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1、PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒 96 人份62794PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒是用于检测血清和肺泡灌洗液中的曲霉菌半乳甘露 聚糖抗原的一种免疫酶夹心法微板分析技术仅用于体外诊断 1- 用途PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒是用于检测成人血清样本中的曲霉菌半乳甘露聚糖抗 原的一种免疫酶夹心法微板分析技术。 PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒是一种实验， 当它联合其它诊断步骤， 如微生物培养， 活组织切片的病理分析和放射影像诊断依据时，被作为侵袭性曲霉菌病诊断的一种辅助方 法。2- 使用说明 PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒是用于检测
2、成人和儿科血清样本和肺泡灌洗液中的曲 霉菌半乳甘露聚糖抗原的一种免疫酶夹心法微板分析技术。 PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒是一种实验， 当它联合其它诊断步骤， 如微生物培养， 活组织切片的病理分析和放射影像诊断依据时，被作为侵袭性曲霉菌病诊断的一种辅助方 法。3- 概述和解释 曲霉菌感染通常开始于肺部开放部位吸入了环境中的曲霉菌孢子之后。 侵袭 性感染是构成曲 霉菌感染的最严重形式，在最近的 10 年里呈增长趋势。这些感染主要发生 在中性粒细胞减 少症病人（抗癌治疗引起）和免疫抑制剂治疗的病人（器官移植，特别是骨 髓移植）以及使 用皮质激素治疗的病人中 10。 曲霉菌几乎不能从血
3、培养基中分离出来， 诊断通常建立在非特异性诊断或放射影像学检查结 果上（临床症状，CT 扫描，胸部 X-光检 查，等） 。 目前， 血清中可溶性曲霉菌半乳甘露聚糖抗原检测， 已成为可用于侵袭性曲霉菌感染诊断的 血清学方法 9，12，24，53，61。 另外， 对于接受器官移植的患者， 肺泡灌洗液中曲霉菌半乳甘露聚糖抗原的检测已经被证实 是一种有利的诊断侵袭性曲霉菌感染的方法。 4- 操作原理 44PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒实验是一步法免疫酶夹心微板分析，用于检测人类血 清和肺泡灌洗液中的半乳甘露聚糖。实验采用的鼠 EBA-2 单克隆抗体，直接检测曲霉菌半 乳甘露聚糖，这在先前
4、的研究 26，45 中已经对其特征进行过描述。该单克隆抗体用于（1）包 被微板小孔并结合抗原，且（2）检测结合到已激活微板（结合物试剂：过氧化物酶连接的 单克隆抗体）上的抗原。EDTA 抗凝的血清样本已经过加热处理，以便分离免疫复合物和沉 淀可能干扰实验的血清蛋白质 12。 处理过的血清样本和结合物加入到已经包被过单克隆抗体 的微板小孔里，孵育。在存在半乳甘露聚糖抗原的条件下，形成单克隆抗体-半乳甘露聚糖- 单克隆抗体/过氧化物酶复合物。 冲洗微板上反应条的小孔，去除所有没有结合的物质。接 下来，加入基质液，基质液将和结 合到小孔上的免疫复合物反应，呈现出蓝色。加入酸溶液 后，终止酶反应，加入
5、的酸溶液使 蓝色变成黄色。用设置在 450nm 和 620/630nm 波长的分 光光度计测定样本和对照的吸光度（光密度） 。5- 试剂 PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒：产品号 62794（96 人份） 试剂盒储存于 2-8。使用前，把所有试剂置于室温（18-25） 。使用后，所有试剂立即返 回到 2-8储存。未使用的微孔条重新装入袋中并密封。不要去除干燥剂。稀释后，洗液在 2-30条件下可保存 14 天，其他试剂应在 8 周内用完。96 人份试剂盒，在最大 9 批次的实 验中，提供的试剂足够完成 96 人份检测。组成组分数量R1微孔板微孔板： -96 孔（12 根反应条，每条
