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1、直接抗人球蛋白直接抗人球蛋白 IgGIgG 检查标准操作程序检查标准操作程序1.1. 试验原理和目的试验原理和目的将抗球蛋白血清加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，通过桥梁作用使红细胞发生凝聚。通过直接抗人球蛋白试验可检查红细胞是否被不完全抗体所致敏,如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应（输入的不相合红细胞被受者不完全抗体致敏） 、自身免疫性溶血性贫血（患者红细胞被自身抗体致敏）以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴类药物、青霉素等所致） 。2.2.标本要求标本要求 2.1 病人准备 标本采集前患者处于安静状态，
2、避免剧烈运动、情绪激动。2.2 标本要求2.2.1 标本种类 EDTA 抗凝管2.2.2 标本容器 01 开头的紫色短管（EDTA 1:9 抗凝）2.2.3 标本存放 采完标本立即送检，标本禁忌放入 48冰箱中。已检标本封盖后室温放置，保存 48 小时后由医院按感染标本统一处理。 2.2.3 标本拒收 样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。3 3试剂试剂3.1 试剂成分：直接抗人球蛋白试剂盒（上海血液生物医药有限公司）：抗 IgG,C3d（多特异性） 、抗 IgG、抗 C3d；理盐水。3.2 用不完全抗 D 致敏的 5%Rh(D)阳性红细胞盐水悬液供阳性
3、对照用：取 3 人 O 型红细胞，混合，经盐水洗涤后取压积红细胞，加等量抗 D 血清，置于 37水浴致敏 1h，盐水洗涤 3 次，用盐水配成 5%红细胞悬液。3.3 正常人 5%D 阳性红细胞悬液（未致敏） ，供阴性对照用，除不用抗 D 血清致敏外，按上述方法配制。3.4 试剂贮藏要求：28冰箱.4.4. 仪器仪器4.1 日本 OLYMPUS CX31 普通光学显微镜。4.2 SSW 型微电脑电热恒温水槽（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）5 5操作步骤操作步骤5.1 取受检者红细胞，以生理盐水洗涤 3 次（3000rpm 1min） ，末次洗涤后，将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，
4、配成 5%红细胞盐水悬液。5.2 取上述 5%受检者红细胞盐水悬液 1 滴，滴入 1 小试管内，加抗球蛋白血清 2 滴，混匀。5.3 阳性对照：不完全抗 D 致敏的 5%Rh(D)阳性红细胞盐水悬液 1 滴，滴入 1 小试管内，加抗球蛋白血清 2 滴，混匀。5.4 阴性对照：常人 5%D 阳性红细胞悬液（未致敏）1 滴，滴入 1 小试管内，加抗球蛋白血清 2 滴，混匀。5.5 受检管及阳性、阴性对照管同时以 3000r/min 离心 15 秒，轻轻混和，观察结果。6.6. 检验结果报告检验结果报告 6.1 结果判定：须持一定角度轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复倾斜试管，直到均匀的细胞
5、悬液（阴性）或者凝集物（阳性）为止。如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检红细胞凝集者直接抗人球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。6.2 报告传输及打印在 LIS 操作界面输入结果，审核发送报告，门诊和病房报告单在指定处打印。7.7. 参考范围参考范围正常人：阴性。8.8. 安全防范安全防范操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。9.9. 注意事项注意事项 9.1 标本采集后应立即进行试
6、验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失。9.2 抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则，可产生前带或后带反应而误为阴性结果。9.3 最好对阴性结果进行核实，即在该试管中再加 1 滴 IgG 致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清确末被消耗。9.4 红细胞上吸附抗体太少或 Coombs 阴性自身免疫性溶血性贫血，直接抗球蛋白试验可呈假阴性反应。9.5 全凝集或冷凝集血液标本中含有 Wharton 胶且洗涤不充分，血液标本中有很多网织红细胞且抗球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集。9.6 试剂储存于 2-8，保存至有效期。勿长时间存放在高温条件下或反复冻融。10
7、.10. 临床意义临床意义10.1 温抗体型导致的 AIHA，DAT 强阳性。10.2 药物诱发的 IHA，甲基多巴、青霉素 DAT 阳性，奎宁型多为 IgM 阳性10.3 冷凝集综合症：用抗人全血清的抗人球蛋白血清与在 37洗涤过的患者红细胞作试验，DAT 阳性。10.4 PNH 患者在溶血发作时，DAT 强阳性，发作后期转阴。10.5 新生儿同种免疫溶血病：因 RH 抗体引起溶血的病例，全抗或单抗 IgG 的 DAT 强阳性，ABO 则多为阴性或弱阳性。10.6 结缔组织病，淋巴细胞增殖疾患，癌肿，EVAN 综合症等，DAT 可呈阳性。11.11. 参考文献参考文献11.1全国临床检验操作规程 （第 4 版）11.2 抗人球蛋白试剂盒使用说明书。
