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1、,动物细胞融合和单克隆抗体,融合的原生质体AB,再生细胞壁,杂种细胞AB,杂种植株,脱分化,愈伤组织,再分化,原生质体B,原生质体A,去 壁,人 工 诱 导,植物细胞A,植物细胞B,回顾植物体细胞杂交过程,去 壁,动物细胞融合,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,一、动物细胞融合,也称细胞杂交。是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,杂交细胞：融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。,1、概念：,细胞膜的流动性,2、原理：,3、诱导融合方法：,物理法:,化学法:,生物法：,灭活的病毒,离心、振动、电刺激,聚乙二醇（PEG）,4、意义：,突破有性杂交的局限，使
2、远缘杂交成为可能,5、过程,细胞A,细胞B,杂种细胞,灭活的病毒,物理法 化学法,仙台病毒 疱疹病毒 新城鸡瘟病毒,为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？,因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。,思考,观看示意图简述融合过程?,动物细胞融合,融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂形成细胞桥的变化过程图解,试试身手,读下面一段文字资料，思考以下问题：,长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性
3、差，纯度低，反应不够灵敏。研究发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但每一个B细胞只能分泌一种抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,1、什么是单克隆抗体？,用单个B细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强、灵敏度高的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。,2、如何大量生产单克隆抗体？,提示1：仅用细胞培养技术可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？,提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？,G. Kohler 科勒,C. Milstein 米尔斯坦,一个B
4、淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖,杂种细胞,动物细胞培养技术,1、单克隆抗体制备的设计思路：,动物细胞融合,单克隆抗体,既能产生特异性抗体，又能大量繁殖,二、单克隆抗体的制备,2、单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,B淋巴细胞,单克隆抗体的制备过程,观看示意图简述制备过程?,单克隆抗体的制备,思考：,1）本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理。,2）整个制备过程为何要经过两次筛选?,第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选
5、出能产生特异性抗体的细胞群。,单克隆抗体的应用,1、作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合,2、用于,运载药物：制成“生物导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞,A,巩固练习,、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）A结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同,3、单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（ ） A
6、.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成,D,4、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D,C,5、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,谢谢交流！,
