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1、CONTROL YOUR ENVIRONMENT,VITEK,新 一 代,全自动化的微生物分析仪 独特试卡设计 简单、标准化方法 可靠结果 完整的统计功能,新 一 代,VITEK,简单的操作流程 操作人員重复性好 不同实验室可获重复性高的结果 符合质量保证体系,VITEK,检测流程,开机程序,1、顺序打开稳压器、不间断电源、打印机、显示器电源开关 2、打开VITEK主机顶上的小门，启动箱内大开关（POWER），启动大开关旁的小开关（Battery） 3、启动电脑主机开关，屏幕会出现“LOGIN:”画面，这时输入：“supv”，回车（supv四字母为小写），屏幕 出现“Password”，键入“
2、supv”，回车（supv四字母为小写，且输入的supv四个英文字母不会显示在屏幕上。） 4、稍候出现主菜单，接着出现一红色警告视窗，点击红色视窗左下方的OK键将该视窗关闭。 5、鼠标左键点击左上角主菜单的VITEK键，进入VITEK视窗，点击READER键，选择Status菜单，点击 PROCERSS ON 6、鉴定仪状态由“NOT PROCESSING”变为“PROCESSING，NEXT READ A AT XX：XX”，表明开机成功。,VITEK,VITEK 开机程序,关机程序,1、检查卡片状态： 在VITEK STATUS窗，查看A、B、C、D架的所有位置卡片的状况，确定所有卡片的鉴
3、定实验已完成，并已打印出结果。 2、终止检测程序： 在VITEK STATUS视窗点击READER，选择Status，点击PROCESS OFF，留意检测仪状态由“Processing”变为“Not Processing”，表示已停止鉴定程序。 切记：一定先执行PROCESS OFF程序，才可以执行关机程序！ 3、执行关机程序： 退出到Main Menu(主菜单)，点击SYSTEM，选择“SYSTEM MAINTENANCE”，选择“STOP THE SYSTEM”，点击左下方的EXECUTE键，系统完成关机程序后，关闭电脑主机开关（白色）。 4、按下列顺序关闭外围设备： 1）VITEK孵育/
4、检测箱 (打开检测器顶上的小门, 关闭Battery开关, 关闭POWER开关) 2）显示器 ；3) 打印机；4) 不间断电源（有圆圈标记的小按钮）；5) 稳压器,VITEK,VITEK 关机程序,GNI + 卡片 肠道杆菌 非发酵菌 NFC 卡片 非发酵菌 ANI 卡片 梭菌属 拟杆菌属,试 卡 种 类,YBC 卡片 酵母菌（念珠菌） BAC 卡片 芽胞杆菌 GPI 卡片 葡萄球菌 链球菌 李斯特菌、棒状杆菌,VITEK,BIO 卡片 液体內的细菌计数,VITEK,其 他 试 卡,定向试验,革兰氏染色,接触酶试验,氧化酶试验,革兰氏染色,原理 : 检查细菌细胞壁的渗透性,单层厚钛聚糖细胞壁,
5、不紧密外壁层(透乙醇) + 薄内壁层钛聚糖,革兰氏阳性 革兰氏阴性,- 在细菌学里最普遍的染色方法,革兰氏染色液,步骤,G(),G(),- 染色前，所有细胞是透明的,- 结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合,- 乙醇从G() 菌体洗脱结晶紫,- 用番红液复染，革兰氏阴性菌呈粉红色，革兰氏阳性菌呈兰紫色,COLOR GRAM 2 革兰氏染色剂,Color Gram 2 革兰氏染色剂,即可用试剂 - R1 = 草酸盐 - 结晶紫溶液 - R2 = 稳定化卢哥氏 - PVP液 - R3 = 脱色剂 - R4 = 番红液 技术要点 - 使用新鲜培养细菌 (24-48小时),Color Gram 2 染色
