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1、植物生理学实验操作指南,植物生理实验室2005，9,实验一 淀粉酶的提取及作用,原理：1.淀粉 淀粉酶水解 蓝色糊精 红色糊精 无色糊精 麦芽糖 葡萄糖2.葡萄糖+斐林试剂 Cu2O(砖红色）,植物材料与实验器具：,植物材料： 萌动的小麦 实验器具： 试管 ；玻棒；量筒；研钵；漏斗；电炉；水浴锅 试 剂： 2%淀粉溶液；稀I-KI 溶液（原液稀释5倍）；斐林试剂,操作步骤：,1. 取5-10粒萌动的小麦种子放入研钵中， 用量筒取10ml蒸馏水作为淀粉酶提取液总量（包括研钵清洗、种子研磨），分三次加入，将小麦研成浆状，用脱脂棉过滤于试管中,摇匀。 滤液静置5-10min ,上清液为淀粉酶的提取液
2、。,操作步骤：,2. 取2只刻度试管做标记A管、B管 A管：2ml 2%淀粉液+2ml蒸馏水 38 B管：2ml 2%淀粉液+2ml淀粉酶提取液 20min加I-KI 23滴 观察并比较两管颜色变化。,3.B管+3ml 斐林试剂 沸水浴25min观察颜色变化作业： 1.记录观察结果并作必要的分析。,操作步骤：,实验二 植物组织水势的测定,原理：根据渗透作用的原理，用小液滴法测得蔗糖溶液与植物组织中之间的等渗浓度，根据公式 W (细胞水势) = s = CRT 求得溶液的水势，从而得知植物组织的水势。,材料与实验器具：,植物材料：女贞叶片 实验器具：细滴管；试管及指形管；烧杯；镊子、剪刀；移液管
3、；标签纸 试 剂：1 mol/L蔗糖溶液；甲烯蓝溶液,操作步骤：,1.用短滴管吸取1M蔗糖溶液取0.5ml、 1ml、 2ml、 3ml 、4ml 分别放入10ml 刻度试管中，加蒸馏水至10ml，盖上塞子上下倒转混匀，配成0.05M、0.1M、0.2M、0.3M、0.4M的糖液。,操作步骤：,2.用移液管从浓度各试管中吸出1ml注入对应的指形管内，各管均加塞，并贴上标签。,操作步骤：,3.将女贞叶片在叠在一起，沿中脉两边用钻孔器打取10片小圆片，分别放入小指形管内，盖上木塞，放置20min(期间摇动23次）后，加甲烯蓝2滴摇匀。,操作步骤：,4.用长滴管吸取着色溶液放入原相应的蔗糖溶液中，慢
4、慢放出一滴蓝色溶液，在白色纸片上观察小液滴升降情况，并作记录。,作业：,1.记录小,作业：,2.按下列公式计算组织的水势： W (细胞水势) = s = CRT 式中： s 溶液的渗透势，以 MPa 为单位。 R 气体常数，为 0.008314 MPaL/（molK ）。 T 绝对温度，即 273 + t , 单位为K。 C 溶液的摩尔浓度，以 mol/L 为单位。,思考题：,1.用小液流法测定植物组织水势时，为什么应强调所用试管、毛吸管应保持干燥2.打取小圆片并投入试管中时动作应迅速，加入甲烯蓝不能太多？,实验三 叶绿素含量的测定,原理： 根据朗伯比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度
5、C和液层厚度L成正比 。 叶绿素在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。 根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量。,材料与实验器具：,植物材料： 女贞、海桐叶片 实验器具： 分光光度计；电子天平； 研钵； 试管； 小漏斗；滤纸； 吸水纸； 移液管 ；量筒； 剪刀 试 剂： 95乙醇（或80丙酮）；石英砂；碳酸钙粉,操作步骤：,1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及35ml 95乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置35min。,操作步骤：,2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用
6、少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。,操作步骤：,3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ，摇匀。,操作步骤：,4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95乙醇为空白，在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。,操作步骤：,5. 计算公式： 叶绿素的含量（mg/g）= O.D652/34.5提取液体积稀释倍数/样品鲜重（或干重）。Ca=13.95A6636.88A645； Cb=24.96A6457.32A663,作业：,1.计算并比较两种植物叶绿素含量。思考题：为什么提取
7、叶绿素时干材料一定要用 80的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？,实验六 过氧化氢酶活力测定,原理：过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化H2O2分解为水和O2 ，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶的活力大小。用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。,KMnO4与H2O2反应方程式如下：5H2O2+2KMnO4+3H2SO4K2SO4+MnSO4+8H2O+5O2,材料与实验器具：,植物材料：海桐茎、叶片等 实验器材：研钵；电炉；水浴锅； 酸式滴定管； 量筒；锥形瓶；漏斗 ；试管；移液管 试 剂：0.1mol/L
8、高锰酸钾标准液；1% H2O2 ； 10%H2SO4；CaCO3 粉,操作步骤：,1. 酶液提取：取叶片0.5 g（或茎）加入少量蒸馏水，加CaCO3 粉及石英砂少许，研磨成匀浆，再加蒸馏水至总量25ml，在室温下浸提10分钟，不时摇动，用脱脂棉过滤于小烧杯中, 静置上清液即为过氧化氢酶的粗提液。,操作步骤：,2.吸取5ml酶提取液放入一试管中，置沸水中加热5分钟，使酶失活。 3.取50ml三角瓶2个（1个测定,另1个为对照） 失活酶液(对照) CAT酶液 +20ml蒸馏水+1% 1ml H2O2摇匀 40度水浴反应（10min）+2ml10%H2SO4终止反应 0.1mol/LKMnO4滴定
9、,操作步骤：,4.滴定终点以瓶中溶液保持浅红色20秒不消失为准,记录所用的高锰酸钾的量。 5.酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示： 过氧化氢酶活性（H2O2mg/g.min）（AB）VT1.7/(WVSt),操作步骤：,式中：A对照KMnO4滴定ml数；B酶反应后KMnO4滴定ml数；VT提取酶液总量（ml）；VS反应时所用酶液量（ml）；W样品鲜重（g）；t反应时间（min）；1.7为1ml 0.1mol/L KMnO4 相当于1.7mg H2O2。,作业：,计算CAT 活性的大小。 查找资料测定CAT其它的方法。 思考题： 实验中加碳酸钙的作用是什么？,实验四 叶绿素的提取、分离 及化学性质鉴定,实验目的：掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。 一、提取、分离原理： 1、溶解性。叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取,？ ？ ？ ？,2、吸附性。滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同(？)，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。,植物材料,冬青叶片1.0g,
