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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划医学微生物学,血粪便标本的细菌学检查实验报告课程名称：微生物学检验技术授课专业：医学检验学时：4学时实验一粪便标本的细菌学检验一、实验目的熟悉粪便标本的采集方法与注意事项。掌握粪便标本的细菌学鉴定方法。二、试验器材粪便培养基接种环酒精灯显微镜抗血清等三、实验内容标本的采集：多见于急性腹泻及用药前采用自然排便法采集，也可用直肠拭子法采集。自然排便法：取新鲜的粪便2-3克放无菌容器内立即送检，挑取脓血粘液便，液体粪便取絮状物。直肠拭子法：排便困难患者或幼儿，将拭子前端用无菌生理盐水或甘油
2、湿润，然后插入肛门约4-5厘米，轻轻在直肠内旋转，取其粘液放于无菌试管中送检。注意事项：在用药前采集注意无菌操作，防止杂菌污染，用无菌的广口瓶或洁净的容器装及时送检和接种标本用完后及时进行消毒处理，防止实验室污染。检验程序粪便或肛拭子分离培养SSMAC3524小时观察细菌生长情况Gs染色镜检纯培养药敏试验3524小时需氧培养厌氧培养初步生化反应查编码氧化酶四、实验安排制作培养基第一台SS平板16个，第二台MAC16个，第三台双糖铁16支，五、实验准备无菌中号试管32无菌小号试管16无菌中号平板32SS32*20MACKIA枸橼酸盐蛋白胨水16葡胨水尿素培养基16半固体1620%葡萄糖%酚红15
3、0%尿素1血清学鉴定报告结果葡萄糖蛋白胨水32支尿素16支蛋白胨水16支支班支*5班班毫升班32*20毫升班16支*3毫升班16支*3毫升班支*2毫升班16支*2*2毫升班支*2毫升班支*2毫升班1瓶/教室瓶/教室瓶/教室枸橼酸盐16支半固体16支无菌5ml吸管2筒无菌1ml吸管2筒脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业：学号：姓名：一实验目的：从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理，树立牢固的无菌观念。二实验器材：试管架,酒精灯,污物盘，普通冰箱，隔水式电热恒温培养箱，奥林巴斯CX21型生物显微镜，乙醇乙醚，吸水纸，石蜡油，拭镜纸
4、，染色架，革兰染色瓶，1500W电炉，石棉网，手套，酒精棉球，镊子，碘酒棉球,接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、冷藏室、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子三方法与步骤：1培养基的制备、消毒和灭菌:1.调配溶化矫正pH分装灭菌检定保存。2.干粉培养基蒸馏水加热溶化分装灭菌检定保存。细菌的分离培养:采用平板划线分离法，将取脓汁和粪便标本中混杂的多种细菌，分别在普通平板和伊红美蓝固体培养基表面划线，使之分散成单个细菌，在37培养1824h，从而分离出单个菌落。细菌
5、的纯培养：脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落；粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落。挑选这四种不同菌落分别在斜面培养基上接种细菌的形态学检查：涂片制备干燥固定革兰染色细菌的生化试验等:糖发酵试验,细菌药物敏感性试验,血浆凝固酶试验,半固体接种法,痢疾血清玻片凝集反应结果观察、分析、总结四结果与讨论结果讨论：1.在制备好培养基后，我们首先采用的是平板划线分离法，从脓汁标本中分离出黄色和白色两种菌落在显微镜下观察，这两株细菌均为G+球菌，排列不规则，呈葡萄串状，是典型的葡萄球菌再结合菌落或菌苔颜色，可初步断定，这两株葡萄球菌分别是金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌再通过血浆凝固酶试
6、验鉴别，金黄色葡萄球菌是致病菌。2.用伊红美蓝平板，从粪便标本中分离出紫黑色具有金属光泽和粉红色半透明菌落。紫黑色菌落是能分解乳糖的大肠埃希菌。粉红色菌落是不能分解乳糖的致病菌。显微镜下，它们都是G-杆菌，散在排列，从形态上不能鉴别是什么细菌。经糖发酵试验，半固体动力试验，血清学试验结果鉴定，它们分别是大肠埃希菌和福氏志贺菌。在实验过程中，出现以下情况：1.开始做实验的时候，可能是第一次做微生物实验，很多操作都不规范。例如，没有在无菌操作区进行操作；没有坐着操作；操作时经常会和旁边同学交流；棉塞下端接触到管口外的地方；试管用完后忘记将管口迅速通过火焰3次等等。这些错误的操作的发生，都因为没有养
7、成无菌操作的习惯，应加以改进。2.在培养基上接种培养细菌后，出现有的培养基显示的细菌数量聚集在一起，没有形成单菌落，这是因为，划线的时候力度不对，把琼脂给划破了，标本都渗进了琼脂里面，再用接种环划线时也不能将细菌分离。3.在进行糖发酵试验时，结果显示该有气体产生的却没有气体产生。这可能是因为我们试验完成后，管口朝上，反应过程中产生的气体溢出，观察不到正确的实验结果。综上所述，对病原菌的正确检测对指导临床用药具有重要意义，只有在正确知道细菌种类的情况下才能对菌用药，否则就会容易造成耐药性的产生，不容易治愈疾病。在试验过程中必须严格按照试验的要求去做，操作者应树立一种无菌概念，尽量在无菌环境下操作
