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1、实 验 内 容,离 体 蛙 心 灌 流,实 验 目 的,学习离体蛙心灌流的方法观察Na+、K+、Ca2+以及肾上腺素、心得安等对离体心脏活动的影响,实 验 原 理,心脏的活动具有自动节律性。动物的心脏离体后，用理化特性类似于其血浆的替代液（任氏液）灌流后，在一定的时间内，仍能有节律的收缩和舒张，改变灌流液的成分，则可引起心脏活动的改变。,实 验 原 理,心脏受交感神经和迷走神经的支配。交感神经兴奋时，其末梢释放递质-去甲肾上腺素（NA），作用于心肌细胞上的受体，使心肌收缩力增强；迷走神经兴奋时，其末梢释放递质乙酰胆碱（Ach），作用于心肌细胞膜上的M受体，对心肌细胞起抑制作用，使心肌的自律性降
2、低。用受体阻断剂（心得安）阻断受体，则相应的递质不能发挥作用。,实 验 用 品,蛙心套管、常用手术器械、蛙心夹、蛙板、棉线、毁髓针、任氏液、滴管、烧杯、5%NaCl、2%CaC12、1%KCl、0.01%心得安、0.01%肾上腺素、计算机和机械-电换能器、铁支架、双凹夹。,蟾蜍或蛙,实 验 动物,方 法 与 步 骤,一. 离体蛙心的制备（斯氏蛙心插管法） 取一只个体较大的蟾蜍，用毁髓针双毁脊髓和脑，仰卧固定于蛙板上； 暴露心脏：左手持镊提起胸骨后端的皮肤，右手持剪将皮肤剪一小口，然后将剪刀由开口处伸入皮下，朝向两侧下颌角方向剪开皮肤，并将皮肤掀向头端。用镊子提起胸骨后方的腹肌，在腹肌上剪一小口
3、,将粗剪刀紧贴胸壁伸入胸腔(避免损伤下面的心脏和血管)，沿皮肤切口方向剪开肌肉，剪断左右乌喙骨和锁骨，使创口成一个倒三角形。左手持眼科镊，小心提起心包膜，右手用眼科剪剪开心包膜,将心包膜剥离,使心脏完全暴露。用眼科剪小心剪去左右主动脉干周围的心包膜和系膜。,在左主动脉下穿一线,距动脉圆锥5mm处结扎。再在左、右两主动脉干下穿一线，打一活节备用。左手提起左动脉干上的结扎线，右手用眼科剪在动脉圆锥前端沿向心方向剪一斜口，将少量任氏液加入斯氏蛙心套管中，立即用右手食指堵塞住套管上口，然后将套管尖端由左主动脉上的剪口插入动脉圆锥。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥部后方及
4、心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内，不可插入太深,以免插破心室壁或心室堵住套管下口。,此时可见套管中液面随心脏搏动而上下移动。用滴管吸去套管中的血液，补充新鲜的任氏液，如此反复几次，使任氏液完全替代血液,若套管插入心室未见液面上下移动,则可能是凝血小块堵塞了套管下口。提起备用线,将左主动脉连同插入的套管扎紧,再将结扎线固定在套管的小钩上。剪断结扎线上方的血管,轻轻提起套管和心脏,在心脏的下方绕一线，将左右肺静脉及前后腔静脉一起结扎(注意切勿损坏静脉窦),于结扎线下方剪去所有牵连的组织,将心脏摘出。保持套管内液面恒定高度,即灌流液充满套管三分之一，即可进行实验。,二. 连接实验装置：离体蛙心制
5、备好后，将套管固定在铁支架上，用带线蛙心夹夹住少许心尖肌肉，蛙心夹上的系线连至张力换能器的着力点上，注意不要过度牵拉心脏。然后将张力换能器连在计算机上。 三. 开机 实验系统 实验项目 循环实验 蛙心灌流,观 察 项 目,向套管内加入任氏液，作好正常标记，观察正常的心搏曲线。 向套管内加入24滴5%的NaCL溶液，立即用专门滴管轻轻混匀，同时作好加药标记，观察心搏曲线的频率振幅变化。 向套管内加入12滴2 %的CaC12溶液，立即用专门滴管轻轻混匀，同时作好加药标记，观察心搏曲线的频率振幅变化。,观 察 项 目,向套管内加入12滴1%KCL溶液，同上所述，混匀、标记、描记并观察心搏曲线。 向套
6、管内加入12滴0.01%肾上腺素溶液，同上所述，混匀、标记、描记并观察心搏曲线。 向套管内加入12滴0.01%心得安溶液，描记并观察心搏曲线变化。然后加入与前一步等量的肾上腺素溶液，描记并观察心搏曲线变化。,以上每步当曲线出现明显变化时，立即吸去套管内的灌流液，用新鲜的任氏液换洗几次，同时作好换洗记号。使灌洗液面保持原高度。等待心搏恢复正常。然后做下一观察项目。,注 意 事 项,分离血管时，应尽量去净心包膜。 每次换液时，液面均应保持恒定的高度，即灌流液充满套管三分之一。 每次加药应用专门的滴管，并逐滴加入，用滴管轻轻混匀，使之迅速发挥作用，若作用不明显再逐滴补加。 随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润状态。 每次加药出现明显效应后，应立即换洗灌流液数次，待心跳恢复正常后，再进行下一步骤。 实验顺序可以根据心搏情况临时改变，如心搏变慢变弱时，可先加入肾上腺素或Ca2+ 。,离体蛙心灌流实验装置,蛙心套管,支架,换能器,蛙心,