6、剂,试剂组成 R1 = 240 ml x 1 R2 = 240 ml x 1 R3 = 240 ml x 1 R4 = 240 ml x 1 所有试剂带喷咀 於18-25C储存,革兰氏染色液 2 (Color Gram 2),- 特性 稳定化的碘液 PVP(聚氯乙烯吡咯烷酮)可以防止因碘挥发而变质，同时也增强了媒染效果。 更容易分别G()及G(-)菌 高质量的结晶紫和番红，无沉淀。,接触酶试验,接触酶试验,用于分辨葡萄球菌及链球菌,葡萄球菌,革兰氏阳性球菌,链球菌,接触酶,接触酶,H2O2 H2O + O2,接触酶试验,传统方法 :,=接触酶,+,=接触酶,+,原理 :,试管法,玻片法,H2O
7、2,O2,菌落,接触酶显色剂,玻片法,试管法,ID Color Catalase 接触酶试剂,容许於平板(包括血平板)上作直接检测,组成: - 增稠剂: 高粘度集中所产生的气泡, 防止试剂扩散 - Evans兰: 兰色使结果更容易阅读,- 玻片法 - 直接在平板上测试,ID COLOR CATALASE 接触酶试剂,玻片法 : 将待检菌落乳化於一滴试剂中 直接平板测试 : 将一滴试剂直接滴於平板上的菌落,步骤 :,或,即时产生气泡 (5 秒内) 代表阳性结果。,鉴定用接触酶显色剂,接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由於传统方法的弱阳性结果，这个试验没有得到充分应用。,ID Color Ca
8、talase,产品规格,氧化酶试验,氧化酶试验,用于分辨肠道杆菌及非发酶菌,氧化酶试验,- 原 理 :,TMPD,氧化 TMPD,氧 化 酶,(TMPD = 2甲基一对一苯撑二胺),货号: 55922 纸片:浸泡饱和TMPD 储存: 2-8C於暗处 有效期: 1年 组成: 2x30片小瓶装, 纸片,货号: 70460 储存: 2-30C於暗处 组成: 1个小瓶, 液体试剂,(深紫色),(透明),氧化酶试验,氧化酶纸片法,VITEK 方法,样本操作步骤及注意部分,选取纯菌落 选取纯的菌落，若不纯需二次分纯 不可用含抑制剂的培养基，取菌落时不要取到培养基 培养时间不要太长，以免菌落老化，18hr至
9、24hr 用0.45%盐水稀释 盐水用完后2-8C冷藏 盐水不可重复杀菌超过二次以上（121 C ，15分钟） 盐水及工具最好每隔二至三日杀菌一次 比浊测浓度 试管保持透明度 从冷藏取出试卡，要先放在室温一段 活菌浓度准确，尽量缩短活菌停留在盐水的时间 时间，直到温度平衡才将包装拆开 填号码时要清晰，不要填出界限 充填 吸管要弄紧 吸管接触样品部分尽量不要触及其他东西，防止污染 查看样本是否已经充填 封口 封口后，查看各个小池内是否有气泡 检查所有要填在试卡上的资料是否完整 放入培养箱/读数箱内放入前，查看培养/读数箱是否正在工作之中 将试卡放入最快被读数的架子内 箱门不要开启太久，以免箱内之
10、温度降低 培养箱后的风扇及下面之隔尘网需经常清理以防影响其散温效果，使读数箱温度过高,革兰氏阴性杆菌鉴定,氧化酶 +,氧化酶 -,GNI+鉴定卡鉴定不了,GNI+卡预期应用,革兰氏阴性杆菌鉴定(肠杆菌科Enterobacteriaceae) 非发酵革兰氏阴性杆菌鉴定 氧化酶阳性(假单胞菌属Pseudomonas) 发酵革兰氏阴性杆菌鉴定 氧化酶阳性(弧菌科Vibrionaceae),GNI+试剂卡说明资料分析,GNI+卡放入读数器/孵育器后，在212小时可产生最后鉴定报告。 在报告上提供每一生化反应结果，并列出二个最有可能的鉴定结果以及与之相应的标准化百分概率。 在某些情况下系统不能正常地作出
11、最后鉴定，这时在报告上会打印出一条解释或说明这一情况的信息。,在GNI+ 卡中每一小时就测得一次读数并储存在VITEK计算机中直到最后报告产生。 每一孔的百分变化值与其相应的阈值相比较，等于高于阈值为阳性反应(+)。反之，低于阈值，则为阴性反应(-)。到下一次读数后百分变化值再一次进行计算，并与阈值相比较。 对于脱羧酶孔试验结果必须将测定孔变化百分率减去阴性对照孔变化百分率后才能确定。如果待测菌是一个不发酵葡萄的革兰氏阴性杆菌，乳糖反应孔要与两个临界值相比较，较低值用于确定1%乳糖反应(LAC)，较高值用于确定10%乳糖反应(TLA)。氧化酶反应作为一个独立试验孔。,GNI+试剂卡说明阳性/阴
