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1、月亮县中医院项 目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_13页码：第- 57 -页，共57页检验科免疫SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101免疫SOP手册目录编 号名 称页 面SOP_13-1酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理3-7SOP_13-2雷杜RT6100酶标分析仪标准操作程序8-10SOP_13-3雷杜RT-3000洗板机标准操作程序11-12SOP_13-4酶免项目标准操作程序13-25SOP_13-5金标免疫项目标准操作程序26-38S
2、OP_13-6手工免疫检验项目标准操作程序39-42SOP_13-7传染病免疫检验室内质控的标准操作规程43-45SOP_13-8传染病免疫检验室间质评（EQA）标准操作规程46-47SOP_13-9梅里埃vidas免疫荧光分析仪标准操作程序48-54SOP_13-10锦瑞PA200特定蛋白仪标准操作程序55-56文件审批者：发布日期：操作者从事本项工作前，必须认真学习并掌握本手册的内容，严格按照操作规程操作！学习者:休订书册与增补程序内容与日期：学习者：休订书册与增补程序内容与日期：学习者：SOP_13-1 酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理与注意事项一、基本原理1、包被1.1、固相载体
3、的要求（1）、结合抗体或抗原的容量大 （2）、抗体或抗原牢固地固定在其表面 （3）、不影响免疫反应性 （4）、利于反应充分进行 （5）、固相方法简便易行，快速经济1.2、固相载体的材料：聚笨乙烯1.3、包被coating将抗原或抗体结合于固相载体。1.4、封闭blocking用1%5%的牛血清白蛋白或5%20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附。2、反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体。标记酶的要求：(1)、活性高(2)、性质稳定(3)、专一性强(4)、酶催化底物的显色信号易于判断和测量(5)、方法敏感，重复性好，简单易行(6)、酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉 常用酶
4、辣根过氧化物酶HRP（ELISA中应用最为广泛的标记用酶）3、洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离。4、底物显色 HRPDH2+H2O2 D+2H2O H2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很高。供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种。常用底物：四甲基联苯胺TMB四甲基联苯胺TMB是ELISA中应用最广泛的底物。TMB反应后显蓝色 ，加酸终止反应后变为黄色,测定波长450nm ，稳定，无致癌性。二、常用方法与原理1、双抗体夹心法方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色应用：
5、 二价或二价以上的较大分子抗原测定 乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等2、双抗原夹心法原理：类似双抗体夹心法 操作步骤：类似双抗体夹心法 应用：乙型肝炎表面抗体3、竞争法（测抗原）方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）4、竞争法（测抗体）原理：类似检测抗原的竞争法应用：乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的检测 5、间接法方法： 用已知抗原包被，加入待测血清，
6、再加酶标的抗人IgG（抗抗体或二抗）加底物显色。优点： 一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。应用： 常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定。6、捕获法方法：抗人IgM链抗体包被捕获待测标本中IgM类抗体加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体底物显色应用：病原体急性感染诊断中的IgM型抗体、甲型肝炎HAV-IgM抗体 、乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体SOP_13-2 雷杜RT6100酶标分析仪标准操作程序型号：RT6100型
7、 产地： 机组：RT6100型酶标分析仪主机+稳压器+中文电脑操作系统保管：设备科一、目的：确保仪器正常运转，统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。二、适用范围：酶标分析定性定量检测 三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作
