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1、圆二色谱 Circular Dichroism (CD),黄嘉欣 清华大学 2010.11.16,基本概念,平面偏振光 右旋偏振光 椭圆偏振光 光活性 圆二色性,平面偏振光（plane polarized light）,右旋偏振光,振幅保持不变，而方向周期变化，电场矢量绕传播方向螺旋前进,椭圆偏振光,（I）振幅、频率、相位完全相同，旋转方向相反的左右旋圆偏振光合成平面偏振光 （II）两束振幅不同、但频率相同，旋转方向相反的左右旋圆偏振光将合成椭圆偏振光,平面偏振光经过光学活性介质后，如两圆偏振光振 幅相同（光吸收相同），但相位不同（传播速度不、 同），合成的平面偏振光的偏振面旋转一个角度 .,
2、光活性（Optical activity）,圆二色性(circular dichroism）吸收,左右旋圆偏振光在介质中的传播速度不同，而且吸收也不相同，通过介质后平面偏振光成为椭圆偏振光,The peptide bond is inherently asymmetric & is always optically active,CD应用,1、蛋白质二级结构 2、药物与蛋白二级结构的结合 3、蛋白质折叠 4、外界环境对蛋白质构象的影响 5、膜蛋白的二级结构和超二级结构,CD signal of a protein depends on its second structure,近紫外CD谱可作
3、为一种灵敏的光谱探针，反映Trp、Tyr和Phe及二硫键所处微环境的扰动，能用来研究蛋白质三级结构精细变化。 VIP: 近紫外CD光谱测量所需蛋白质溶液的浓度一般比远紫外CD测量高12个数量级.,蛋白芳香族氨基酸残基微环境,蛋白质中芳香氨基酸残基，如色氨酸(Trp)、 酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)及二硫键处 于不对称微环境时， 在近紫外区250 320 nm，表现出 CD信号。,吸收值在0.61.2之间能获得好的信噪比，若 吸收值超过2，则数据变得不可靠。,溶剂吸收,Buffer Systems for CD Analyses,Acceptable: 1. Potassium Phosphate with KF, K2SO4 or (NH4)2SO4 as the salt. 2. Hepes, 2mM. 3. Ammonium acetate, 10mM.Avoid: Tris; NaCl; Anything optical active, e.g. Glutamate,
