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1、第四章 血细胞分析仪及其应用,前 言,随着电子技术、流式细胞技术、激光技术、电子计算机和新荧光物质等多种高科技技术在医学检验领域的广泛应用，许多传统的繁杂的手工操作逐渐被仪器分析所取代，使临床血液检验学的面貌发生了巨大的变化，血细胞分析仪就是万花丛中的一只亮丽的花朵,学习目标,理解血细胞分析仪检测红细胞、白细胞、 血小板的基本原理 掌握血细胞分析仪检验参数的临床意义 学会看血细胞分析仪检测报告单并能说出 血细胞直方图的临床应用 了解血细胞分析仪检查的质量控制,血细胞分析仪主要功能,血细胞计数。 白细胞分类。 绘制白细胞、红细胞、血小板体积大小分布和一定体积细胞相对频率的直方图和散射图。,本章目
2、录,第一节 血细胞分析仪的检测原理 第二节 血细胞分析仪的类型及报告方式 第三节 血细胞分析仪各项参数与直方图的临床意义 第四节 血细胞分析仪质量控制,一、细胞计数测定原理,（一）电阻抗检测原理,一、细胞计数测定原理,放大 阈值调节 甄别整形 计数,（一）电阻抗检测原理 脉冲信号后产生依次通过下列步骤完成细胞计数过程 ：,一、细胞计数测定原理,（一）电阻抗检测原理,一、细胞计数测定原理,（二）流式细胞术与光散射法检测原理细胞随着流体动力聚集的鞘流液逐个通过激光照射的检测区时，使光束发生折射、衍射和散射，散射光由光检测器接受后产生脉冲，脉冲大小与被照细胞的大小成正比，脉冲的数量代表了被照细胞的数
3、量。,一、细胞计数测定原理,（二）流式细胞术与光散射法检测原理,一、细胞计数测定原理,（二）流式细胞术与光散射法检测原理,二、白细胞分类原理,（一）白细胞二分群、三分群分类计数原理白细胞计数时除加入一定量稀释液外还要加入溶血剂，红细胞迅速溶解同时使白细胞膜通透性改变，白细胞胞质中部分物质经细胞膜渗出，使细胞膜紧裹在细胞核或存在的颗粒物质周围，所以经溶血剂处理后含有颗粒的粒细胞比无颗粒的单核细胞和淋巴细胞要大些。,二、白细胞分类原理,（一）白细胞二分群、三分群分类计数原理根据电阻抗原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异，依据脉冲的大小，血细胞分析仪可对白细胞进行分群。三分群法
4、的第一群为小细胞区，体积为3590f1，主要为淋巴细胞；第二群为中间细胞区也称单个核细胞区，体积90160fl，包括幼稚细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞；第三群为大细胞区，体积160f1以上，主要为中性粒细胞。,二、白细胞分类原理,（一）白细胞二分群、三分群分类计数原理血细胞分析仪根据各群细胞占总体积的比例计算出百分比，与该标本的白细胞总数相乘，即可得出各项细胞的绝对值。同时根据白细胞体积大小情况显示白细胞直方图,二、白细胞分类原理,电阻抗法白细胞分类示意图,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理1.容量、电导、光散射（VCS）白细胞分类法体积（V）测量技术：应用电阻抗原理测量细
5、胞体积；电导（C）技术：采用高频电磁探针测量细胞内部结构，如细胞核、细胞质比例、细胞内颗,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理1.容量、电导、光散射（VCS）白细胞分类法光散射（S）技术：激光源的单色光直接扫描计数敏感区细胞，根据细胞产生的不同角度散射光（1070），提供细胞形态、胞核结构等光散射信息，并鉴别细胞颗粒的构型和颗粒质量，细胞粗颗粒的光散射要比细颗粒更强，以此区别粒细胞类型。,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理2. 电阻抗与射频技术联合白细胞分类法(1)嗜酸性粒细胞检测系统 血液进入仪器后，血液与嗜酸性粒细胞特异计数的溶血剂混合，由于其特殊的pH，使除嗜酸性粒
