核干细胞因子基因在胃癌、结肠癌和直肠癌组织中的表达

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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 镇江 212002;基础医学与医学技术学院,江苏 镇江 212013【摘要】目的建立并采用实时定量 PCR 法检测核干细胞因子(nucleostamin,NS)基因在胃癌、结肠癌和直肠癌组织中的表达,研究该基因在胃肠道癌症诊断中的意义。方法: 构建 NS 基因和内参基因 GAPDH 标准品,并采用 RT PCR 和实时定量 PCR 检测43 例胃癌、结肠癌和直肠癌患者肿瘤组织 NS 基因的表达。结果: RT PCR 结果显示 NS 基因在胃癌组织中的阳性率为 90%(27/30),在直肠癌组织中的阳性率为 83.3%(5/6),在肠癌组织中的阳性率为1

2、00%(7/7)。NS 基因在胃肠道肿瘤组织中表达上调,表达水平与病理分期未见显著相关性,但表达量与癌组织分化程度显著相关,分化程度较低的癌组织 NS 表达较高,分化程度较高的癌组织 NS 表达较低(P0.05)。2.5 NS 基因表达与肿瘤分化程度的关系在 43 例消化道肿瘤中,胃癌患者包括高分化、中分化、中低分化、低分化 4 种,直肠癌和结肠癌包括中低分化和低分化 2 种。见表 2。本研究发现,肿瘤组织分化程度越低,NS 基因表达水平越高,见图 5,6。表 2 消化道肿瘤分化程度,Tab 2 Tumor differentiation of gastrointestinal neoplas

3、ms(略) 。3 讨论NS 基因是维持干细胞和很多肿瘤细胞所必需的生长因子样基因,特异性地表达于干细胞和某些肿瘤细胞的细胞核内1-5。该基因表达产物与 p53 结合并抑制 p53 的活性,从而促进细胞增殖,并抑制细胞分化。当 NS 基因表达下调时,可能会导致细胞离开细胞周期而发生分化1。钱晖等6 研究发现,U937(人白血病细胞株)、LTEP a 2(人肺癌细胞株)、SW480(人结肠癌细胞株) 、PC 3(人前列腺癌细胞株)、C6Wt(大鼠胶质瘤细胞株) 、UMR106(大鼠骨肉瘤细胞)及 Ref52(胎鼠成纤维母细胞)中均表达 NS 基因,在突变的人胚胎骨髓间质干细胞中,NS 基因呈阳性表

4、达。NS 基因在前列腺癌组织以及前列腺癌细胞 PC3 中高表达,RNA 干扰实验7-10证明,KKME-专业医学搜索引擎 http:/ NS 基因的功能被阻断后,S 期细胞的百分率降低, 而 G0/G1 期的百分率升高, 细胞的增殖速率明显降低,细胞对裸鼠的致瘤性也显著降低。由于 NS 在细胞自我更新和分化中显示出的重要作用,本文针对 NS 与肿瘤分化、分期关系,进一步推断 NS 在肿瘤发生发展中的关系。本研究通过实时定量 PCR 法检测 NS 基因在消化道肿瘤组织中的表达,发现 NS 基因在胃肠道肿瘤组织中表达上调,NS 基因在组织中的表达水平与病理分期未见显著相关性(P0.05),但其表达

5、量与癌组织分化程度显著相关,分化程度较低的癌组织 NS 表达较高,分化程度较高的癌组织 NS 表达较低。这一结果进一步提示该基因对肿瘤分化调控起着关键作用,因此检测该基因在组织中的表达有助于判断肿瘤的恶性程度。而 RT PCR 结果显示 NS 基因在胃癌组织中的阳性率为 90%,在直肠癌组织中的阳性率为 83.3%,在结肠癌组织中的阳性率为 100%。这些结果说明,NS 基因可以作为消化道肿瘤的新标志物,使用 RT PCR 和实时定量 PCR 检测 NS基因的表达可能是诊断消化道肿瘤的较好方法,同时 NS 基因有可能会成为肿瘤基因治疗的靶基因。【参考文献】1Tsai RY, McKay RD.

6、 A nucleolar mechanism controlling cell proliferation in stem cells and cancer cellsJ. Genes Dev, 2002, 16(23):2991-3003.2Tsai RY,McKay RD. A multistep, GTP driven mechanism KKME-专业医学搜索引擎 http:/ the dynamic cycling of nucleosteminJ. J Cell Biol, 2005, 168(2):179-184.3Baddoo M, Hill K, Wilkinson R, e

7、t al. Characterization of mesenchymal stem cells isolated from murine bone marrow by negative selectionJ. J Cell Biochem, 2003, 89(6):1235-1249.4Bernatchez R, Belkacemi L, Rassart E, et al. Differential expression of membrane and soluble adenylyl cyclase isoforms in cytotrophoblast cells and syncyt

8、iotrophoblasts of human placentaJ. Placenta, 2003, 24(6):648-657.5Chambers I, Colby D, Robertson M, et al. Functional expression cloning of Nanog, a pluripotency sustaining factor in embryonic stem cellsJ. Cell, 2003, 113(5): 643-655.6钱晖, 许文荣, 王文兵, 等. 骨髓间充质干细胞和部分肿瘤细胞中 Nucleostemin 基因的表达J. 中国生物化学与分子生

9、物学报,2005, 21(1):8-13.7Liu SJ, Cai ZW, Liu YJ, et al. The effect of knocking down nucleostemin gene expression on the in vitro proliferation and in vivo tumorigenesis of HeLa cellsJ. J Exp Clin Cancer Res, 2004, 23(3): 529-538.8刘思金, 蔡子微, 劳为德,等. NS 特异性 siRNA 真核表达载体的构建J. 牡丹江医学院学报, 2003, 24(4):1-4.9刘思金,

10、蔡子微,胡同法,等. NS 基因克隆及人成骨肉瘤KKME-专业医学搜索引擎 http:/ NS 基因表达J.牡丹江医学院学报,2003,24(2):5-7.10Jafarnejad SM, Mowla SJ, Matin MM. Knocking down the expression of nucleostemin significantly decreases rate of proliferation of rat bone marrow stromal stem cells in an apparently p53 independent mannerJ. Cell Prolif, 2008,41(1):28-35.可以免费下载论文的浏览器-文献检索浏览器

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