免疫学实验三,,E-花环形成实验免疫妊娠实验,E-花环形成实验,(Erythrocyte rosette forming cell test),【原理】人T淋巴细胞表面有CD2（又称LFA-2或绵羊红细胞受体或E受体）分子，将淋巴细胞在体外与绵羊红细胞（SRBC）共同孵育，T细胞可通过CD2与SRBC结合而形成光镜可见的玫瑰花环样细胞团，称为E-花环形成实验计数花环细胞百分数即为T细胞百分数E-花环示意图,T 细胞,,,,,,,,,,,,SRBC,,,,CD2（E受体）,,CD2分子的作用,T淋巴细胞的标志 结合绵羊红细胞 其配体为LFA-3(CD58) , 两者结合可介导T细胞与抗原提呈细胞的黏附作用，协同刺激T细胞的活化 介导胸腺细胞的发育成熟,T细胞包括E-受体亲和力高的和E-受体亲和 力低的两个亚群：高亲和力 活性E-花环高亲和力+低亲和力 总数E-花环,,室温、几分钟,4℃、2h,,【意义】,总数E-花环实验可以计数T细胞总数，根据其数量多少间接反映机体细胞免疫功能状态 目前认为，形成活性E-花环的T细胞是细胞免疫中最先出现效应功能的，检测其百分率能确切地反映出机体细胞免疫功能状态。
由于T细胞表面有E-受体，而B细胞无此受体，故可用于T、B细胞的分离取离心管加蒸馏水0.4ml 采血0.02ml，加入其中，作用30秒（破坏红细胞） 用微量加样器加入4.5%NaCl 0.1ml恢复等渗（取血前就准备好，以免来不及） 加Hank’s液3ml，2000r/min离心5分钟，后弃上清注意：离心机的使用；离心管做好标记） 加小牛血清1滴，摇匀，加0.2%SRBC 1滴，轻轻摇匀，1000r/min离心10分钟轻拿) 加戊二醛 1滴，固定10分钟 吸去大部分上清，留少许液体，再用乳头吸管吹吸均匀 用乳头吸管头部涂片，直径约1.5cm，自然干燥 用G-W染液染色2分钟，再以3~4倍的蒸馏水加入染液中复染5分钟 用水冲洗、吸干、镜检活性E-花环形成实验方法,【结果观察】,,,,,,,,凡吸附3个或3个以上SRBC的淋巴细胞为一个花环形成细胞E-花环形成细胞百分率=镜下计数200个淋巴细胞 正常参考值：活性E-花环形成细胞百分率23.6±3.5%总数E-花环形成细胞百分率64.4±6.7%,,E-花环形成细胞数,淋巴细胞总数,×100%,,,,,,注意事项,低渗时间要控制好 毛细吸管要打到液面下 取血要领： 1 快，准，狠，一次吸完2 酒精挥发后再扎3 取血不要持续太长时间 观察结果先用10倍和40倍镜，找到花环形成细胞后换油镜,显微镜油镜的使用方法,先在高倍物镜（40倍）下找准被检物，并置于视野中央，然后降下载物台，再把油镜头旋转至对准正下方。
在玻片标本的镜检部位滴一滴香柏油，将头偏于一侧观察，上调载物台，使oil镜(100倍）的前透镜与香柏油接触，再上调载物台至镜头最接近载玻片，但绝不能压在标本上 继而从目镜里观察视野，旋转粗螺旋，使载物台缓慢地下降，刚出现不太清晰的物象时就换用细螺旋，至物象清晰后进行观察若调节粗螺旋时，镜头离开油滴，仍不能发现被检目的物，须重新调节 油镜使用完毕，下降载物台，把油镜转离光轴，先用擦镜纸擦去镜头上的大部分油，再用浸少量二甲苯的擦镜纸擦去镜头上的残余油迹，最后用干擦镜纸擦去镜头上的二甲苯 擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周方向擦 玻片标本上的油也要进行清洁，即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上，在纸上滴一些二甲苯，趁湿把纸往外拉，这样连续作三四次即可干净,,【原理】 临床常用的免疫妊娠试验是先把待测孕妇尿（含有人绒毛膜促性腺激素，HCG）与已知抗HCG抗体结合，充分作用后，加入偶联了HCG的胶乳颗粒如果不凝集，则说明孕妇尿中有HCG，妊娠试验阳性，反之则为阴性免疫妊娠实验,间接凝集抑制反应,,,1．待检尿液1、2号、孕妇HCG阳性尿液 2．吸附HCG的聚苯乙烯胶乳、抗人HCG抗体血清。
3．载玻片、滴管、特种铅笔等材料】,,1．取玻片一张置试验台上，用特种铅笔将其划分为两格，并注明1、2 2．用滴管取待检孕妇尿①一滴加至第1格中，另吸取待检孕妇尿②一滴加至第2格 3．于第1、2两格中各滴加一滴抗人HCG抗体血清，轻轻摇动1min，充分混匀 4．于第1、2两格中各滴加一滴HCG致敏的胶乳抗原，缓缓摇动3—5min后观察结果方法】,,1． 所用诊断试剂必须在有效期内使用，用前应充分摇匀 2． 加样不宜过多，玻片应平置，以防两格反应液相混注意事项】,,以是否出现凝集现象记录结果 待检尿无凝集现象而呈乳状液体者为妊娠试 验阳性； 待检尿出现凝集现象者为妊娠试验阴性结果】,。