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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划红细胞溶血实验报告姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目细胞膜通透性实验【实验题目】细胞膜通透性实验【实验目的】1、观察溶血现象并掌握其发生机制。2、了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。【实验材料与用品】1.试剂：%NaCl溶液、%NaCl溶液、/L甲醇溶液、/L丙三醇溶液、6%葡萄糖溶液、2%TritonX-1002.器具：离心管、试管架、滴管、显微镜、离心机3.材料：鸡血红细胞【实验原理】细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择性屏障，它是一种半透膜，
2、可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，通透性高，水分子可以从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象称为渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能之一。1.溶血现象将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内使细胞涨破，血红蛋白释放到介质当中，介质由不透明的细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。红细胞在等渗盐溶液中短时间之内不会发生溶血，但是由于红细胞的细胞膜对不同物质的通透性不同，时间久了，膜两侧的渗透压平衡会被打破，也会发生溶血。姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目细胞膜通透性实验由于各种溶质透过细
3、胞膜的速度不同，因此发生溶血的时间也不相同。发生溶血现象所需的时间，可以作为测量某种物质进入红细胞速度的指标。即溶血时间对应着穿膜速度。2.物质穿膜运输的类型被动运输被动运输分为简单扩散和协助扩散。主动运输需要跨膜载体蛋白的协助，这些载体蛋白起到泵的作用，有选择性地把专一溶质逆浓度梯度的穿膜运输。3.影响物质穿膜通透性的因素脂溶性越大的分子越容易穿膜小分子比大分子更容易穿膜不带电荷的分子容易穿膜亲水性分子和离子的穿膜要依赖于专一性的跨膜蛋白【实验步骤】一、大体流程配置50%的鸡血红细胞悬液在显微镜下观察细胞形态混匀后，观察并记录溶血时间取6只试管分别加入等量的不同溶质6只试管分别滴加50%红细
4、胞悬液1滴姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目细胞膜通透性实验二、具体操作1.取鸡血6ml，加%NaCl溶液4ml，在1000r/min条件下离心5分钟；2.将上述离心后的红细胞按沉淀量配成50%浓度；3.每组取6支试管，分别加入如下溶液各3ml：%NaCl溶液%NaCl溶液/L甲醇溶液/L丙三醇溶液6%葡萄糖溶液2%TritonX-1004.向上述6支试管中分别加入50%红细胞悬液1滴，轻摇混匀，观察试管中是否有溶血现象发生，记录溶血时间，并于显微镜下观察各溶液的细胞。【实验结果与分析】I.实验结果图1:%NaCl溶液图2:%NaCl溶液图3：/L甲醇溶液姓名班级1
5、3级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目细胞膜通透性实验图4：丙三醇溶液图5：丙三醇溶液图6：丙三醇溶液图7：葡萄糖溶液图8：TritonX-100II.观察记录表姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目细胞膜通透性实验III.实验分析1号溶液和鸡血是等渗的，在短时间内不发生溶血本次实验中控制溶血观察时间在1h内；2号溶液为低渗溶液，发生完全溶血，因此可将1号、2号溶液作为对照和另四种溶液进行比对；3号甲醇溶液中的鸡血红细胞溶血速度很快，在几十秒内就已完全溶血，因甲醇的脂溶性高、分子量小，进入细胞的速度很快，因此在操作过程中要求速度快，在完全溶血前做好装片在显
6、微镜下观察；4号丙三醇溶液虽然脂溶性较高，但分子量较大，因此进入细胞的速度慢，溶血过程缓慢，在20min左右发现有溶血的细胞，在40min以后发现有个别细胞在显微镜下的形态有变化，因丙三醇进入细胞，且其对光的折射率很高，使细胞看上去有缺口；5号葡萄糖溶液，因其分子量过大，进入细胞的速度很慢，在1小时的观察中，未发生溶血性实验分光光度法测定1、原理根据红细胞破裂释放出来的血红素在可见光波长段具有最大吸收的原理,采用分光光度法测定受试物的溶血程度。2、实验方法取新鲜血液8mL,肝素抗凝,加入%生理盐水稀释。向1mL纳米粒溶液()中加入100L稀释血液,于37摇床中温浴一定时间后,750g离心5mi
7、n以去除完整的红细胞及红细胞碎片。将离心得到的上清液加入到2mL乙醇/盐酸混合溶液(39:1;99%乙醇(v/v):37%盐酸(w/v)中沉淀除血红蛋白外溶液中的所有组份,再以750g离心5min,取上清于紫外分光光度计398nm处测吸光度值。其中阳性对照(positivecontrol,pc)为蒸馏水,阴性对照(negativecontrol,nc)为%生理盐水,均用同样方法处理得纳米粒溶液的溶血率(Hemolysisrate,HR%)组别新鲜血液mL蒸馏水%生理盐水材料3结果观察:最大吸收波长的确定:取阳性管的上清液在紫外可见分光光度计上扫描,测得最大吸收波长。溶血率的测定:将各管的溶液置
8、入干燥离心管中离心,取上清在分光光度计上,在最大吸收波长处,以阴性管为空白读取各管A值。4结果判断:用下式计算各试验管的溶血率%:溶血率(%)=(A试-A阴)/(A阳-A阴)100%式中:试为试验管吸光度;阴为阴性对照管吸光度;阳为阳性对照管吸光度。一般溶血率5%,否则不宜用于临床。阴性对照组8010阳性对照组8100试验组8001实验三补体溶血实验一、实验目的：了解溶血反应的原理，掌握溶血反应的基本操作方法二、实验原理：将绵羊红细胞做抗原注射家兔体内，经一定潜伏期，家兔血清中即出现特异性抗体，此种抗体称溶血素，它可以与绵羊红细胞结合，此时若加入补体，即可激活补体的经典途径，则呈现溶血现象。三、实验材料1、溶血素（1：1000)、补体（1：30)、绵羊红细胞（1%)、生理盐水2、试管、吸管、试管架等四、实验方法1、按下表将试管4支排成一排，2、震荡混匀，37水浴30分钟。五、实验结果实验管因发生溶血而变红色透明，其余管为红细胞悬液。六、注意事项1、取样品的吸管不可混用；加样力求准确；2、SRBC吹匀后再加；3、补体稳定性差：T、pH、连续吹打等都使活性下降，所以置于冰浴中，用时再取；加入补体后轻轻吹打。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。
