专13肝胆疾病的检验 ppt课件

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1、第十三章 肝胆疾病的检验,本章教学要求：,掌握:黄疸的发生机理和各型黄疸的代谢特点及实验室鉴别诊断要点；肝功能实验生化检查指标的种类和重点项目的测定方法及评价。熟悉:肝脏的生物化学功能，胆红素代谢；各测定项目的临床意义 了解：肝脏的基本机构；肝功能实验项目选择的原则。,一、肝脏结构,（一 ）解剖学特点,双重血液供应,腹主动脉的分技肝动脉,氧,门静脉,营养,双重输出管道,肝静脉,代谢降解物,下腔静脉,胆道系统,脂溶性物质及其代谢产物,体外,第一节 概 述,（二 ）肝脏的显微结构特点,1、组织结构,2、亚细胞结构,（三 ）细胞的再生,二、肝脏的生物化学功能,排泄功能物质代谢功能生物转化,重要生化功

2、能,（一）排泄功能,主要排泄对象：胆汁酸、胆红素、氨,1、胆汁酸代谢,（1）胆汁的分泌：,胆汁功能：促进脂类的消化吸收，同时能将体内某些代谢产物及生物转化 产物不断地排入肠道随粪便排出体外。,胆汁的来源：,肝胆汁 胆囊胆汁 十二指肠,胆汁的成分：,水/胆汁酸（盐）、卵磷脂、蛋白质、脂肪酸和胆固醇,（2）胆汁酸生成及种类：,初级胆汁酸（肝细胞）次级胆汁酸（肠道）,初级游离胆汁酸 初级结合胆汁酸 （甘氨酸/牛磺酸）次级游离胆汁酸 次级结合胆汁酸 （甘氨酸/牛磺酸）,初级胆汁酸（肝细胞）,初级游离胆汁酸初级结合胆汁酸 （甘氨酸/牛磺酸）,胆酸 鹅脱氧胆酸 甘氨酸胆酸 牛磺酸胆酸 甘氨酸鹅脱氧胆酸 牛

3、磺酸鹅脱氧胆酸,次级胆汁酸（肠道）,次级游离胆汁酸次级结合胆汁酸 （甘氨酸/牛磺酸）,脱氧胆酸 石胆酸 甘氨脱氧胆酸 牛磺脱氧胆酸 甘氨酸石胆酸 牛磺酸石胆酸,（3）胆汁酸肝肠循环：,（4）胆汁酸的功能：,促进脂类消化促进脂类吸收抑制胆固醇从胆汁中析出沉淀,游离型胆汁酸,结合型胆汁酸,2、胆红素代谢,胆色素,尿胆素原粪胆素原 尿胆素 粪胆素 胆绿素 胆红素,未结合胆红素(单核吞噬细胞系统如骨髓、脾脏),结合胆红素（肝脏）,胆素原,未结合胆红素的来源与转运：,结合胆红素的来源与转运与代谢：,衰老红细胞,血红蛋白,3、血氨代谢,药物及体内含氮物质（如嘌呤、嘧啶等）,来源,去路,相对平衡,部位肝脏细

4、胞,鸟氨酸,瓜氨酸,瓜氨酸,精氨酸代琥珀酸,ATP,AMP+PPi,延胡索酸,鸟氨酸,精氨酸,H2O,尿素,天门冬氨酸,NH3,CO2,氨甲酰磷酸,+H2O,尿素循环,（二）物质代谢功能,1、营养物质代谢,2、激素及维生素代谢,(1) 在蛋白质代谢中的作用(2) 在氨基酸代谢中的作用(3) 在糖代谢中的作用(4) 在脂代谢中的作用,激素的灭活主要在肝脏进行,多种维生素能在肝细胞内储存并进行转化,（三）肝脏的生物转化,定义：,生物转化: 机体对许多外源性或内源性非营养物质进行化学转变，增加其水溶性(或极性)，使其易随胆汁、尿排出，这种体内变化过程称生物转化(biotransformation)。

5、,转化对象：,转化特点：,生理意义：保护机体,致癌、致畸,内源性非营养物:氨、胺、胆色素、激素,外源性非营养物:药物、毒物、食品防腐剂、色素,连续性， 多样性，失活与活化双重性,三、肝脏疾病的生化改变,（一）胆红素代谢障碍（黄疸）,定义:,黄疸分类:,黄疸,和阻塞性黄疸,溶血性黄疸,肝细胞性黄疸,高胆红素血症,（二）胆汁酸代谢障碍,1、胆汁酸合成障碍2、胆汁酸向肠道排出障碍3胆汁酸肠肝循环紊乱4胆汁瘀积病变时胆汁酸代谢紊乱,（三）血浆酶异常,1肝脏合成酶类:胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋白；2. 肝细胞内酶: ALT、AST 3肝脏阻塞性疾病酶活性改变：ALP、GGT4肝硬化疾病酶活性改变：单胺氧