6、细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，因而通过小孔产生脉冲被计数的只有完整的嗜酸性粒细胞。,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理2. 电阻抗与射频技术联合白细胞分类法(2)嗜碱性粒细胞检测系统 原理同嗜酸性粒细胞。在特殊溶血剂的作用下，血液中被计数的只有嗜碱性粒细胞。,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理2. 电阻抗与射频技术联合白细胞分类法(3)淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）检测系统 此系统采用电阻抗与射频联合检测。溶血素作用较轻，对细胞形态改变不大。在测量小孔的内外电极上存在直流和高频两个光射器及直流电和射频两种电流。直流电测量细胞大小，但不能透过细胞质，射频可透入
7、细胞内，测量核的大小及颗粒多少。,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理2. 电阻抗与射频技术联合白细胞分类法(3)淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）检测系统 细胞进入小孔时产生两个不同的脉冲信号，脉冲的高低分别代表细胞大小（DC）、核及颗粒的密度（RF），以DC信号为横坐标，RF为纵坐标，根据这两个信号把一个细胞定位于二维的细胞散射图上。根据中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的细胞大小、胞质含量、颗粒大小与密度，核形态与密度不同，得出各类细胞比例。,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理2. 电阻抗与射频技术联合白细胞分类法(4)幼稚细胞检测系统 由于幼稚细胞膜上脂质较成
8、熟细胞少，在细胞悬液中加入硫化氨基酸后，幼稚细胞结合硫化氨基酸较成熟细胞多，且对溶血剂有抵抗作用，当加入溶血剂后成熟细胞易被溶解，幼稚细胞形态不受破坏，因此可通过电阻抗法检测出。,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理3. 光散射与细胞化学技术联合白细胞分类计数此类仪器联合利用激光散射和过氧化物酶染色技术进行血细胞分类计数。如果待测细胞质中含有过氧化物酶，能催化一种供氢（电子）体脱氢，使结构发生改变而出现色基显色。,二、白细胞分类原理,（二）白细胞五分类计数原理3. 光散射与细胞化学技术联合白细胞分类计数利用酶反应强度不同（阴性、弱阳性、强阳性）和细胞体积大小不同，激光光束射到细胞上所
9、得前向角和散射角不同，以X轴为吸光率（酶反应强度），Y轴为光散射（细胞大小），每个细胞产生两个信号并结合定位在细胞图上。,三、红细胞测定原理,（一）红细胞（RBC）和血细胞比容（Hct）红细胞和血细胞比容测定同前述细胞计数及体积测定原理。脉冲的多少与红细胞数目成正比，脉冲高度决定单个红细胞体积，脉冲高度叠加经换算可得到血细胞的比容。,三、红细胞测定原理,（二）血红蛋白（Hb）红细胞经溶血剂溶解释放出Hb,并与溶血剂有关成分形成Hb衍生物，在540nm特定波长下比色，吸光度与Hb含量成正比，可直接反映Hb浓度。,三、红细胞测定原理,（三）其他红细胞参数MCV、MCH、MCHC及RDW等指数，均根
10、据分析仪检测的RBC、HCT和Hb的实验数据经换算得出,四、血小板分析原理,血小板随红细胞在同一个系统进行检测，由于血小板体积与红细胞体积有明显差异，血细胞分析仪设定了特定的阈值，分别计数血小板与红细胞。根据所测血小板体积大小自动计算出血小板平均体积（MPV）。,五、网织红细胞检测原理,流式细胞仪（FCM)通过应用网织红细胞中RNA与荧光染料结合时会发出特定颜色荧光的原理，对网织红细胞中RNA进行定量，然后精确计算出网织红细胞占成熟红细胞的百分率（RET）。,第二节 血细胞分析仪的类型及报告方式,一、半自动二分群血细胞分析仪 二、全自动三分群血细胞分析仪 三、全自动五分类血细胞分析仪 四、全自
