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1、长链非编码RNA研究思路,“Learner & Nontrivial & Confidence” - RNA,施沫 全国技术中心 技术支持经理 上海其明信息技术有限公司,Learner,“You start projects and you have no idea what to expect. Its that kind of challenge that I enjoy very much as a scientist.”,Nontrivial,Circ Res 2012,Confidence,非RNA利用医薬開発,Genome Network,Protein 2,Protein 1,P
2、rotein 3,Protein 4,Protein 5,Protein 5,P,Gene 2,Protein X,Gene 10,ncRNA 3,ncRNA 4,Gene 5,Gene 6,Drug,Gene 7,Protein 10,Protein 12,Gene 3,Protein 7,Protein 7,Protein 8,Protein 9,Gene 1,Protein 11,Protein 13,ncRNA 1,ncRNA 6,Gene 4,Gene 11,Gene 9,ncRNA 2,Gene 8,Disease,New Target of Medicine,Mutsumi Ka
3、namori-Katayama Ph.D. Yoshihide Hayashizaki M.D., Ph.D. RIKEN Genome Sciences Center Genome Exploration Research Group,物种间数量变化趋势,Ryan et.al, BioEssays 29:288299 (2007 ),LncRNA 200nt 结构类似mRNA 具有外显子/内含子 低蛋白编码潜力,Non Coding RNA分类,LncRNA来源,LncRNA表达特异性,Cabili MN. Integrative annotation of human large inte
4、rgenic noncoding RNAs reveals global properties and specific subclasses. Genes Dev. 2011 Sep 15;25(18):1915-27,lncRNA调控方式案例,ncRNA调控,lncRNA反式与顺式调控,lncRNA的反式调控方式,ncRNA PANDA募集转录因子NF-YA，启动细胞凋亡通路,反式调控,Cell 2011ncRNA- and Pc2 Methylation-Dependent Gene Relocation between Nuclear Structures Mediates Gene
5、Activation Programs,lncRNA的顺式调控方式稳定RNA,Nature Medicine 2010Expression of a noncoding RNA is elevated in Alzheimers disease and drives rapid feed-forward regulation of -secretase expression早发老年性痴呆病中BACE1-AS高表达导致BACE1 mRNA稳定性增高，蛋白积聚，体现了ncRNA的毒性效应,BACE1,BACE1-AS,拷贝数,染色体定位,表达,Science案例分析,其明成功案例,IF:31.02
6、7,所涉及的实验技术,实验材料,实验结果,芯片结果聚类图,测序结果散点图,back,Northern blot,lncRNA-DC在免疫细胞中的表达情况,lncRNA-DC在DC/mono细胞群中的表达情况,back,ChIP-Seq与ChIP-PCR结果,back,荧光素酶报告分析，验证转录因子结合区域,荧光素酶报告实验,back,LNC-DC行驶的细胞功能研究,干扰结果,过表达结果,back,小鼠干扰模型,抑制DC细胞分化,back,通过STAT3的RIP实验验证,RIP & RNA Pull down,Lnc-DC与STAT3相互结合,back,进一步验证Pull down和RIP的结果
7、,细胞定位实验,back,结果表明，lnc-DC的3末端序列（265-417）与STAT3的C端结合（583-770）。STAT3的活化依赖C端Tyr705的磷酸化。,截断突变实验,back,研究结果表明，S3I-201处理的细胞系与RNAi干扰后的细胞系在基因表达差异方面非常相似。,药物干预,思路,高通量检测 生物信息分析,表达、定位验证,上游 验证,功能 验证,下游 验证,为何选择HTA2.0联合检测,HTA2.0优势,可变剪切 生物信息学分析,HTA2.0可变剪切变得如此简单,Affymetrix Transcriptome Analysis Console 2.0 (TAC 2.0)
8、Software,引物设计,与PCR验证的吻合度,案例,IF:10.143,案例,IF:4,IF:11.139,基因组位置分析 生物信息学分析,lncRNA基因组位置关系分析,上游,下游,反义链,正义链,LncRNA基因组结果应用,非编码RNA调控 生物信息学分析,共表达网络 长链非编码RNA与编码基因互作,Hepatology 2011,LncRNA-mRNA相互作用网络应用,通过网络找到调控lncRNA最多的转录因子 同时找到能被不同转录因子调控最多的lncRNA 使用德国Biobase数据库商业版数据库,lncRNA反式分析 TF-lncRNA-network,新视角反馈环路分析,Aff
9、ymetrix Promoter1.0R Array,Affymetrix HTA2.0,新视角前馈环路分析,蓝色线表示两点之间的关系需要计算,绿色线表示两点之间的关系通过转录因子的预测得到,competing endogenous RNAs (ceRNAs)分析,案例,IF:38.597,深灰色：激活,浅灰色：抑制,案例,IF:7.357,lncRNA相关芯片与分析服务,其明生物 值得信赖的合作伙伴,上海其明介绍,硬件平台,软件平台,上海其明优势,施沫 全国统一服务电话：40030-40060 公司电话：021-62228901-211 手机：13761936890 Email: ,Thank You For Your Attention,
