微生物及无菌知识培训、六步洗手法及进入

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1、,微生物及无菌知识培训 六步洗手法 进入洁净车间的程序,微生物及无菌知识培训,一、前言 我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。在一般空气中，微生物达8003500个/m3，在土壤中达1500108个/g，在严重污染的水中可达107个/ml。（饮用水要求细菌总数100个/ml，大肠杆菌3个/ml。经水塔或贮水池贮存后，短期内可繁殖至105106个/ml。）人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有440万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达101000亿个。可以说微生物是无处不在，无处不有。许多以前被人们认为是极端（高温、高压、强酸、强碱、低温等）甚至是致死的环境，现在已发现生活着各

2、种类型的微生物（称为极端微,生物）。事实说明，微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。 微生物种类繁多，有的对人有益，有的有害，有的无益也无害。但在药品生产过程中，不可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证药品的安全有效，需要对其进行控制。空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气中，1m以下者处于悬浮状态，10m以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。所以也要对尘粒进行控制。 大量临床资料表明，注射剂（尤其是静脉注射剂）如污染了712m的尘粒，可导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的还会致人死命。而如果污染了细菌，轻则局部红肿化脓，重则引起全身细菌性感,染。因此

3、，对微生物和尘粒进行更加严格的控制对于针剂生产洁净室非常重要。 人是洁净室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/min，一般活动时发菌量为1501000个/min，行走时发菌量为9002500个/min。咳嗽一次发菌量为70700个/min，喷嚏一次为400060000个/min。所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。 二微生物简介,微生物是广泛存在于自然界的一群体形微小（直径小于1mm）、结构简单、肉眼看不见，必须藉助光学或电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的生物。需要说明

4、的是，微生物是一个比较笼统的概念，界线有时非常模糊。如单细胞藻类和一些原生动物也应算是微生物，但通常它们并不放在微生物中进行研究。 微生物具有以下特点：体积小，面积大；吸收多，转化快（2000倍体重/h）；生长旺，繁殖快（20min分裂一次）；易变异，适应强；分布广，种类多（10万种以上）。 微生物按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类： 1真核细胞型 细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体；胞质内有完整的细胞,器（如内质网、核糖体及线粒体等）。真菌属于此类型微生物。 2原核细胞型 细胞核分化程度低，仅有原始核质，没有核膜与核仁；细胞器不很完善。这类微生物种类众多，有细菌、支原体、

5、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌。 3非细胞型 没有典型的细胞结构，亦无产生能量的酶系统，只能在活细胞内生长繁殖。体积微小，能通过除菌滤器。病毒属于此类型微生物。 微生物在自然界中的分布极为广泛，空气、土壤、江河、湖泊、海洋等都有数量不等、种类不一的微生物存在。在人类、动物和植物的体表及其与外界相通的腔道中也有多种微生物存在。,绝大多数微生物对人类和动、植物的生存是有益而必需的。自然界中氮、碳、硫等多种元素循环靠微生物的代谢活动来进行。例如空气中的大量氮气只有依靠微生物的作用才能被植物吸收，土壤中的微生物能将动、植物蛋白质转化为无机含氮化合物，以供植物生长的需要，而植物又为人类和动物所利用。因

6、此，没有微生物，植物就不能新陈代谢，而人类和动物也将无法生存。 另一方面，由极少数微生物引起的传染病发病快、死亡率高、传播迅速、传播范围广，严重危害着人民健康。 三微生物的形态结构,1细菌（原核单细胞生物） 细菌按形状可分为：球菌（0.52m）、杆菌（长15m，宽0.31m）和螺形菌（大小与杆菌相似）。 按革兰氏染色法染色的不同，分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。革兰氏阳性菌的细胞壁表面含较多的磷壁酸，会产生外毒素，如金黄色葡萄球菌；革兰氏阴性菌的细胞壁表面多含脂蛋白和脂多糖，会产生内毒素（即热原），如大肠杆菌。 细菌一般有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核，有的还有荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞等特殊结构

