼠4只，体重160200g，用卵白蛋白生理盐水溶液按10mg/kg肌内注射于后腿两侧，同时腹腔注射百日咳疫苗21010/只。第13天，处死动物采血，血液低速离心，分离血清，此血清置冰箱备用。正式实验：各组按给药方法灌胃7天；第6天，接种抗血清，除空白组外，其余5组大鼠头部皮下注射稀释成 120大鼠抗血清；第8天进行抗原攻击，30min后断头处死。取颅骨，经脱水、固定、染色后，流水冲洗，
10、细心剥离颅骨骨膜，展于载玻片晾干，在光镜下进行形态学观察并拍摄照片。 实验结果及 分析 显微镜下拍摄实验大鼠颅骨骨膜贴片，可见空白组实验大鼠颅骨骨膜血管周围的肥大细胞几乎无脱颗粒现象；而模型组有大量肥大细胞脱颗粒现象，且可见细胞破裂，说明造模成功。西药组。该颗粒能有效作用于实验性型变态反应的三个作用环节，发挥抗过敏作用，明显减低致敏大鼠血清中总IgE含量，大剂量组与模型组比较差异有显著性。在显微镜下拍摄实验大鼠颅骨骨膜贴片，可见大、中、小剂量组有一定程度的肥大细胞脱颗粒现象，且均明显少于对照组，说明三物黄芩颗粒能抑制肥大细胞脱颗粒，但作用弱于西药组。 课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。
