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1、乳糖化去甲斑蝥素硕士论文：乳糖化去甲斑蝥素; 三甲基壳聚糖; 肝靶向; 纳米粒乳糖化去甲斑蝥素乳糖化去甲斑蝥素 N-N-三甲基壳聚糖纳米粒的研究三甲基壳聚糖纳米粒的研究【摘要】 目的合成中性条件下有良好溶解特性的 N-三甲基壳聚糖(N-trimethylchitosan, TMC)，并以其为载体，以具有主动肝靶向的乳糖化去甲斑蝥素为模型药物，制备乳糖化去甲斑蝥素三甲基壳聚糖纳米粒(Lactosyl-norcantharidin-associated N-trimethyl chitosan nanoparticles，Lac-NCTD-TMC-NPs),从纳米粒的被动靶向和 Lac-NCTD
2、的主动靶向两个方面，达到药物在体内的双重肝靶向识别，增加 Lac-NCTD 的抗肝癌疗效。方法(1)通过烷基化反应，在壳聚糖的自由氨基上连接上三个甲基，得到 N-三甲基壳聚糖。经红外光谱、1HNMR 表征确证 N-三甲基壳聚糖的结构，并通过特性黏度测定三甲基壳聚糖的分子量。以 N-三甲基壳聚糖为载体，采用离子交联法制备乳糖化去甲斑蝥素三甲基壳聚糖纳米粒，通过单因素和正交设计等方法优化纳米粒的处方工艺。利用红外光谱等技术对纳米粒进行表征，并考察不同介质中纳米粒胶体的释放特性。(2)以 Caco-2 细胞为模型，评价 Lac-NCTD 及其纳米粒的吸收情况。考察了时间、温度、浓度、外排作用对药物摄
3、取. 更多还原【关键词】 乳糖化去甲斑蝥素; 三甲基壳聚糖; 肝靶向; 纳米粒;中文提要 4-6Abstract6-7引言 12-21第一章 三甲基壳聚糖的合成及纳米粒的制备 21-34材料 21方法与结果 21-33一、N-三甲基壳聚糖的制备 21-22二、N-三甲基壳聚糖的结构表征 22-241. 红外(FT-IR)图谱 22-232. 核磁共振(1HNMR)图谱 233. 黏度和分子量计算 23-24三、纳米粒的制备 24-301. 乳糖化去甲斑蝥素的含量测定 24-251.1 HPLC 色谱条件 241.2 标准曲线 241.3 精密度 24-251.4 回收率 252. 制备方法 2
4、53. 质量评价 25-263.1 粒径分布和多分散指数 253.2 包封率 253.3 载药量 25-264. 纳米粒的制备处方优化 26-285. 优化的纳米粒制备工艺 28-305.1 纳米粒粒径 285.2 红外表征 28-295.3 透射电镜表征 29-30四、N-三甲基壳聚糖纳米粒的体外释放特性 30-33讨论与小结 33-34第二章 乳糖化去甲斑蝥素及纳米粒的吸收机制研究 34-55材料 34-35方法与结果 35-53一、Caco-2 细胞模型的建立和验证 35-381. 细胞培养条件 352. 细胞模型的验证 35-382.1 细胞形态和酶表达情况 35-362.2 TEER
5、(跨膜电阻值)测定 36-372.3 电镜观察细胞单分子层形态与结构 372.4 酚红转运 37-38二、乳糖化去甲斑蝥素及纳米粒在 Caco-2 细胞模型中的摄取 38-471. 乳糖化去甲斑蝥素细胞样品的高效液相色谱分析方法的建立 38-401.1 HPLC 色谱条件 38-391.2 线性范围 391.3 回收率和精密度 39-402. MTT 实验 40-413. 摄取实验 41-473.1 时间对摄取的影响 41-423.2 浓度对摄取的影响 42-433.3 介质 pH 值对摄取的影响 433.4 温度对摄取的影响 43-443.5 外排抑制剂对摄取的影响 44-453.6 纳米粒
6、的细胞摄取实验 45-463.7 FITC 标记纳米粒的制备及摄取实验 46-47三、乳糖化去甲斑蝥素及纳米粒在 Caco-2 细胞模型中的双向转运 47-531. 转运实验中乳糖化去甲斑蝥素高效液相色谱分析方法的建立 47-481.1 HPLC 色谱条件 471.2 线性范围 47-481.3 回收率和精密度 482. 转运实验 48-532.1 浓度对转运的影响 48-492.2 外排作用对药物转运的影响 49-502.3 细胞内吞和旁路转运对药物转运的影响 50-512.4 纳米粒的转运实验方案 51-53讨论与小结 53-55第三章 纳米粒的体外药效学和靶向性评价 55-69材料 55
7、-56方法与结果 56-68一、对肝肿瘤细胞的毒性 56-58二、凋亡检测 58-611. Hochest33258 染色 58-592. 流式细胞术检测细胞凋亡(Annexin V- FITC/ PI 双染色法)59-61三、肝肿瘤细胞的摄入 61-681. HPLC 法定量分析 61-631.1 色谱条件 611.2 线性范围 611.3 回收率和精密度 61-621.4 HepG2 细胞对 Lac-NCTD 及其纳米粒的摄入 62-632. 激光共聚焦显微镜观察 FITC 标记纳米粒在细胞内的摄入与分布 63-653. 原子力显微镜观察纳米粒的细胞摄入过程 65-68讨论与小结 68-6
8、9第四章 近红外小动物活体成像 69-73材料 69-70方法与结果 70-72一、荷瘤裸鼠模型建立 70二、Cy7 标记纳米粒的制备 70-711. Cy7 标记 CS 和 TMC 的制备 702. Cy7 标记的 Lac-NCTD-CS-NPs 和 Lac-NCTD-TMC-NPs 的制备 70-71三、Cy7 标记的纳米粒在裸鼠体内的近红外荧光成像 71-72讨论与小结 72-73第五章 纳米粒的体内药效学评价 73-80材料 73-74方法与结果 74-79一、荷瘤小鼠模型建立 74二、纳米粒在荷瘤小鼠体内的抗肿瘤活性 74-791. 抑瘤率 74-752. 小鼠肿瘤的病理组织学观察 75-773. 小鼠各脏器的组织学观察 77-79讨论与小结 79-80全文总结 80-83参考文献 83-90
