《颅内感染的实验室诊断技术ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《颅内感染的实验室诊断技术ppt课件（62页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、颅内感染的实验室诊断 技术新进展,1.1 巢式PCR（Nested PCR） 本法需设计引物两套，对脑脊液进行两步法基因扩增，检测其中含量低的病原体。巢式PCR对革兰染色、培养或抗原检测阴性或不确定时更有检测价值。,Takahashi等用巢式PCR检测脑脊液中含量甚微的结核分枝杆菌，较传统的PCR方法敏感度高出100010000倍。Failane等对疑有BCNI的儿童脑脊液应用半巢式PCR检测脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌和流感嗜血杆菌，阳性和阴性预测值均为90%以上。,Takahashi T, Nakayama T, Tamura M, et al. Nested polymerose chain
2、 reaction for assessing the clinical course of tuberculous. meningitisJNeurology,2005,64(10):1789-1793.Failane L, Wagner M, Chesky M, et al. Simultaneous detection of nisseria meningitidis, haemophihts influenzae and Streptococcussp. by polymerase chain reaction for the diagnosis of bacterial mening
3、itisJ. Arq Neuropsiquiatr,2005,63(4):920-924.,1.2 荧光定量PCR（Real-Time Quantitative PCR RT-PCR） RT-PCR是常规PCR基础上加入荧光探针，具有准确性高、重复性好等特点，已广泛用于基因表达、病原体检测等领域。应用RT-PCR检测细菌性脑膜炎的病原菌，阳性检出率(39%)显著高于脑脊液培养(10%)。,Brajon G,Mandas D,Liciardi M,et a1.Development and field testing of a real-time PCR assay for caprine ar
4、thritis-encephaliis-Virus(CAEV)EJ3J.Open Virol J,2012,6(1):82-90Chiba N, Murayama SY, Morozumi M,et al. Rapid detection of eight causative pathogens for the diagnosis of bacterial meningitis by realtime PCRJ. J Infect Chemother,2009,15(2):92-98.,应用RT-PCR检测脑脊液中肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌敏感性和特异性分别达95.7%和94.3%
5、，且不受抗菌药物应用影响。研究表明，RT-PCR的检测周期平均比传统PCR短24小时，有助于快速诊断，缩短患者住院时间并减少住院费用。,Wu HM, Cordeiro SM, Harcourt BH, et al. Accuracy of real-time PCR, Gram stain and culture for Streptococcus pnemoniae, Neisseria meningitis and Haemoplilus influenzae meningitis diagnosisJ. BMC infections Diseases,2013,13(4):26-35.D
6、aheeJin, MD, Tae Hoon Heo, MD, Jung Hye Byeon. Analysis of clinical information and reverse transcriptase-polymerase chain reaction for early diagnosis of enteroviral meningitisJ. Korean J Pediatr 2015;58(11):446-450.,1.3 基于16SrRNA基因序列分析技术 16SrRNA基因核苷酸序列具有高度保守性，存在于所有细菌的染色体基因组中，其在保守区之间有910个变异区，利用16Sr
7、RNA可变区与恒定区的特性，设计细菌通用引物，能对临床分离的任何病原菌进行准确鉴定和定位及不同种属细菌的分类，较传统的细菌培养有更高敏感性。,应用16SrRNA基因扩增技术设计快速检测颅内感染常见病原菌的检测方法，能准确、快速且高效地检测脑脊液中病原菌。高通量测序技术与16SrRNA基因检测相结合，可以大幅度提高病原体检测速度并降低检测成本。,Ali Reza Moayedi, Abdolazim Nejatizadeh, Maryam Mohammadian. Accuracy of universal polymerase chain reaction (PCR) for detectio
8、n of bacterial meningitis among suspected patientsJ. Electronic Physician, 2015, 12: 1609-1612.Aicui Liu,Chao Wang, Zhijuan Liang.High-throughput sequencing of 16S rDNA amplicons characterizes bacterial composition in cerebrospinal fluid samples from patients with purulent meningitisJ.Drug Design, D
