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1、疟原虫检测检测标准操作程序疟原虫检测检测标准操作程序1.1. 检验目的与原理检验目的与原理1.1 检验目的：检查血液中是否有疟原虫。1.2 检验原理：瑞氏染色原理：瑞氏染料中含有美蓝和伊红两种染料，前者为碱性，后者为酸性，它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力，使其显现出不同的色调，以便于辨认。根据瑞氏染色的酸碱物质染色性不同，可讲疟原虫各期的形态进行清楚染色，便于观察，高倍镜下一般可以观察到各种类型的疟原虫（常见间日疟、三日疟、恶性疟） ，疟原虫的各期，如环状体（早期滋养体） ，晚期滋养体，裂殖体、配子体等。2.2. 样本收集和贮存样本收集和贮存 2.1 原始样本系统：全血。2.2 标本类型
2、：EDTA 抗凝血 2ml,标本的采集应使用标准一次性采血管，充分混匀，勿震荡。2.2 保存条件：EDTA 抗凝血尽快即时检测。2.4 病人要求 ：必须是发烧时采血 。3 3试剂试剂3.1 瑞氏染液：3.1.1 试剂成分： 瑞氏染料 1.0g 无水甲醇 500ml甘油 10ml3.1.2 瑞氏染液配制方法：将瑞氏染料称量好后，放在乳钵中加少量无水甲醇匀速研磨至溶解，将研磨好的染液倾倒入试剂储存瓶中，倒入无水甲醇继续研磨，反复多次，直至乳钵中无瑞氏染料沉淀为 止，染液试剂瓶存满为止。将配制好的染液放在 3724 小时后方可使用，放在阴凉干燥处，避光保存。3.2 磷酸盐缓冲液 PH6.43.2.1
3、 脱水 Na2HPO4 1 份: 处理方法 将 Na2HPO4于蒸发皿上干燥(火燃烘烤）成粉末称量。3.2.2 无水 KH2PO4 2.6 份将脱水 Na2HPO4 1 份和水 KH2PO4 2.6 份充分混合，边研磨边混匀。3.2.3 将上述粉末 1g 加溶解于 500ml 去离子水中，混合均匀，方可使用。3.3 器材：载玻片、加样枪、吸头、推片器4.4. 仪器仪器显微镜 OLYMPUS 型号：CX21。4.1 开机前检查4.1.1 OLYMPUS 显微镜：检查显微镜光路系统，目镜、物镜镜头正常，聚光器、光圈、螺旋、微螺旋调节正常。4.2 日维护：每日清理纤维镜表面，保持显微镜光圈、聚光器干
4、净整洁；每日下班前无水乙醇（二甲苯少用，有致癌性）清洗所有显微镜物镜（低倍镜 10，高倍镜油镜） 、目镜。5.5. 操作步骤操作步骤薄血片法5.1 取材：EDTA 抗凝静脉血、耳血、手指血5.2 血涂片制备：取耳血或指血静脉血一滴置于载玻片一端，用推片以 30450均匀推成厚薄适宜，头体尾清楚、长度 35cm 的血膜（血膜边缘距 1cm 左右） ，注意：耳血手指血第一滴血要去掉，静脉血要充分混匀后吸取适量涂片。5.3 瑞氏染色：（1）将制好的血涂片放在染色架上，加瑞氏染液 45 滴，静置 1 分钟左右，加磷酸盐缓冲液 68 滴，洗耳球混匀染液，染色约 1015 分钟，水流轻轻冲掉染液，吸水纸吸
5、干血涂片上的水分，晾干待检。5.4 镜检 5.4.1 低倍镜观察：血涂片先在低倍镜下观察，查看染色是否满意，选择红细胞分布分均，细胞形态清晰可辨的区域高倍镜下检查。5.4.2 油镜观察：当看到疟原虫各期阶段或某一阶段时（如环状体期最易辨认） ，并且数量较多时，检验结果报告：找到疟原虫（某期).当镜下没有找到典型各阶段的疟原虫时，油镜镜检，看 100 个以上视野，仍没有找到典型疟原虫时人，报告：未找到疟原虫。5.5 报告书写，内容包括：阳性时：报告找到 疟原虫（某一期）阴性时：报告未找到疟原虫。6.6. 质量控制质量控制参加每年卫生部 3 次形态学室间质评工作。7.7. 检验结果报告检验结果报告
6、检验报告在瑞美检验系统审核上报到临床科室。8.8. 参考范围参考范围阴性9.9. 临床意义临床意义找到疟原虫即为疟原虫感染10.10. 安全防范安全防范10.1 操作必要穿戴手套，必须穿工作服；工作后的台面应消毒擦洗；10.2 为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要开盖，如果看样本是否凝固开盖看后仍立即盖上；不要在空气当中暴露太长时间。开盖时要戴口罩。10.3 遇到样本洒出，被污染的区域应立即戴手套用吸水纸把污染物吸干，用 20000mg/L 金星消毒液喷洒消毒 30 分钟左右，用沾有 500mg/L 金星消毒液的抹布将污染区擦干净，待自然干后，重新使用。擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。10.4 阅完的血涂片，统一收集在专用玻片收集容器（黄色小黄桶） ，收集容器装满时，由工作人员上交到院玻片废物统一处理部门消毒处理。10.5 血液标本 48 小时后，按血常规标本处理办法处理。11.11. 注意事项注意事项11.1 采血时间：见日疟及三日疟患者应在发作后数小时至 10 余小时采血，此时，早期滋养体已发育至易于鉴别形态的晚期；恶性疟患者，应在发作后 20 h 左右采血。11.2 薄片油镜检查 ：须找 100 或 100 以上个视野才能报告“未检出疟原虫” 。厚血片须找到 20个视野或以上。12.12. 参考文献参考文献12.1 全国临床检验操作规程 （第 4 版）
