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1、牛广华牛广华定性免疫学检验的性能验 证与质量控制定性免疫学检验的性能验 证与质量控制ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189认可中大家到困惑的问题认可中大家到困惑的问题定性免疫项目如：定性免疫项目如： ELISA检测、自身抗体 免疫印迹试验、抗核抗体免疫荧光（检测、自身抗体 免疫印迹试验、抗核抗体免疫荧光（IIF）检测 质量控制和性能验证及验证内容？如何做？标 准？
2、）检测 质量控制和性能验证及验证内容？如何做？标 准？ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心5.5.1.1 检验方法和程序的分析性能验证内容5.5.1.1 检验方法和程序的分析性能验证内容应参考 试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证应参考 试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少 应包括：，至少 应包括：检出限检出限、符合率符合率（采用国家标准血清盘或临 床诊断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比 对），（采用国家标准血清盘或临 床诊断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比 对），如为
3、定量方法应验证精密度（包括重复性和中 间精密度）如为定量方法应验证精密度（包括重复性和中 间精密度）；并应明确检验项目的预期用途，如；并应明确检验项目的预期用途，如筛查筛查 、诊断诊断、确认确认。5.5 检验程序检验程序CNAS-CL39：2012医学实验室质量和能力认可准则在临床 免疫学检验领域的应用说明医学实验室质量和能力认可准则在临床 免疫学检验领域的应用说明-2014改版改版ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心? 试剂盒说明书（先决条件！）试剂盒说明书（先决条件！）? 国际和或国内标准国际和或国
4、内标准性能验证的合格标准从何而来？性能验证的合格标准从何而来？ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?筛查试验筛查试验 ?诊断试验诊断试验 ?确认实验确认实验 ?C50C50 ?C5C5 ?C95C95概念准备概念准备ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的 存在情况。筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的 存在情况。?一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（ 即
5、临床检出率大于95%），对其特异性的要求（和阳 性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（ 即临床检出率大于95%），对其特异性的要求（和阳 性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。如粪便隐血检测、梅毒血清学试验如粪便隐血检测、梅毒血清学试验筛查试验筛查试验ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。?诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。?诊断试验后如需
6、进行确认试验，对诊断试验的特 异性要求可以稍微降低。诊断试验后如需进行确认试验，对诊断试验的特 异性要求可以稍微降低。如各种微生物培养如各种微生物培养诊断试验诊断试验ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座?确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确 认。确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果的确 认。?对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。对于确认试验，特异性比敏感性更为重要。如梅毒密螺旋体抗体荧光吸收试验（FTA-ABS）如梅毒密螺旋体抗体荧光吸收试验（FTA-ABS）辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心确认试验确认试验ISO1518
7、9实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得 阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得 阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。临界点（临界点（C50）浓度的定义）浓度的定义C50ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?这里的C50指的是一个处于试剂检测临界点的样本 浓度，其一旦确定，是不变的。这里的C50指的是一个处于试剂检测临界点的样本 浓度，其一旦确
8、定，是不变的。?试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果 的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信 号值，每次测定都会有所差异。试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果 的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信 号值，每次测定都会有所差异。C50与试剂盒阳性反应判断值（与试剂盒阳性反应判断值（CUT-OFF值）的区别值）的区别ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴 性结果时该分析物的一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得
9、阴 性结果时该分析物的浓度浓度。C5 浓度的定义浓度的定义C5ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阳 性结果时该分析物的浓度。一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阳 性结果时该分析物的浓度。C95 浓度的定义浓度的定义C95ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?应熟悉待验证的试剂或系统应熟悉待验证的试剂或系统 ?进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试剂的 处
10、理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以 及系统的质量控制等。进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试剂的 处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以 及系统的质量控制等。 ?制定质量保证计划制定质量保证计划 ?确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）确定患者样本的数量及强弱（评价重复性） ?确定比较的方法确定比较的方法性能验证专业知识技能准备性能验证专业知识技能准备ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。 ?C50和可能的
11、C5（低于C50浓度20%）及C95浓度样本 （高于C50浓度20%） ：用于重复性及最低检出限验 证，不少于40次检测量）C50和可能的C5（低于C50浓度20%）及C95浓度样本 （高于C50浓度20%） ：用于重复性及最低检出限验 证，不少于40次检测量） ?临床样本或血清盘（准确性验证）（不少于50份阳 性和阴性样本）临床样本或血清盘（准确性验证）（不少于50份阳 性和阴性样本）样本准备样本准备ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不
12、精密度曲线，然而具体操作时进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数量 较大需要检测的样本数量 较大 ?可使用一个可使用一个简单的方法简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C5020%，是否 包含了C5-C95区间C5020%，是否 包含了C5-C95区间。 ?若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或
13、距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区间 之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度C95，将持续得到 阳性结果，浓度C95，将持续得到 阳性结果，浓度=27/40(67.5%)不正确2阳性结果（14-26）/40（35%-65%）正确ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心不同不同C50重复检测次数与检出阳性数的关系重复检测次数与检出阳性数的关系ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院
14、临床检验中心如何获得系统或试剂的如何获得系统或试剂的“临界点（临界点（C50）”ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心?制备评价用样本 制备3份样本。一份浓度为C50，一份为C50+20% ，一份为C50-20%。 每份样本的体积需保证40次或更多次重复检测的 需要。制备评价用样本 制备3份样本。一份浓度为C50，一份为C50+20% ，一份为C50-20%。 每份样本的体积需保
15、证40次或更多次重复检测的 需要。 ?评价方法 每份样本检测40次，确定每一份样本结果为阳性 和阴性的百分比。评价方法 每份样本检测40次，确定每一份样本结果为阳性 和阴性的百分比。试验步骤试验步骤ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心-20%+20%浓度范围在C5-C95区间之内；用该方法检测，浓度超过C5020%的样本 检测结果不一致；此结论错误率5% ，需使用更宽浓度范围的样本（如30%）进行 另外的试验。-20%+20%浓度范围在C5-C95区间之内；用该方法检测，浓度超过C5020%的样本 检测
16、结果不一致；此结论错误率5% ，需使用更宽浓度范围的样本（如30%）进行 另外的试验。结果判断结果判断-1 ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心-20%+20%浓度范围包含了C5-C95区间；用该方法检测，浓度超过C5020%的样本 检测结果一致-20%+20%浓度范围包含了C5-C95区间；用该方法检测，浓度超过C5020%的样本 检测结果一致结果判断结果判断-2ISO15189实验室认可系列培训讲座实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心辽宁中医药大学附属医院临床检验中心用该方法检测，C50+20%的样本检测结果一致，C50-20%的样本不一定能得到一致结 果；需要用低于C50更大百分率浓度的样本（如-30%）进行补充试验。用该方法检测，C50+20%的样本检测结果一致，C50-20%的样本不一定能得到一致结 果；需要用低于C50更大百分率浓度的样本（如-30%）进行补充试验。结果判断结果判断-3ISO15189实验室认可系列