7、。 细菌一般为无性繁殖，以二分法繁殖，几十分钟或12小时分裂一次。,资料：关于芽孢 在温度逐渐降低或营养缺乏时，芽胞杆菌属（如炭疽杆菌）及梭状芽胞杆菌属（如破伤风杆菌）能在菌体内形成一个折光性很强的不易着色小体，称为芽胞。芽胞是处于休眠状态的细菌，并非细菌的繁殖体，当环境适宜时，可恢复生长繁殖。 芽胞在自然界分布广泛，要注意防止污染。芽胞的抵抗力强，对热力、干燥、辐射、化学消毒剂等理化因素均有强大的抵抗力，用一般的方法不易将其杀死。有的芽胞可耐100沸水煮沸数小时。杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。当进行消毒灭菌时往往以芽胞是否被杀死作为判断灭菌效果的指标。 2霉菌（丝状真菌的通称，真核多细

8、胞生物）,霉菌是真菌的一部分。在培养基上长成绒毛状或棉絮状的菌丝体的真菌统称为霉菌。 霉菌细胞呈狭长的管状，称为菌丝。菌丝直径比细菌、放线菌大，约210m。菌丝分枝连接，交错集合在一起的总体称为菌丝体。 霉菌大多数是多细胞微生物，菌丝细胞由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核和各种细胞器组成。细胞壁很薄，往往在表面产生色素，使菌落出现各种颜色。 霉菌靠孢子繁殖，有无性繁殖和有性繁殖两种方式，以无性繁殖为主。 有些真菌可用酿酒造酱，或用于发酵生产柠檬酸、葡萄糖酸、酶、抗生素（如青霉素、头孢菌素）；少数真菌能引起各种真菌病。真菌产生的真菌毒素（如黄曲霉素）有毒。,3酵母菌（真核单细胞生物，属真菌） 酵母

9、菌以单细胞存在，呈圆形、卵圆形和香肠形，比细菌大，细胞长530m，宽15m。细胞结构有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核和各种细胞器等。 酵母菌的增殖分无性繁殖和有性繁殖两个阶段，有三种方式：芽殖、裂殖、孢子生殖。 酵母菌是重要的工业微生物，用于酿酒，生产单细胞蛋白、B族维生素、核酸、辅酶A、细胞色素C等。一般对人体无害。 4放线菌（原核单细胞生物） 放线菌有生长发育良好的菌丝体，呈分枝状，菌丝宽为0.21.2m，革兰氏阳性。其内部构造与细菌相似，无完整的细胞核。菌落常呈幅射状，因此称放线菌。,繁殖方式为无性孢子繁殖。最适pH6.77.5，温度2530。 放线菌可用于生产抗生素、维生素和酶类，少数

10、可引起人畜放线菌病。 5病毒 病毒是一类体积十分微小，结构简单，只含一种核酸（DNA或RNA），没有产生能量的酶系统，只能在活细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物。病毒在自然界分布非常广泛，在所有其它生物中都有病毒寄居。病毒是最常见的致病微生物，人类传染病中大约75%是由病毒引起的。 病毒体主要由核酸和蛋白质组成。病毒体积微小，最大直径300nm（如牛痘病毒），最小直径20nm（如口蹄疫病毒），绝大多数在,150nm以下，能通过细菌滤器，用普通光学显微镜看不见，必须用电子显微镜放大数千至数万倍才能看见。形态多呈球形，少数为杆状或砖形。噬菌体（细菌病毒）有呈蝌蚪状的。 朊病毒于1982年发现，它

11、很特殊，与一般病毒不同，是一种异常蛋白质，不含有核酸。与疯牛病（牛海绵状脑病）及人克雅氏病关系密切。其复制方式不明。 四微生物的营养 1水分：水占细胞浆的70%90%，是细胞的重要组成成分。较普遍的观点认为：只有,在含水的环境中微生物才能存活。但也有人发现在无水碳氢化合物中微生物可长期存活。 2碳源：碳源是构成细胞的重要物质。有些微生物的碳源必须来自有机碳化合物如糖、蛋白质、脂肪、有机酸等（同时利用其化学能），属异养型；有些微生物不需有机碳化合物，以CO2为碳源，属自养型（分为光能自养型和化能自养型）。 3氮源：氮是组成蛋白质和核酸的重要元素。 4无机盐类：细菌所需无机盐包括磷、硫、镁、铁、钾