8、步骤：1 原理：1.1夹心法：包被：抗体经4过夜，物理吸附在固相固相载体（聚苯乙烯微孔）上，洗涤备用（为成品）。加样：加入样本抗原，经37孵育，形成抗原抗体复合物。洗脱去非特异性物质。竞争：加酶标底抗体后再经孵育，形成竞争性结合，洗涤。显色：加入底物与免疫复合物反应，再加显色剂而产生颜色。终止：加终止液，反应停止。比色：通过酶标仪测定，其与样品的抗原量成比例。1.2计算方法CUTOFF（临界值） 夹心法=阴性2.1 竞争抑制法=阴性对照孔OD值0.2 *阴性对照孔OD值0.1应重新计算；0.05时按0.05计算；0.050.1按实际计算。夹心法：样品O
9、D值/C.O1为阳性，1为阴性。竞争抑制法：样品OD值/C.O1为阳性，1为阴性2 试剂：两对半、HIV、HCV为厦门新创公司产品，AFP、CEA为安图公司产品。3 方法：3.1样品采集：取静脉血5mL至采血管，离心后取血清备用。3.2开机：先开稳压电源，再开主机、电脑、中文操作系统，应开机5分钟后光源稳定再使用。4 相关基本操作： 4.1开机先打开酶标仪的电源开关，然后双击桌面上的应用程序，选择用名并输入密码，仪器自检完后即可进入主菜单。注意：必须先开酶标仪后打开程序，否则仪器无法完成自检。4.2项目设置 在开展一个新项目前，必须设置好这个项目的各项参数。 在主菜
10、单下点击项目设置图标，进入项目设置界面，界面的左边会显示所有已设置的项目（新机中应无项目）；如果要新增一个项目，点击屏幕左下方的新建按钮，即显示新增项目界面，以荣盛乙肝核心抗体试剂盒为例，各参数的设置如下。（灰色的输入框表示此项目不需要输入该参数）项目名称：有英文输入项目名，如“HbcAb” (必须输入)中文名称：输入项目的中文名，如“乙肝核心抗体”。（可以不输）单位：选择s/cpv，也可不选。（若要选择单位必须先在测试项目下的项目单位处设置后才可以选择）测量方法：选择“终点法”（必须输入） 计算方法：选择“Cut-off”（必须输入）双样本：每份样本做两次结果取平均值
11、（一般选择“否”）主波长：根据试剂说明书选择“450” 次波长：选择“630”（推荐使用）双阈值模式：选择“否”。（一些特定项目才能用到）参考下限：此项输入“1” 参考上限：此项输入“999”试剂名称：选择“荣盛”，也可不选。（若要选择必须先在测试项目下的试剂信息处设置后才可以选择）COV1：在此输入“0.3”阴性对照 +“0.0” 阳性对照 +“0.0”阈值血清 +“0.0”阴性对照范围：在此输入“0.04.0” （该参数为仪器的测量范围）阳性对照范围：在此输
12、入“0.04.0” （该参数为仪器的测量范围）阈值血清范围：在此输入“0.04.0” （该参数为仪器的测量范围）定性方式：根据判断方式选择，此项目选择“反向阈值”（必须输入）阴性： “1” “COV1” 阳性：“1”“COV1”质控信息：根据质控说明书设置（可不设置） 有效性判断：根据试剂说明书添加（可不设置）点击保存即完成HbcAb项目的设置，如有其它项目，依次按此设置即可。4.3 样本测试项目设置完成后，即可进入样本测试，在主菜单上点击样本测试，进入测试界面；RT-6100支持在同一个板上同时进行最多12个项目的测试，首先选择模板类型为“新建模板”，测
13、量方式为“终点法”，并在项目列表内选中测试项目，如“HbcAb”；根据需要设置布板参数及走板参数，也可以不设置；再根据用户在酶标板上的样本类型在屏幕对应的孔位依次设置样本、空白、阴性对照、阳性对照，完成后点测量按钮开始走板测试。走板完成后，系统进入吸光度显示窗口，点击定性结果及定量结果按钮可显示每个样本的定性及定量结果；点打印键可打印整板结果；确认结果无误后点击保存按钮将结果保存到数据库内；如需打印病人综合报告，则需点退出键返回到主菜单。注：测试完成后点击保存按钮非常重要，否则退出测试界面后数据将丢失。4.4打印病人综合报告 点击主菜单中的病人信息，弹出病人信息窗口，选中右边框内的
14、样本号，在左边的信息栏输入该病人的信息（如病人的姓名、年龄、检验医生等），输入完成后点保存键，点删除键可以删除选中的病人。病人信息输入完成后，点退出键返回主菜单。在主菜单下点结果查询键进入结果查询界面，选择按病人即可显示当上日的病人信息及结果，选中需要打印的样本号或选中打印全部前的可选框，点击打印键即可打印部分或者全部病人的综合报告，打印完成后点击退出键返回主菜单。4.5关机 所有测试完成，用户想关闭仪器时，在主菜单上点击退出系统按钮，系统弹出确认窗口，按是按钮即可关闭程序，然后直接关闭仪器电源开关。SOP_13-2 雷杜RT3000洗板机标准操作程序型号：RT3000
15、型 产地： 机组：RT3000型洗板机主机+稳压器保管：设备科一、目的：确保仪器正常运转，统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报
16、告。二、适用范围：血液酶免项目检验 三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1试剂：清洗液（酶标法试剂盒配套产品）2开机：检查仪器各线路是否完整，仪器插头处如溅到洗液应切断电源擦干后使用，检查洗液液面是否在要求范围内，废液瓶是否旋紧，再依次打开稳压电源，主机。3 方法：3.1键盘各键基本功能： PRIME开机后的操作界面：启动充盈过程RINSE程序1 510905044板洗 单吸 5次分配量 350uL浸泡时间 0 h 00 m 30 s启动冲洗程序