6、8 孔）用 抗-半乳甘露聚糖单克隆抗体包被 -反应条面上标记有“85”1 板/ 128 孔R2浓缩清洗液（20 倍）浓缩清洗液（20 倍） ： -Tris Nacl 缓冲液（pH7.4） -2% Tween20 液 -防腐剂：1.50阴性对照：阴性对照血清指数必须小于 0.40 阴性对照光密度（R3）I=Cut-off 对照光密度均值1.50，表示阳性对照有效 因为实验结果符合每个对照的有效标准， 在该例子中的实验运行被认为是有效的。 12- 结果的解释 在受检样本中是否存在或缺失半乳甘露聚糖抗原， 可通过每个病人样本的指 数计算来断定。 指数（I）是样本的光密度值除以含 Cut-off 对照
7、血清的小孔光密度值均值 得到的。Cut-off 对照光密度均值的计算合并含 Cut-off 对照血清（R4）两个小孔的光密度，总和除以 2。 每个受检血清指数（I）的计算： 为每个受检血清计算下面的比 率： 样本光密度I=指数0.50 的血清的解释：Cut-off 对照光密度均值指数0.50 的血清被认为是半乳甘露聚糖抗原阴性 注释：阴性结果表示病人的结果低于实 验的可检测水平。 阴性结果不排除侵袭性曲霉菌感染的诊断。如果结果是阴性的，而怀疑 感染了疾病，建议重做检测。 指数0.50 的血清的解释：指数0.50 的血清被认为是半乳甘露聚糖抗原阳性 对于所有阳性病人，建议随后的检测， 从同一样本
8、中取新的一等份重做检测，如同从病人 采集新样本一样。 注释：吸光度低于 0.000，可以表示实验步骤或设备出错，应当对错误进行评估。实验结果无效并且标本需要重做。 高风险病人的常规筛选（每周两次）建议增加实验的灵敏度和 早期的阳性率。 注释：PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒实验用于帮助侵袭性曲霉菌 感染的诊断。从 PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒实验获得的阳性结果应联合其他诊 断步骤如微生物 培养，活组织切片的病理分析以及放射影像学检查结果一起来参考。计算举例： 样本吸光度（光密度）阴性对照（R3）光密度0.116Cut-off 对照液（R4）光密度0.513 0.53
9、3阳性对照（R5）光密度1.834病人样本 10.134病人样本 20.436病人样本 31.196计算 关于计算举例，请参看质量控制（有效标准）章节来判定分析对照的有效性 Cut-off 对照均值为了计算 Cut-off 对照液（R4）光密度的均值，将每个 Cut-off 对照液平行测定的光密度值 相加，结果除以 2：病人样本 1（0.513+0.533）2=0.523为了计算病人样本 1 的指数，将病人样本 1 的光密度值除以 Cut-off 对照液的光密度均值： 0.134I=0.523=0.26在此例子中，病人样本 1 是阴性的，因为指数 0.260.50病人样本 2为了计算病人样本
10、2 的指数，将病人样本 2 的光密度值除以 Cut-off 对照液的光密度均值： 0.436I=0.523=0.83在此例子中，病人样本 2 是阳性的，因为指数 0.830.50 病人样本 3 为了计算病人样本 3 的指数，将病人样本 3 的光密度值除以 Cut-off 对照液的光密度均值： 1.196I=0.523=2.29在此例子中，病人样本 3 是阳性的，因为指数 2.290.50 请参考 12 章，阳性结果的解释 13- 操作步骤的限制 1. 阴性实验结果不排除侵袭性曲霉菌感染的诊断。 有感染侵袭性曲霉菌风险的病人， 应当 每周接受两次检查。 2. 当检测样本是否存在半乳甘露聚糖抗原时
11、，必须执行 PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试 剂盒实验操作步骤并对实验结果进行解释。试剂盒的使用者被建议在做此实验前，仔细阅 读试剂盒的内包装说明书。特别是。对于样本和试剂加样，微板冲洗，孵育步骤的时间等 必须仔细遵守实验步骤。 3. 由于没有按照操作步骤中指示的步骤加样或加试剂，可能导致假阴性结果。如果临床上 怀疑感染了侵袭性曲霉菌或操作步骤有误，应当用另一份样本，重新检测。 4. 由于在加入试剂过程中，处理微板粗燥或加样技术低劣，造成小孔间的溶液溅落到另一 个小孔里，进而使得阴性病人样本小孔可能被阳性对照液/阳性病人样本小孔的溶液污染。 5. PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测