8、，既能确保能够得出正确的实验结果，又保证操作者的安全和环境不受污染。医学微生物学实验报告姓名_学号_年级_组别_实验名称实验者日期脓汁和粪便标本中病原菌的检测合作者指导老师一、实验目的1、掌握培养基的制备的原则和一般方法2、掌握细菌的分离培养方法3、掌握油镜的正确使用，细菌标本图片的制备4、掌握细菌的形革兰氏染色法以及形态学检查方法5、熟悉细菌的生化试验方法的原理及方法6、掌握玻片凝集试验的原理及方法二、实验器材1、5ml试管15支、托盘天平、锥形瓶、营养肉汤干粉培养基、量筒、使馆狂、酒精灯、洗耳球、刻度吸管2、脓汁标本1支，粪便标本1支、伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个、接种环、酒精灯3、
9、斜面4支、细菌分离培养物4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把。6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。三、方法与步骤流程图：1、营养肉汤培养基的制备称取营养肉汤干粉培养基于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水溶解加热煮沸1次，加热时需要摇动分装于15支小试管中，每支3ml集中放在试管筐中，罩上硫酸纸和牛皮纸，用橡皮筋包扎好灭菌2、细菌的分离培养平板画线法：小组分工：甲脓汁标本营养琼脂平板丙粪便标本伊红美蓝平板乙
10、脓汁标本营养琼脂平板丁粪便标本伊红美蓝平板步骤：点燃酒精灯，把接种环在酒精灯上烧灼灭菌，金属杆快速通过火焰23次，以杀灭表面微生物。取出标本，在火焰旁边，左手斜持标本管下端，右手小指夹住试管棉塞上端，缓慢拔出棉塞并夹持之，管口迅速通过火焰3次将冷却的接种环沾取标本1环，管口迅速通过火焰灭菌后塞上棉塞放回。接种环与平板呈3040度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。画完第一区要烧掉接种环上多余的标本。转动平板，转动平板，通过第一区57次，使接种环重新沾上少量细菌，同样的方法划过第二到五区，接种环呈递减次数地通过第二到第四区。
11、平板倒置，37培养1824h,观察结果。3、细菌的纯培养分工：甲金黄,乙白色。丙紫黑,丁粉红。步骤：取制作的平板，在菌落分布最稀疏的区域，选择平板上典型的、容易挑取的单菌落。接种环套住菌落，轻轻刮取细菌。接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉一条细菌接种线。再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线。37培养24小时，观察结果。4、细菌形态学检查加样枪取盐水左3ul、右3ul,水滴间距小于2cm。挑取菌苔少许与生理盐水混匀，涂成1cm2大小的均匀薄膜涂毕，环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，将接种环通过火焰灭菌涂片在室温干燥或烘干，手持玻片一端，标本面朝上，在火焰外层快速通过23次，将标本固定，促使菌
12、体蛋白质凝固，固定在载玻片上，以免染色水洗的时候，细菌被水洗掉。革兰染色：初染：结晶紫初染1分钟水洗媒染：卢戈碘液媒染1分钟水洗脱色：95乙醇脱色约20秒钟水洗复染：稀释品红复染1分钟水洗吸干,镜检。5、液体培养基接种分组：甲金黄乙白色,丙紫黑丁粉红。无菌操作，接种环斜面取菌，在靠近培养基液面管壁上，上下研磨接种。在管壁上，将接种环内的菌膜拍破。退出接种环，烧灼灭菌。6、细菌的生化实验半固体穿刺接种法分工：甲紫黑,乙紫黑；丙粉红,丁粉红。无菌操作，接种针斜面取菌，从半固体中心,垂直刺入，到达培养基底部5分之4处，再循原来的路线,退出接种针。管口、接种针经火焰烧灼灭菌。细菌的糖发酵试验分工：甲紫
13、黑葡萄糖丙粉红葡萄糖乙紫黑乳糖丁粉红乳糖用砂轮在糖发酵管液面上方23cm处，切割一道切痕。将管子打开，管口烧灼灭菌接种针针尖斜面取菌，伸入培养基内，在管壁上，上下研磨接种。管口朝向相同，放置在平皿内。抗菌素敏感性试验。平板密集划线接种细菌。每次将平板旋转90，保证菌液均匀分布。设计三点，作标记：青、链、庆。呈等边三角距离，点距离平皿边缘约15mm。镊子火焰消毒，夹取相应的药物纸片，平贴在已设定的位置上，按压，镊子火焰灭菌。做标记，371824小时培养，观察结果。血浆凝固酶试验兔血清+白色和黄色取2滴兔血浆置于洁净的玻片上。分别用接种环取白色和黄色菌苔(约23个菌落的菌量)与血浆研磨混合，立即观察结果。菌液出现明显凝块者为阳性，否则为阴性。7、细菌的血清学试验取洁净的载玻片一张，将磨面近端设为对照区，滴加生理盐水15ul。远端设为试验区，滴加福氏志贺菌诊断血清15ul用接种环分别取粉红色菌苔，约2个小菌落的菌量，研磨于盐水或血清内，混合均匀，涂抹展开。载玻片来回倾侧，让菌液充分混匀，凝集速度更快、结果更清楚。菌液凝集者记为阳性，菌液均匀混浊记为阴性四、结果与讨论1、营养肉汤培养基的制备目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个
