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1、临床微生物学 尿培养操作规范,尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引起的尿路炎症。尿路感染并非是一种单一的疾病，而是一种临床综合征。根据感染部位可分为上尿路感染（如肾盂肾炎）及下尿路感染（如膀胱炎），男性还可出现前列腺感染，不同部位同时感染也很常见。尿路感染是人类最常见的感染之一，可发生于各个年龄段的人群，好发于女性，男:女之比为1:10。,典型的临床表现为发热、尿频、尿急、尿痛、排尿困难和耻骨上压痛，临床表现可因患者年龄和健康状况不同而异。新生儿尿路感染的症状往往是非特异性的、模湖的，可表现有厌食，呕吐，倦怠，无发热的菌血症等；婴儿期直到2岁，常有高热；2岁以后的尿路感染才会有典型的临床表现
2、；老年患者的尿路感染，常缺乏明显的症状，更易造成菌血症和急性肾功能衰竭，应引起重视。,诊断尿路感染最常用的方法是进行尿液标本的细菌学检查，主要致病菌可因尿路感染的原因不同而有所不同（表1）。,表 尿路感染的原因及常见病原菌,感染原因 主要致病菌 感染特点,上行感染,大肠埃希菌、克雷伯菌、变形杆菌、淋病奈瑟菌,主要为肠道菌群或会阴部细菌逆行感染，多见于女性，多为单一细菌感染，以大肠埃希菌感染最常见,泌尿系统解剖结构和生理功能改变引起的感染,大肠埃希菌、克雷伯菌、变形杆菌、肠杆菌、普罗威登菌、沙雷菌、不动杆菌、假单胞菌、葡萄球菌、肠球菌,多见于留置导尿管、肾盂造瘘术、尿路结石、尿路重建、前列腺肥大
3、、膀胱排空能力受损的患者，容易发生多种微生物的混合感染，易被误认为标本污染,发生于菌血症的患者，血液中的细菌通过血流进入肾脏引起感染，比较少见,血行感染,葡萄球菌、结核分枝杆菌、沙门菌,直接感染,大肠埃希菌、葡萄球菌、链球菌、肠杆菌,外伤或肾周围器官发生感染时，细菌直接侵入肾脏引起感染，非常少见,一、尿液标本采集和运送采集指征：,有典型的尿路感染症状；,肉眼脓尿或血尿；,尿常规检查表现为白细 胞或亚硝酸盐阳性；,不明原因发热，无其他局部症状；,留置导尿管的患者出现发热；,膀胱排空功能受损；,泌尿系统疾病手术前,采集方法：标本采集应力争在未使用抗生素之前，注意避免消毒剂污染标本，方法有：（）清洁
4、中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗会阴部，女性应用手分开大阴唇，男性应翻上包皮，仔细清洗，再用清冲洗尿道口周围；开始排尿，将前段尿排去，中段尿约1020ml直接排入专用的无菌容器中，立即送检，2h内接种。该方法简单易行，是最常用的尿培养标本收集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，应由医务人员采集或在医务人员指导下由患者正确留取。,（）耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，但有一定的痛苦，患者难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。,（）直接导尿：按常规方法对会阴
5、部进行消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液，可减少尿液标本污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道细菌引入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。,（）留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消毒剂，注意不能从尿液收集袋中采集尿液。,采集容器：应由不与尿液成份发生反应的惰性材料制成； 洁净、无菌、加盖、密封、防渗漏； 不含防腐剂和抑菌剂； 广口、具有较宽的底部、容积应大于50ml、盒盖易于开启。,标本运送：标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2h（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存
6、），4C冷藏保存时间不得超过8h，但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。,二、标本验收申请单验收：要求尿培养申请单除患者的基本信息以外还应包括标本收集时间、收集方式、是否已使用过抗生素等，验收时应检查申请单是否填写完整。,标本验收： （）检查标本标识是否与申请单相 符； （）检查标本容器有无溢漏、渗出， 是否加盖； （）检查送检时间是否超过标本保存时 间。,不合格标本处理： （）对申请单信息不全者应设法与 临床医生取得联系； （）对标识不符、送检容器不合格、 送检时间超过规定时间的标本 应注明原因，退回，要求重新 留取标本， 并做记录。,三、实验室检查涂片检查：尿路感染标本可直接做细菌
7、培养无需常规进行涂片检查。对于临床怀疑淋病奈瑟菌、假丝酵母菌或结核分枝杆菌感染的标本可用无菌吸管吸取尿液510ml置无菌试管中，30004000r/min离心30min，倾去上清液，取沉渣涂片，行革兰染色或抗酸染色后镜检。,细菌培养：,（）普通培养：将收集标本的容器轻轻旋转混匀， 用定量接种环分别取尿液1ul涂抹接种血平板和麦 康凯平板（或中国蓝平板），3537C培养18 24h，观察结果。对导尿、耻骨上膀胱穿刺和已使 用抗生素治疗的患者标本应增加一个10ul接种量。,（）特殊培养：对怀疑有苛养菌感染者应采用耻骨 上膀胱穿刺法或导尿法采集标本，加种一块巧克力 平板，置5%CO2环境中培养48h