12、试剂盒的性能还没有用新生儿血清样本来评估。在欧洲文 献中， 新生儿和儿科人群 13，15，33，44 中样本报道的半乳甘露聚糖假阳性具有较高的发生率。6. PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒实验在患有慢性半乳甘露聚糖疾病和 Jobs 综合征56，57 的病人中，样本的半乳甘露聚糖检出率减低。7. 在部分感染侵袭性曲霉菌的病人中，同时采用抗真菌治疗，可能导致 PLATELIA TM 曲 霉菌抗原检测试剂盒灵敏度降低。 8. PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒还没有用血浆或其他样本类型，例如尿液或脑脊液 来进行评估。 9. PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒还没有建立
13、起人工读数和/或目视结果判定的性能。 10. 其他类型的真菌如青霉属，链格孢属，拟青霉属，地霉菌属和组织胞浆菌属显示和老 鼠 EBA-2 用于检测曲霉菌半乳甘露聚糖的单克隆抗体反应。 组织胞浆菌病流行病学区域应 包括美国的一些地区 35，49，58。 11. 没有临床症状的阳性反应： 通常认为血清/肺泡灌洗液中半乳甘露聚糖抗原的早期检 测甚至在临床症状和/或放射影像 学特征出现前可以被检测到。常常观察到没有临床体征 而出现阳性反应：他们在病人的实 验中对应于“真阳性” ，这些病人已经被证明或随后可 能建立侵袭性曲霉菌感染的诊断。 尽管如此，在部分特殊病例中，当解释实验时，有些因 素应被考虑进去
14、： a.已经报告的没有临床症状的阳性反应，特别是年幼的儿童 43。尽管这些病例中的部分病例和曲霉菌抗原的实际循环相关，但是这些病例的大部分则被认为是假阳性 7。b.半乳甘露聚糖抗原已经被证实存在于多种食物里，特别是谷类食品，谷类产品和奶油 点心 1，27 中。和人类奶汁不同，人原化乳汁经常含有高浓度的半乳甘露聚糖 13。因此 饮食因素必须被考虑到年幼儿童发生抗原血症的解释里，尤其在所有消化道屏障 6，13 改变的病人中，更容易发生。在不伴有临床症状的所有阳性抗原血症病例中，对此类 人群的解释，应当更加谨慎。 c.在接受氧哌嗪/三唑巴坦治疗的病人中，已经有报道半乳甘露聚糖实验结果阳性。同样 也有
15、某些批号或批次的氧哌嗪/三唑巴坦被发现半乳甘露聚糖抗原阳性。因此，接受氧 哌嗪/三唑巴坦治疗的病人的阳性结果，解释时应当谨慎，并要用其他诊断方法证实。 半乳甘露聚糖的检测在一些和克拉维酸非肠道准备关联的羟氨苄青批次中被检出，已 经见诸报道。因此，在解释实验 1，3，31 时，半合成的-内酰胺治疗应被考虑进去。 不用说，因为 PLATELIA TM 曲霉菌抗原检测试剂盒实验能够在临床症状或放射影像学 检 查症状出现前，检测出半乳甘露聚糖抗原，不能排除感染了侵袭性曲霉菌。因此， 采 用氧哌嗪/三唑巴坦治疗的病人，出现阳性结果时，解释时应当小心对待。 d. 缺乏临床症状的阳性反应可以在接受含有半乳甘
16、露聚糖治疗产品中检测到， 无论是肠胃 外给药，还是口服（当存在消化道屏障改变时） 。产品中存在的半乳甘露聚糖经常被用来解 释真菌微生物发酵过程的用途。阳性结果在病人样本中检测不到，但是，当外源性半乳甘 露聚糖的血清浓度达到或超过实验的检测阈值，则可以得到阳性结果。 因此，在缺乏表面体征的情况下，如果出现可疑的阳性结果，我们建议调查病人正在服用 的产品并注明它们生产过程和使用的原材料 14，40，4812. 在少数研究中有报告说含有 PLASMA-LYTE的血清和肺泡灌洗液样本中半乳甘露聚 糖呈阳性反应。因此，PLASMA-LYTE的存在应该被考虑为影响试验结果的因素。 13. 应密切注意接近灰区结果的其他诊断元素。 14- 期望值1 血清 期望的侵袭性曲霉菌感染发生率随病人人数的变化而变化；已经报道过的比 率是 5-20%10，16。 下面的结果从在美国的儿科病人和在北美的成人病人的临床研究中获得（年龄21 岁） 。 A 儿科病人 临床研究通过