11、动五分类血细胞分析仪连接网织细胞检测 五、血细胞分析仪的工作流程,一、半自动二分群血细胞分析仪,（一）仪器性能 1仪器为双通道，容易操作，检测速度为每小时60份标本。 2用血量少，准确性、重复性好。 3测定结果超过正常界限和直方图异常，可出现警示符号。 4有质控资料及标本检测资料贮存、手工鉴别、设备警告系统等软件程序。 5仪器状况可自动监测，有的具有自动灼烧功能，可自动冲洗或手动冲洗。,一、半自动二分群血细胞分析仪,（二）检测项目 不同仪器可检测815项参数及3个直方图，主要有WBC、 RBC、Hb、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT、小型白细胞比率（W-SCR）、大型白细胞比率（W-L
12、CR）、小型白细胞计数（W-SCC）、大型白细胞计数（W-LCC）、红细胞分布宽度（RDW）、血小板分布宽度（PDW）、血小板平均体积（MPV），并打印白细胞、红细胞及血小板直方图。,一、半自动二分群血细胞分析仪,二、全自动三分群血细胞分析仪,（一）仪器性能 1检测速度每小时6080份标本。 2二种溶血素。 3仪器线性范围宽、重复性好、准确性高、变异范围小。 4有的能定量检测、自动冲洗，污染率几乎为零。 5自动化程度较高，有监控系统。 6配有质控资料及标本检测资料贮存等软件程序。,二、全自动三分群血细胞分析仪,（二）检测项目 除二分群的15项参数外，还增加了中等大小白细胞比率（W-MCR）、中
13、等大小白细胞计数（W-MCC）及大血小板比率（P-LCR），包括18项参数及3个直方图。,二、全自动三分群血细胞分析仪,（三）报告方式 各项参数经血细胞分析仪计算并自动打印输出报告单。,三、全自动五分类血细胞分析仪,（一）仪器性能 1速度快，每小时110150个标本。 2具有检测有核红细胞的功能。 3有专用幼稚细胞检测通道和试剂。 4白细胞分类更精确。 5具备强大的网络功能及完善的数据管理系统。 6具有高效、自动的标本资料管理及强大的工作平台。 7具有无错进样管理系统。 8可形成自动化模块。,三、全自动五分类血细胞分析仪,（二）检测项目可检测25项参数或更多。,三、全自动五分类血细胞分析仪,（
14、三）报告方式,四、全自动五分类血细胞分析仪连接网织细胞检测,（一）仪器性能 1准确性高。 2精确度达97以上，并可将网织红分类为HFR、 MFR及LFR。 3自动化程度高，每小时可测60份标本。 4可形成自动化模块。,四、全自动五分类血细胞分析仪连接网织红细胞检测,（二）检测项目 有关网织红细胞检测的项目,五、血细胞分析仪的工作流程,第三节 血细胞分析仪各项参数与直方图的临床意义,一、血细胞分析仪的各项参数 二、血细胞分布图的临床意义,一、血细胞分析仪的各项参数,（一）血细胞分析仪红细胞检验参数及临床应用1红细胞参数及参考区间,一、血细胞分析仪的各项参数,（一）血细胞分析仪红细胞检验参数及临床
15、应用2红细胞参数的临床应用 红细胞计数、血红蛋白测定、血细胞比容、红细胞平均数的临床意义参见第三章。,一、血细胞分析仪的各项参数,（一）血细胞分析仪红细胞检验参数及临床应用2红细胞参数的临床应用 红细胞体积分布宽度（RDW）RDW是反映红细胞体积大小异质性的参数，以标准差或变异系数来表示（CV%），有助于贫血的诊断与鉴别诊断。,一、血细胞分析仪的各项参数,（一）血细胞分析仪红细胞检验参数及临床应用2红细胞参数的临床应用 （2）红细胞血红蛋白分布宽度（HDW） HDW是反映红细胞内Hb含量异质性的参数，用单个红细胞Hb含量的标准差表示。,一、血细胞分析仪的各项参数,（一）血细胞分析仪红细胞检验参
16、数及临床应用HDW的临床意义 ：,一、血细胞分析仪的各项参数,（二）血细胞分析仪白细胞和血小板检验参数及临床应用 1白细胞和血小板参数及参考区间,一、血细胞分析仪的各项参数,（二）血细胞分析仪白细胞和血小板检验参数及临床应用 2白细胞和血小板参数的临床应用MPV是指血小板平均体积，用（fl）表示，增高表示巨核细胞成熟度高，反之则低。PDW是反映外周血血小板体积大小异质性的参数，用血小板体积的变异系数来表示，主要用于血小板异常疾病的辅助诊断与鉴别诊断。,一、血细胞分析仪的各项参数,（二）血细胞分析仪白细胞和血小板检验参数及临床应用 MPV与PDW检测临床意义,一、血细胞分析仪的各项参数,（三）血细胞分析仪网织红细胞检验参数及临床应用 1网织红细胞参数。 2网织红细胞参数的临床应用 网织红细胞计数、网织红细胞绝对值、百分率测定是反映骨髓红细胞造血功能的重要指标。,