8、。检查淋病奈瑟菌、 结核分枝杆菌感染时无需做定量培养，可将标本离 心后取尿沉渣进行培养，以提高阳性率。,（）普通培养1824h无细菌生长时，应将所有培 养基继续培养24h。,四、结果观察和报告 结果观察和评价： （）菌落计数：计数平板上的菌落数，采用1ul接种量者，将菌落数乘以103；采10ul接种量者，将平板菌落数乘以102，即为每ml尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）。如菌落生长过多无法精确计数时，则报告105CFU/ml。,（）结果评价：正常情况下从肾脏排泌至膀胱的尿液是无菌的，但膀胱中的尿液经尿道排出体外时可受到下尿道中正常菌群的污染而出现细菌。因此对不同方法获取的尿液标本培养结果需
9、正确评价，才能有效指导临床合理治疗。一般认为，清洁中段尿标本中单种细菌菌落数105CFU/ml可能为感染；5104CFU/ml可能为污染，在两者之间需要根据具体情况进行评估（表2）。,表 不同方法采集的尿标本培养结果评价,标本来源 菌落数CFU/ml 结果评价,清洁中段尿,5104,无意义，仅报告菌落数及革兰染色特征，并注明是纯培养或是混合菌生长,纯培养有意义，报告菌落计数和菌种鉴定及药敏试验结果；混合菌生长无意义，仅做革兰染色镜检，并报告镜检结果,(510)104,纯培养或混合菌生长，其中某种细菌数105者有意义，需进行细菌鉴定及药敏试验；4种及以上细菌生长无意义，报告标本污染,105,3种
10、以内细菌生长都有意义，对2种主要生长菌需进行菌种鉴定及药敏试验；4 种及以上细菌生长无意义，报告标本污染,103,导尿,都有意义，所有细菌均需做菌种鉴定及药敏试验,任意数目,耻骨上膀胱穿刺,阴性培养结果报告： 培养48h无菌落生长，即为阴性。接种1ul尿量者，应报告“培养48h，菌落计数103CFU/ml”；接种10ul尿量者，应报告“培养48h，菌落计数102CFU/ml”。,阳性培养结果报告： 应报告细菌种属名称、菌落计数和药物敏感性试验结果。如：大肠埃希菌生长，菌落计数105CFU/ml，药物敏感性试验结果：,附录 关于尿培养标本的接种： 由于自然排尿收集的标本很难避免会阴部及下尿道细菌
11、污染，所以需要定量接种、合理评价才能判断培养的细菌是否与尿路感染有关。定量接种的方法有直接划线法和倾注平板法二种，后者由于操作繁琐，已几乎不被临床实验室使用。直接划线法的关健是保证接种量的准确性，可使用1ul或10ul的定量接种环，方法是将接种环校准后，以垂直方向持拿，使环圈刚好浸入尿液表面（不可使尿液碰到环上方的环柄），取尿液进行接种。无量接种环的实验室，可使用无菌的5ul微量移液器吸取尿液加入平板，再用接种环划线接种，将平板菌落数乘以200，即为每ml尿液中所含有的细菌数（CFU/ml）。,关于尿培养检验培养基的选择： 没有一种平板可以适合所有尿道病原体的生长，所以应该根据标本来源及临床对
12、目标菌的要求选择合适的培养基和培养条件。普通培养推荐使用血平板和麦康凯（或中国蓝）平板，不能以血平板代替麦康凯或中国蓝平板。,关于尿培养结果评价： 菌落计数105CFU/ml只是诊断尿路感染的一般标准。对一个实验室而言，如果仅使用一个标准对实验结果进行解释，那么若标准制定过松，将会造成抗生素滥用和不必要的资源浪费；制定过严，将有可能导致尿路感染的漏诊。所以每个实验室应在与临床医生密切合作的基础上，根据不同的情况制定不同的解释标准。尿培养菌落计数可受多种因素的影响，在一些患者即使菌落计数较少，也有明显的临床意义，所以对菌落计数5104CFU/ml，“规范”中认为无意义的阳性结果，不应随意丢弃，必
13、要时应根据患者的具体情况或与临床医生联系后，决定是否需要做细菌鉴定和药敏试验。,以下因素可使尿液中细菌数量减少，判断结果时应予以注意：,（）使用抗生素治疗，细菌生长受到抑制；,（）尿液稀释，尿比重1.003，营养成份减少， 细菌生长缓慢；,（）尿频时，膀胱内细菌停留时间短，菌落 数减少；,（）尿道口消毒液混入标本中，影响细菌繁殖， 菌落数减少；,（）不同种类的细菌生长速度不同、营养要求不同， 有文献推荐，革兰阴性菌以菌落计数105CFU /ml，而革兰阳性菌以菌落计数104CFU/ml为诊 断尿路感染的标准。,（）尿pH5.0或8.5，细菌生长受阻；,尿培养检验中常见的错误：,（）将尿液标本接
14、种于增菌液中；,（）将中段尿标本离心后取沉渣进行一般 细菌培养；,（）标本保存时间超时，细菌大量繁殖；,（）直接用导尿管头划线培养；,（）使用中段尿标本做厌氧菌培养。,谢谢大家！,思考练习题： 1.尿路感染常见病原菌？ 答：革兰阴性菌：大肠埃希菌、变形杆菌、克雷伯菌、肠杆菌、假单胞菌、沙雷菌、不动杆菌、淋病奈瑟菌、沙门菌；革兰阳性菌：葡萄球菌、链球菌、肠球菌、酵母样真菌。 2.清洁中段尿培养结果评价和报告？ 答：菌落计数5104 CFU/ml时，无意义，仅报告菌落数及革兰染色特征，并注明是纯培养或是混合菌生长。菌落计数为(510)104 时，纯培养有意义，报告菌落计数和菌种鉴定及药敏试验结果；混合菌生长无意义，仅做革兰染色镜检，并报告镜检结果。菌落计数105 时，纯培养或混合菌生长，其中某种细菌数105者有意义，需进行细菌鉴定及药敏试验；4种及以上细菌生长无意义，报告标本污染。,