12、、钠、钙、氯、锰、锌、钴、铜等。其中磷、硫、镁、钾、钠、铁需要量较多，其他只需微量。 5生长因子：生长因子是某些微生物生长发,育所必需，而其自身又不能合成的一类营养物质。包括维生素、嘌呤和嘧啶等。 五微生物生长的影响因素 1营养物 2pH值：各种微生物都有其最适宜的pH值，大多数细菌最适pH为6.87.4，但一般有较大的容忍度，在49也可存活和生长，少数细菌能在极端pH值范围内生长。真菌适于pH值36的微酸性环境，但在210也可生长。 3温度：微生物适于生长繁殖要有适宜的温度，当超过其最低或最高可耐受的温度时，即停止生长或死亡。一般细菌最适温度为,3040，真菌为2030。 4氧气：大多数细菌

13、和所有霉菌都是需氧菌（在有氧环境中才能生长），少数细菌是厌氧菌（在无氧环境中才能生长），有些细菌和酵母菌是兼性需氧厌氧的，在有氧或无氧环境中都能生长繁殖。 5渗透压：微生物细胞膜和所有生物膜一样是一种半透膜，可让水自由通过，对溶质则有选择性。由于细胞壁的保护，微生物能存活在低渗透压的水中。而在高渗溶液（如高浓度的盐溶液或糖溶液、40%甘油）中，细胞会脱水并停止生长繁殖。但也有一些专性耐高盐细菌只有在高盐（1015%）条件下才生长。 6表面张力：表面活性剂可降低表面张力,它是影响细菌生长的因素之一。很多革兰氏阴性菌，特别是大肠菌群可很好地在表面活性剂包围的介质中生长，而大多数革兰氏阳性菌在表面张

14、力低时（0.05N/m）不能很好生长。阳离子表面活性剂对很多有机体有毒性，阴离子表面活性剂毒性很小，非离子表面活性剂几乎没有毒性，并可成为某些微生物的营养物。 六消毒与灭菌 消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操作，从事药品生产和检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义，严格遵守操作规程，否则会影响产品质量，危害患者安全。 1概念,1概念 无菌不存在活的生物（GMP指南）。 “无菌”从定义上来说是一个绝对的概念，但遗憾的是，在科学和技术高度发展的今天，药品的绝对无菌即做不到，也无法加以证实。然而，无菌制剂的安全性要求人们设定无菌的相对标准。 FDA、欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率

15、作为灭菌产品“无菌”的相对标准，它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为10-6（即产品的无菌保证值为6），系同一标准的不同表示法。这一标准于1980起收录于USP XX中，如今已为世界各国普遍接受和采用。 灭菌使达到无菌状态的方法（GMP指南,南）。用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌（GB）。通常是指杀灭或除去全部活的微生物（包括繁殖体和芽孢）。 消毒用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化（GB）。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。 无菌制剂不存在活的微生物的制剂（GMP指南）。 非无菌制剂所含活

16、的微生物量符合卫生学标准的制剂（GMP指南）。 2常用消毒剂 消毒剂 常 用 量 用 途,乙醇 70%75%水溶液 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油 用于皮肤、器具等消毒 供洗手用消毒 异丙醇 75%水溶液 用于皮肤、器具等消毒 甲醛 37%40%甲醛液89ml，再加入45g高锰酸钾 每m3熏蒸量，密闭1224h。刺激性强 戊二醛 2%水溶液 用于空气、器具等消毒。广谱、高效、低毒，可杀芽孢和病毒。刺激性较轻。 新洁尔灭（苯扎溴铵） 0.1%水溶液 用于皮肤、粘膜、器具等消毒，有清洁和消毒双重功效。抗菌谱较窄。,杜灭芬（消毒宁） 0.05%0.1%水溶液 用于皮肤、器具等消毒 过氧乙酸 0.2%0.5%水溶液 新配0.5%水溶液 1g/m3 用于器具等消毒 抗菌谱广，可 用于皮肤消毒 杀灭某些病毒 熏蒸 但性质不稳定 乳酸 0.331mol/L 11.5ml/m3熏蒸或与等量苯酚合用熏蒸 喷雾，用于空气消毒，有强杀菌作用 熏蒸，密闭12h以上 麝香草酚 5%麝香草酚溶于50%乙醇 喷洒墙面、地面，杀霉菌,