6、化酶（MAO）,（四）血浆蛋白异常,第二节 肝功能试验,血清（浆）蛋白测定血清酶测定血清胆红素测定血清胆汁酸测定血氨测定,一、血清（浆）蛋白测定,（一）总蛋白、白蛋白、及白蛋白/球蛋白（A/G）比值测定,1总蛋白测定,化学法(双缩脲法 )、物理法、染料结合法、电泳法,染料结合法(BCG、BCP）、沉淀法,2.白蛋白测定,3A/G比值,【参考范围】,总蛋白 6080g/L 白蛋白 3555g/L 球蛋白：1532g/L A/G比值： 1.52.0/1,【临床意义】,严重肝病时，肝脏合成分子量小的蛋白质能力降低，血中 白蛋白浓度减少；而免疫系统、单核巨噬细胞合成球蛋白增加， 导致A/G比值减少。严

7、重则会出现A/G比值小于1，称为A/G比值 倒置，表示肝功能损害严重。,（二）纤维蛋白原测定,（凝血因子）,测定方法：分为三大类,根据纤维蛋白原的生物学特性测定方法,根据纤维蛋白原理化性质而建立的测定方法。,根据纤维蛋白原免疫学特点而建立的测定方法。,【参考范围】 2.224.22g/L(热沉淀比浊法),【临床意义】,(1) 纤维蛋白原增加：感染；无菌炎症；其它。,(2) 纤维蛋白原减少: 严重的肝脏疾病；,其它疾病引起纤维蛋白原减少的疾病。,（三）甲胎蛋白（1-fetoprotein，AFP）测定,测定方法：,【参考范围】成人 1030g/L 400g/L作为肝癌诊断标准,【临床意义】,酶联

8、免疫吸附法、放射免疫分析法、斑点免疫结合法、火箭电泳放射自显影法、酶联火箭电泳法等,(1) 原发性肝细胞肝癌的诊断标准：血清AFP测定值超过400g/L(400ng/ml) ； (2)活动性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的诊断,（四）其它,【临床意义】 肝豆状核变性（Wilson病）和遗传性色素沉积症,1.铜蓝蛋白测定,【参考范围】 52.9167.7 IU/L,【临床意义】 遗传性血色素沉积症铁沉积,2转铁蛋白,【原 理】 双联吡啶法,【原 理】 铜蓝蛋白具有氧化酶活性,【参考范围】 TIBC 男 5077mol/L 女5477mol/L转铁蛋白饱和度为33.0%35.0%,二、血清酶测

9、定,（一）氨基转移酶测定,1赖氏法测定ALT,（）原理： ALT催化丙氨酸(alamine)与-酮戊二酸(-oxoglutarate)之间的氨基转移 反应，生成丙酮酸(pyruvate)和谷氨酸(glutamate)。 在37及pH7.4条件下反应 30min，以2，4-二硝基苯肼终止反应，并与底物-酮戊二酸和产物-丙酮酸的 羰基生成2，4-二硝基苯腙，苯腙在碱性条件下生成红棕色，与505nm波长处读取 吸光度后计算活性。,（） 方法评价：赖氏法的实验结果需与卡门分光法的结果对比后求出； NaOH的浓度对显色有影响； 该法的重复性差。,卡门氏单位：1.0ml血清在25，340nm，反应体积3.

10、0ml,光径1.0cm时每分钟测定吸光度下降0.001，即消耗4.82 10-4mol NADH为一个卡门氏单位,【参考范围】 525卡门氏单位,【临床意义】,(2) 慢性活动性肝炎或脂肪肝：,(1) 肝细胞损伤的灵敏指标:,ALT轻度增高(100200IU),或属正常范围,2. 连续监测法测定ALT,（）原理： 采用酶偶联反应,即L-丙氨酸和-酮戊二酸在ALT作用下，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸再在LD作用下生成L-乳酸，同时NADH被氧化为NAD+,可在340nm处连续监测到NADH的消耗量,从而计算出ALT活性浓度。 双试剂法 :首先使血清与缺少-酮戊二酸的底物溶液混合，37保温5分钟