9、evelopment and Therapy 2015:9 44174429,1.4 基因芯片检测技术： 基因芯片技术是一种快速、高效、高通量的核酸分析技术，已广泛用于基因检测、药物或耐药基因的筛选、疾病相关基因的诊断、病原微生物感染的鉴定等领域。,侯晓霖等通过NCBI数据库检索，筛选了包括脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌及其他凝固酶阴性葡萄球菌等化脓性脑膜炎常见细菌的多条16SrRNA序列特异性探针（覆盖脑膜炎常见病原菌90%的亚种），并根据临床流行情况变化进行探针增减来满足临床需求。,侯晓霖, 梁志娟, 王振海. 化脓性脑膜炎脑脊液常见病原菌
10、基因芯片的构建J. 中国医科大学报,2013,42(1):14-18.,刘志忠等应用基因芯片法检测临床脑脊液感染常见的10个种（属）病原菌，包括金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌,与传统细菌培养比较符合率为97.0%，证实了芯片诊断技术筛查脑脊液病原菌的可行性，具有简便、快速、准确和高通量等优点，对临床样本检测及流行病学调查有重要意义。,刘志忠, 张艳, 石广志. 基因芯片法检测脑脊液病原菌的临床应用J/CD. 中华实验和临床感染病杂志:电子版,2013,6(3):210-213.,2.1 生物化学标志物 2.1.1 乳酸(La
11、ctic Acid) 脑脊液乳酸是脑组织能量代谢的底物，是鉴别细菌性及病毒性颅内感染常用的生化标志物之一，细菌性感染时其含量升高，病毒性感染时无显著改变。,Mekitarian Filho E,Horita SM,Gilio AE,et a1.Cerebrospinal fluid lactate level as a diagnostic biomarker for bacterial meningitis in childrenJ.hat J Emerg Med,2014,7:14.Morichi S, Kasshiwagi Y, Takekuma K, et al. Expression
12、 of brainderived neurotrophic factor (BDNF) in cerespinal fluid and plasmaof children with meningitis and encephslitis/enephalopathyJ. Int J Neurosci,2013,123(1):17-23.,Sakushima等对有关脑脊液乳酸检测在细菌性颅内感染诊断价值的33个研究进行荟萃分析发现，脑脊液乳酸含量升高诊断细菌性颅内感染的合并敏感性为93%，特异性为96%，当脑脊液乳酸35mg/dL时,诊断的特异性可高达99%。,Sakushima K,Hayash
13、ino Y,Kawaguchi T,et a1.Diagnostic accuracy of cerebrospinal fluid lactate for differentiating bacterial meningitis from aseptic meningitis:a meta-analysisJ.J Infect,2011,62(4):255-262,2.1.2 尿酸(Uric Acid，UA) 脑脊液中的UA是由脑细胞中核酸转化而来的，因此脑脊液UA含量可作为脑细胞损伤的指标。发生颅内感染时，脑脊液UA含量显著增高(40mol/L)，主要是由细菌感染致使脑细胞损伤、破坏，自身
14、代谢增强所致，同时也可能是由于炎症刺激使血脑屏障通透性增高，UA移行入脑脊液，使脑脊液中的UA增高。,刘晓华.脑脊液中尿酸的测定及其在儿童病毒性脑炎中的意义J.齐齐哈尔医学院学报, 2008, 29(8): 944 ,2.1.3 一氧化氮（NO） 各种伤害性刺激均可诱发脑内各区NO含量明显升高，颅内感染患者脑脊液NO含量均高于正常(20mol/L)，但就细菌或病毒感染而言差异无统计学意义(P0.05)NO升高幅度与脑损伤程度有关，与感染病因无关，N0含量测定有助于脑脊液常规、生化正常的颅内感染的诊断。,2.1.4 臭氧（Reactive Oxygen Species ） 细菌性脑膜炎患者CSF
15、中臭氧含量明显高于非脑膜炎患者，其差异具有统计学意义。便捷的臭氧检测方式是目前主要的研究方向。,Anne-Claire Lukaszewicz1, Valrie Faivre1, Hlne Bout. Multicenter Testing of the Rapid Quantification of Radical Oxygen Species in Cerebrospinal Fluid to Diagnose Bacterial MeningitisJ. Journal ,2015,May,26.,2.2 脑脊液蛋白,细菌性颅内感染发生时，脑脊液中上述各种蛋白的含量，除胱抑素C外均较病毒
16、性颅内感染时升高，而脑脊液胱抑素C水平则以病毒性颅内感染升高显著。脑脊液中新型蛋白含量的测定因不受抗生素使用的干扰，为颅内感染病原菌的鉴别诊断提供了新的方向。,Jesse S,Steinacker P,Lehnert S,et a1.A proteomic approach for the diagnosis ofbacterial meningitisJ.PLoS One,2010,5(4):e10079Tsai HC,Shi MH,Lee SS,et a1.Expression of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in the serum and cerebrospinal fluid ofpatients with meningitisJClin Microbiol Infect,2011,17(5):780-784王艳,王谷声,周世俊.血清与脑脊液降钙素原检测在儿童中枢神经系统感染的应用J右江医学,2012,40(3)：347-348张丽琴.脑脊液免疫球蛋白、乳酸脱氢酶及腺苷脱氨酶检测在成人颅内感染鉴别诊断中的临床意义J中华医院感染学杂志,2012,22(8):1752-1754,
