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1、欢迎各位评委老师 莅临指导！,决明子多糖氯仿-正丁醇法脱蛋白答 辩 人：胡学文 指导老师：乔德亮,2013届学士学位论文答辩,论文的主要内容,第一部分,第二部分,第三部分,前言,实验方法,实验结果,第一部分 前言,一、决明子概况 决明子（Semen Cassiae）是豆科植物决明或小决明的成熟干燥种子。决明子具有较好的降血脂，降血压，抗氧化，抗衰老等疗效。决明子内含有多种成分，主要含蒽醌类、萘骈-吡咯酮类、脂肪酸类、氨基酸和无机元素。决明子中含有胱氨酸、-羟基精氨酸、组氨酸、半乳糖配甘露聚糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、棉子糖以及胱氨酸、天门冬氨酸、-羟基精氨酸等。目前对决明子的成分研究主要集中在蒽
2、醌类，由于多糖是决明子中具有医疗保健作用的主要成分之一，所以目前对多糖的研究具有很高的价值。,二、课题的研究目的及意义决明子中多糖成分具有很好的抗氧化作用，延缓衰老。所以对决明子中多糖的提取具有一定的意义。多糖的提取方法比较多，但是在多糖的提取过程中会伴随蛋白质的产生，所以除去蛋白质是多糖提取纯化的一个关键步骤，因此有必要对决明子的多糖脱蛋白方法进行研究。本论文研究的目的是找到最合适的脱蛋白方案。,第二部分 实验方法,一、多糖、蛋白质含量的测定1、决明子多糖含量测定决明子多糖测定采用苯酚-硫酸法8，取多糖溶液0.1ml稀释至1.0ml,加6%苯酚溶液0.5ml,浓硫酸2.5ml,混匀，冷却，测
3、490nm波长吸光值。 2、蛋白质含量测定取决明子多糖溶液，使用石英比色皿，用蒸馏水作为对照，在280nm波长处，测蛋白质的吸光度。,二、脱蛋白效果的评价多糖损失率=（脱蛋白前多糖含量-脱蛋白后多糖含量）/ 脱蛋白前多糖含量100%蛋白质去除率采用280nm吸光值比较法，将脱蛋白前的蛋白质吸光值和脱蛋白后的蛋白质吸光度进行比较，得出蛋白质去除率。,三、单因素实验,1、单因素实验一正丁醇-氯仿比例对脱蛋白的影响正丁醇-氯仿混合液用量为30%，脱蛋白次数为6次，脱蛋白时间为40min，正丁醇-氯仿比例设置为15%、20%、25%、30%、35%五个梯度，实验重复两次，取平均值，得出该因素对脱蛋白的
4、影响。,2、单因素实验二正丁醇-氯仿混合液用量对脱蛋白的影响 正丁醇-氯仿比例为25%，脱蛋白次数为6次，脱蛋白时间为40min，正丁醇-氯仿混合液用量设置为15%、20%、25%、30%、35%五个梯度，实验重复两次，取平均值，得出该因素对脱蛋白的影响。,3、单因素实验三脱蛋白次数对脱蛋白的影响正丁醇-氯仿比例为25%，正丁醇-氯仿混合液用量为30%，脱蛋白时间为40min，脱蛋白次数设置为3、4、5、6、7、8六个梯度，实验重复两次，取平均值，得出该因素对脱蛋白的影响。,4、单因素实验四脱蛋白时间对脱蛋白的影响正丁醇-氯仿比例为25%，正丁醇-氯仿混合液用量为30%，脱蛋白次数为6次，脱蛋
5、白时间设置为10、20、30、40、50mim五个梯度，实验重复两次，取平均值，得出该因素对脱蛋白的影响。,四、正交实验,正交实验因素水平表,第三部分 实验结果,一、单因素实验 1、单因素实验一正丁醇-氯仿比例对脱蛋白的影响结论：15%比例梯度为最佳梯度，多糖损失率为27.3%,蛋白质去除率为40.9%,2、单因素实验二正丁醇-氯仿混合液用量对脱蛋白的影响结论：正丁醇-氯仿混合液用量为15%时为最佳梯度，蛋白质去除率高达34.4%,3、单因素实验三脱蛋白次数对脱蛋白的影响结论：6次为最佳脱蛋白次数。,4、单因素实验四脱蛋白时间对脱蛋白的影响结论：50分钟为最佳脱蛋白时间。,二、正交实验结论：由
6、正交实验结果分析表可知，根据R值的大小，得出影响决明子多糖脱蛋白的因素的顺序是ACBD，即影响大小为比例次数用量时间，最佳脱蛋白条件为A3B1C2D2即正丁醇-氯仿的比例为30%，混合液用量为20%，脱蛋白次数6次，振摇时间30min。该条件下脱蛋白效果最好。,实验结论总结：氯仿-正丁醇法是一种比较常用的脱蛋白方法，本次实验采用该方法脱除决明子多糖里的蛋白质，单因素实验表明，15%的正丁醇-氯仿体积比脱蛋白效果最明显，蛋白质去除率可以达到40.9%，正丁醇-氯仿混合液用量为15%时脱蛋白效果最佳，蛋白质去除率高达34.4%，脱蛋白次数为6次会产生较好的脱蛋白效果，蛋白质去除率达到82.6%，振摇时间为50分钟时脱蛋白效果最好，蛋白质去除率达到42.0%。正交实验表明，当正丁醇-氯仿的体积比为30%，混合液用量为20%，脱蛋白次数为6次，振摇时间30min时为最佳的脱蛋白条件，正交实验可以帮助我们最快的找到最佳的脱蛋白工艺，在实际工作中可以帮助我们找到最佳的脱蛋白方案。,致谢：非常感谢我的指导老师乔德亮老师，在乔老师的指导和帮助下，终于可以完成本次论文。也要感谢我的同学的帮助。实验中有参考文献的内容，对文献的作者表示感谢。感谢大家四年的陪伴，让我不断进步和成长。谢谢。,敬请各位评委老师批评指正！ 谢谢！,