11、，将标本中所含的-酮酸(如丙酮酸)消耗完，然后，加入-酮戊二酸启动ALT催化的反应，在波长340nm处连续监测吸光度下降速率。根据线性反应期吸光度下降速率(-A/min)，来计算ALT的活性。,（） 方法评价：存在着两个副反应，会使测定结果偏高；A、血清中存在的-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH。 B、血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)增高时，在有氨存在条件下，亦能消耗NADH。 双试剂法，因温育期长，能有效地消除干扰反应，测定准确性 高，是ALT测定的首选方法；血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性；避免使用溶血标本。,3.赖氏法测定AST,（）原理： 血清中的AST可催化门冬氨酸(aspartat

12、e)与-酮戊二酸间的氨基移换，生成 草酸乙酸(oxaloacetate)和L-谷氨酸。草酸乙酸自行脱羧转变成为丙酮酸。反应60 分钟后，加入2，4-二硝基苯肼终止反应，并与酮酸生反应生成两种2，4-二硝基苯 腙。在碱性条件下,两种苯腙的吸收光谱曲线有差别，在505nm处差异最大，由草 酸乙酸转变成的丙酮酸所生成的苯腙呈色强度显著大于-酮戊二酸苯腙。据此可 用比色法测定AST活性。,（）方法评价：赖氏法的实验结果需与卡门分光法的结果对比后求出； 该法的重复性差：负干扰现象,【参考范围】 828卡门氏单位,【临床意义】,肌炎、胸膜炎、肾炎及肺炎：血清AST也可轻度增高。,心肌梗死：血清中AST活性

13、增高,各种肝病病人：血清AST的升高,4连续监测法测定AST,（）原理： 采用酶偶联反应,即L-门冬氨酸和-酮戊二酸在AST作用下，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸在苹果酸脱氢酶作用下生成L-苹果酸，同时伴有NADH转化为NAD+，在340nm监测NADH的转化速率，从而计算出AST的活性。,双试剂法 :同测定。,（）方法评价,误差可来自内源性和(或)外源性内源性干扰主要来自血清中高浓度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶(GLDH)。 外源性干扰来自试剂中污染的GLDH和AST。,【参考范围】 540 IU/L(连续监测法测定),【临床意义】 见赖氏法,(二)ALP测定,化学法,连续监测法：,鲍氏法,

14、金氏法,皮氏法,、金氏法测定ALP,（）原理：ALP在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之水解释放出酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物，根据红色深浅确定ALP的活力。,(2) 方法评价：,磷酸苯二钠比色法与更早的-甘油磷酸钠法相比具有较大的优点，如水解速度快，保温时间较短、灵敏度较高、显色稳定、不需去蛋白、操作简单、快速。但与磷酸对硝基酚连续监测法相比，准确度、精密度较低；操作比较繁琐,灵敏度低。,【参考范围】 成人：313 单位 ，儿童：528单位,ALP金氏单位定义是100ml血清，37与底物保温15分钟，产生 1mg酚为1个金氏单位。,ALP主要用

15、于诊断肝胆和骨骼疾病,【临床意义】,2.连续监测法测定ALP,（）原理：,以磷酸对硝基酚(p-nitrophenyl phosphate,4-NPP)为底物，2-氨基-2-甲基-1,3-丙醇（2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP）或二乙醇胺为磷酸基的受体。在碱性环境下，ALP催化4-NPP水解产生游离的对硝基酚，对硝基酚(p-nitrophenol，4-NP)在碱性溶液中转变成黄色。根据405nm处吸光度增高速率来计算ALP活性单位。,（）方法评价：,线性范围可达500U/L，批内CV为2.06%2.36%，批间CV为2.74%。,【参考范围】男性：112岁 15岁

16、40 150U/L，25岁 40150U/L。,【临床意义】 见金氏法,(三)谷氨酰转肽酶（GGT 或-GT）测定法 化学法（重氮反应比色法）和连续监测法。,1. 重氮反应比色法测定GGT,原理：,【参考范围】 男性 3 17 U/L； 女性 2 13 U/L,(2) 方法评价：,重氮比色法活性单位：100ml血清在37下反应1hr, 生成0.5mol的-苯胺为1个GGT活性单位。,以萘胺盐为底物，在GGT催化下，-谷氨酰基转移到甘肽分子上，同时释放出游离的-萘酚，后者与重氮盐反应，产生红色化合物，其颜色深浅与GGT浓度呈正比，通过比色法检测530nm处吸光度，进而计算酶的活性。,(1)原发性或转移性肝癌时，血中GGT明显升高。其原因是癌细胞产生的GGT增多和癌组织本身或其周围的炎症刺激作用，使肝细胞膜的通透性增加，以致血中GGT增高。 (2)阻塞性黄疸、急性肝炎、慢性肝炎活动期、胆道感染、肝硬化等都可使GGT升高。 (3)其他疾病如心肌梗塞、急性胰腺炎及某些药物等均可使血中GGT升高。,