12、性反应确定,确定细菌最后鉴定可能在28h后（葡萄糖发酵菌）或412h后（葡萄糖不发酵菌）作出。不管怎样，如果葡萄糖孔在8h后变为阳性，均即可作出鉴定。,GNI+试剂卡说明确定细菌鉴定,GNI+试剂卡说明确定细菌鉴定,有些葡萄糖发酵菌要在6h后才能作出鉴定。这些菌是：嗜水气单胞、豚鼠气单胞、维罗纳气单胞温和生物变种、克吕沃尔氏菌属、美人鱼发光杆菌、痢疾志贺氏菌、解藻朊酸弧菌、河流弧菌、创伤弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、弗氏耶尔森氏菌、克氏耶尔森氏菌和中间耶尔森氏菌。,有些葡萄糖非发酵菌要在12h后才能作出鉴定。这些菌是：推测为鲁氏/琼氏不动杆菌、木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种、支气管炎博德氏菌、鼻疽
13、伯克霍尔德氏菌、假鼻疽伯克霍尔德氏菌、产吲哚黄杆菌（吲哚+）/泡囊短波单胞菌（吲哚）、脑膜脓毒性金黄杆菌（吲哚+）、气味黄杆菌、非发酵革兰氏阴性杆菌（不分解糖的和分解糖的）、人苍白杆菌、门多萨假单胞菌、施氏假单胞菌、多食鞘氨醇杆菌和解藻朊酸弧菌（注意：有些解藻朊酸弧菌的菌株在GNI+卡中不发酵葡萄糖）。,GNI+试剂卡说明确定细菌鉴定,GNI+试剂卡说明确定细菌鉴定,一旦首选细菌通过相似筛选，标准化百分概率需经检查是否大于或等于90%，如果小于90%，卡片应继续培养和鉴定。 只有当首选细菌既通过相似值筛选，也通过了标准百分概率的检查，最后鉴定报告才可能产生。 如果首选菌相似绝对值仍小于相似筛选
14、值，则在报告单上会出现“unidentified organism”（不能鉴定的细菌）。当首选菌的绝对相似值通过筛选，首选和次选菌菌名以及相应的标准化概率就会打印出来。,GNI+试剂卡说明特殊信息,几种典型的特殊信息可能会出现在GNI+卡的最后鉴定报告单上。这些特殊信息解释为什么鉴定不成功，或阐述合格鉴定的标准。,GNI+试剂卡说明特殊信息,由信息代替一个鉴定结果，包括下面二条： 1 Non-viable organism（没有活的细菌）。在GNI+卡中全部生化试验是阴性。可按如下步骤从卡第三孔中（#3）吸出样本转种在血液琼脂平皿检查细菌的活性。 a) 异丙酵或70%酒清消毒卡片复盖膜,并使其
15、自然干燥。 b) 用无菌加样头安装在加样器上,或Im1无菌注射器，穿过 膜吸出0.1-0.2ml样品。 c）样品加于血琼脂上划线，置35-37 24小时培养。,GNI+试剂卡说明特殊信息,2 Unidentified Organism（不能鉴定的细菌）：在GNI+卡中试验结果不能充分相似数据库中任何一个种或属，因此不能得到最后鉴定结果。在以下几种情况能产生这一信息： a)太多的阳性结果。通常出现在接种物是混合菌株或 在试验孔中有气泡。可从卡片第3孔吸出样品于5%绵羊血液琼脂平皿或其他合适的培养基。 b)太少阳性结果。这常常由于所配制菌悬液浓度低于接种所要求的浓度（不在VITEK比浊计的适当色区内）或由于培养物过于陈旧菌龄超过24小时而使降低或失去代谢活力。 c)待检菌是罕见特殊生物型或种，不包括在现有数据库中。,GNI+试剂卡说明限定信息,Good Confidence, Marginal Separation（好的可信性但难于区分）: 生化反应结果同时相似于数据库中两个菌，并且产生可接受的绝对相似值。但二者间难于区分，要外加一些试验进一步确定其最后鉴定（技术手册GNI+表4） Questionable 可疑的生物型(Biopattern): GNI+卡的生化试验结果不典型，勉强相似于数据库中两个种或属。分离鉴定结果可能是GNI+ 鉴定报告上未列出的第三种菌
