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1、选择培养基,加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞,巩固检测,巩固检测,巩固检测,1、甲、乙、丙是三种微生物，下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖；甲能在中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是：,A、甲乙丙都是异养微生物 B 、甲乙都是自养微生物、丙是异养微生物 C、甲是固
2、氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物 D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物,1细胞内DNA复制与PCR技术的比较,一、多聚酶链式反应扩增DNA片段,2.PCR的反应过程 一般要经历三十多次循环，每次循环可分为变性复性延伸三步。 3PCR技术反应过程中控制不同温度的意义 (1)90 以上时变性，双链DNA解聚为单链； (2)50 左右时复性，两种引物与两条单链DNA结合； (3)72 左右时延伸，TaqDNA 聚合酶促使DNA新链的合成。,1多聚酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般要经历30多次下述循环：95 条件下使模板DNA变性、解链55
3、条件下复性(引物与DNA模板链结合)72 条件下引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是( ) A变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现 B复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 C延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、4种核糖核苷酸 DPCR与细胞内DNA复制相比，其所需要酶的最适温度较高,【解析】 PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为变性、复性和延伸三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由引物延伸而成的DNA单链会与引物结合，进行DNA的延伸。DNA变性(9096 )：双链
4、DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。复性(2565 )：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。延伸(7075 )：在Taq酶(在72 左右活性最高)的作用下，以dNTP为原料，从引物的5端向3端延伸，合成与模板链互补的DNA链。 【答案】 C,二、DNA的粗提取与鉴定 1基本原理 (1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低； (2)DNA不溶于酒精溶液； (3)DNA不被蛋白酶所水解； (4)DNA可被二苯胺染成蓝色。,2方法目的,(1)哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，
5、但却是提取血红蛋白的理想材料。 (2)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液。 (3)DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低； (4)DNA不溶于酒精溶液； (5)DNA不被蛋白酶所水解； (6)DNA可被二苯胺染成蓝色。,2(2010年青岛模拟)下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A氯化钠的浓度越低，DNA的溶解度越大 B人的血液不可代替鸡血进行该实验 C柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D利用DNA易溶于酒精的特点可除去DNA中的部分杂质,【解析】 人是高等哺乳动物，其成熟的红细胞中没有细胞核不能进行该
6、实验。A项NaCl溶液浓度在小于0.14 mol/L时，溶液的浓度越低，对DNA的溶解度越大是正确的，没有前提条件这种说法是错误的；柠檬酸钠的作用是抗凝血；DNA不能溶于酒精中，所以B项是对的。 【答案】 B,3向溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水，在这个过程中DNA和杂质蛋白质的溶解度变化情况分别是 ( ) A减小；减小 B增大；增大 C先减小后增大；增大 D减小；增大,【解析】 DNA在NaCl溶液中的溶解情况如右图所示：在向溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液中不断加入蒸馏水时，DNA的溶解度先减少后增大，而蛋白质在高浓度盐溶液中会沉淀，随盐浓度的降低，蛋白质的
7、溶解度升高。 【答案】 C,三、血红蛋白的提取和分离 1方法及原理,2.实验操作程序 (1)样品处理 红细胞的洗涤：除去血浆蛋白等杂质，以利于后续步骤的分离纯化； 血红蛋白的释放：使红细胞涨破，血红蛋白释放出来； 分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。,(2)粗分离透析：除去样品中相对分子量较小的杂质。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。,相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，而相对分
8、子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，移动速度快，因此蛋白质分子彼此分离。,4(2009年南京质检)下列有关蛋白质提取和分离的说法，错误的是 A透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性 B采用透析法使蛋白质与其他小分子化合物分离开来 C离心沉降法通过控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白质分离 D蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动,【解析】 带电离子或分子在电场中向着与其所带电荷相反的电极移动。 【答案】 D,四、五种物质的提取方法、原理及步骤,水中蒸馏、水上蒸馏、水汽蒸馏的区别： (1)这三种方法的基本原理相同，但原料放置位置不同。 (2)水中蒸馏：原料放在
9、蒸馏容器的水中，水要完全浸没原料。 (3)水上蒸馏：容器中水的上方有筛板，原料放在筛板上，水量以沸腾时不浸湿原料为宜。 (4)水汽蒸馏：蒸馏容器下方有一排气孔，连接外源水蒸气，上方有筛板，上面放原料。 各自特点：水中蒸馏设备简单、成本低、易操作，而水上蒸馏和水气蒸馏时间短，出油率高。,5玫瑰精油称为“液体黄金”，其提取方法 ( ) A只能用水蒸气蒸馏法 B可用蒸馏法和压榨法 C可用蒸馏法和萃取法 D可用压榨法和萃取法 【解析】 用玫瑰花提取精油，根据玫瑰花的干湿情况可采用不同的提取方法，鲜玫瑰花可采用水蒸气蒸馏法，干玫瑰花可使用有机溶剂萃取法，一般不采用压榨法。 【答案】 C,6作为萃取胡萝卜
10、素的有机溶剂，哪一项不符合实验要求 ( ) A能充分溶解色素 B与水混溶 C对人无毒 D易与产品分离 【解析】 作为萃取胡萝卜素的有机溶剂应该具有较高的溶点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。此外，还需要考虑萃取效率、对人的毒性、是否易燃、有机溶剂是否能从产品中完全除去、会不会影响产品质量等问题。 【答案】 B,(2009年高考江苏卷)下列关于DNA和蛋白质提取与分离实验的叙述，正确的有(多选) ( ) A提取细胞中的DNA和蛋白质都需用蒸馏水涨破细胞 B用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质 C蛋白质提取和分离过程中进行透析可以去除溶液中的DNA D蛋白质和DNA都可以用
11、电泳的方法进行分离纯化,【解析】 提取DNA需用蒸馏水涨破细胞，提取蛋白质可以直接用豆浆或研磨的大豆；透析法不能除去DNA；DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中DNA的溶液度最低，DNA可以析出，通过过滤可以除去蛋白质；用电泳的方法可将蛋白质、DNA进行分离纯化。 【答案】 BD,1(2008年江苏生物)下列叙述中错误的是( ) A改变NaCl溶液的浓度只能使DNA溶解而不能使其析出 B在沸水浴中，DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色 C用电泳法可分离带电性质、分子大小和形状不同的蛋白质 D用透析法可去除蛋白质样品中的小分子物质,【解析】 DNA在NaC
12、l溶液中的溶解度是随着NaCl浓度的变化而变化。在0.14mol/L NaCl溶液中DNA的溶解度最小，低于或高于0.14 mol/L，DNA的溶解度都会增大。在DNA粗提取实验中就是先把该物质溶解在2 mol/L NaCl溶液中，然后逐渐加水，稀释至0.4 mol/L时，使DNA析出。 【答案】 A,2(2008年山东理综)科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。 (1)分离该抗菌蛋白可用电泳法，其原理是根据蛋白质分子的_、大小及形状不同，在电场中的_不同而实现分离。 (2)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的体外抗菌特性。抗菌实验所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供_和_。,(3)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的_，确定该蛋白质的抗菌效果。 (4)细菌培养常用的接种方法有_和_。实验结束后，对使用过的培养基应进行_处理。 【解析】 不同蛋白质分子的带电情况、大小及形状不同，导致其在电泳时在电场中的迁移速度不同而实现分离，将抗菌蛋白加入金黄色葡萄球菌培养基后，可根据菌落多少来判断其抗菌效果。,【答案】 (1)电荷(带电情况) 迁移速度 (2)碳源 氮源 (3)数量 (4)平板划线法 稀释涤布平板法(稀释混合平板法) 灭菌,
