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1、病毒的增殖和培养,学习目标,知识目标 理解复制的定义 理解病毒复制的基本过程 掌握病毒的人工培养方式及应用 能力目标 具备病毒分离培养及利用培养特性进行病毒鉴定的理论基础,主要内容,病毒的增殖 复制的概念 复制的基本过程,病毒的培养 动物接种 禽胚接种 组织培养,重点与难点,重点 病毒复制的基本过程 病毒的人工培养方式 难点 病毒的复制过程,病毒的增殖方式复制,复制概念 是指病毒利用宿主细胞内的原料、能量、酶与场所，来合成病毒的核酸和蛋白质，然后装配成熟并释放到细胞外的过程，称为复制。,病毒复制的基本过程,吸附,静电吸附 非特异吸附 可逆 与受体结合 病毒与宿主细胞之间有选择性和有特殊亲和力的
2、特异性吸附 不可逆,穿入,有囊膜病毒的穿入 囊膜与细胞膜融合 吞饮作用,无囊膜病毒的穿入直接穿入 吞饮作用,囊膜与细胞膜融合,吞饮作用,吞饮作用,形成内吞小体,吞饮作用,有囊膜病毒的穿入,穿入（无囊膜病毒）,直接穿入,穿入（无囊膜病毒）,直接穿入,穿入（无囊膜病毒）,吞饮作用,脱壳,多数病毒的脱壳与穿入同时进行的。 不同病毒的脱壳又各有特色，例如： 新城疫病毒经溶酶体酶的作用脱壳。 痘病毒的脱壳分为两个阶段进行。 呼肠孤病毒只脱去外层衣壳，内层衣壳不脱去，形成亚病毒颗粒。 小RNA病毒在吸附的同时，就发生衣壳蛋白消失，即吸附的同时就发生了脱壳。,脱壳,生物合成,生物合成即病毒遗传信息的控制下合
3、成病毒的各种组成成分。 早期:病毒特异性酶的合成 病毒核酸复制 病毒结构蛋白质合成,生物合成,有囊膜病毒的生物合成,无囊膜病毒的生物合成,装配,新合成的病毒核酸和病毒蛋白在感染的细胞内组装成新的子代病毒。,成熟与释放,成熟 由新合成的病毒成分装配成完整的病毒。 释放 无囊膜的病毒：细胞完全裂解释放 有囊膜的病毒：出芽释放,成熟与释放,有囊膜病毒的释放 囊膜来自于细胞膜,有囊膜病毒的释放 囊膜来自于细胞核核膜,无囊膜病毒的释放,塞里基森林病毒的出芽释放,HIV 的出芽与成熟,艾滋病毒的出芽释放,病毒复制的过程,有囊膜病毒的复制,病毒的培养方式,动物接种 禽胚接种 组织培养,动物接种,动物选择 本
4、动物 实验动物 最理想的是GF动物或SPF动物。 病毒增殖结果观察 动物死亡、症状、病变等。 动物接种的用途 病原学检查，传染病诊断，疫苗生产及疫苗效力检验等。,禽胚培养,禽胚选择 最好选择SPF胚 病毒增殖结果观察 常见病变有死亡，充血、出血或出现坏死灶，禽胚畸形， 绒毛尿囊膜上出现痘斑。 接种途径 禽胚接种的用途 家禽传染病的诊断、病毒病原性的研究以及生产诊断抗原和疫苗等方面。,禽胚接种途径,绒毛尿囊膜接种 1013日龄鸡胚，如传喉。 尿囊腔接种912日龄鸡胚， 如新城疫。 卵黄囊接种 68日龄鸡胚，主要用于虫媒披膜病毒、鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的增殖 。 羊膜腔接种 1011日龄鸡胚，
5、 主要用于正粘病毒和副粘病毒。,1气室 2卵壳 3卵黄囊 4卵白 5尿囊腔 6绒毛尿囊 7胚胎 8羊水腔 9胚外体液膜用的鸡胚,组织培养,组织培养 细胞培养 细胞选择 增殖结果观察 优缺点 应用于病毒研究、疫苗生产和病毒病诊断的良好方法,细胞选择,兽医上通常用的细胞：CEF（鸡胚成纤维细胞）、PK-15株（猪肾上皮细胞）、K-L株（中国仓鼠肺）、D-K株（中国仓鼠肾）等。,增殖结果观察,病毒的致细胞病变作用（简称CPE），借助倒置显微镜即可观察到。 有的细胞不发生病变，但培养物出现红细胞吸附及血凝现象（如流感病毒等）。 有时用免疫荧光技术等血清学试验检查细胞中的病毒。,组织细胞培养病毒优缺点,组织细胞培养病毒优点： 离体活组织细胞不受机体免疫力影响，很多病毒易于生长。 便于人工选择多种敏感细胞供病毒生长。 易于观察病毒的生长特征。 便于收集病毒作进一步检查。 细胞培养病毒缺点 成本和技术水平要求较高，操作复杂，在基层单位尚未广泛应用。,谢 谢！,
