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1、1HQBJS/MYXM-14-2014 SOP 文件B14.2【检测原理】甲型肝炎病毒 IgM 抗体检测试纸采用捕获法及胶体金免疫层析技术原理,在聚酯纤维(或无纺布)上预包被金标记 HAV 抗原和鼠单抗,在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗人IgMu 链单抗和抗鼠 IgG 抗体。检测阳性标本时,血清(或血浆)样本中甲型肝炎病毒 IgM 抗体与胶体金中的甲型肝炎病毒抗原结合形成复合物,由于层析作用复合物延纸条向前移动,经过检测线时于预包被的抗人 IgMu 链单抗结合形成“Au-HAV Ag-HAV IgM Ab- 抗人 IgM Ab”夹心物,从而在检测处显示紫红色条带,游离金标鼠单抗则于质
2、控对照线处与抗鼠 IgG 抗体结合,从而在质控线处显示紫红色条带。阴性标本则仅在质控对照线处显示紫红色条带。戊型肝炎病毒 IgM 抗体检测试纸采用捕获法及胶体金免疫层析技术原理,在聚酯纤维(或无纺布)上预包被金标记 HEV 抗原和鼠单抗,在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗人IgMu 链单抗和抗鼠 IgG 抗体。检测阳性标本时,血清(或血浆)样本中戊型肝炎病毒 IgM 抗体与胶体金中的戊型肝炎病毒抗原结合形成复合物,由于层析作用复合物延纸条向前移动,经过检测线时于预包被的抗人 IgMu 链单抗结合形成“Au-HEV Ag-HEV IgM Ab- 抗人 IgM Ab”夹心物,从而在检测处显
3、示紫红色条带,游离金标鼠单抗则于质控对照线处与抗鼠 IgG 抗体结合,从而在2HQBJS/MYXM-14-2014 SOP 文件质控线处显示紫红色条带。阴性标本则仅在质控对照线处显示紫红色条带。B14.3【样本要求】B14.3.1. 在无菌条件下采集静脉血样本,尽快分离血清或血浆以避免溶血。B14.3.2. 检测时应尽量使用新鲜标本。如标本不能及时检测,可在 2-8冷藏 7 天。长期保存需冷冻于-20,反复冻融次数不超过 3 次。B14.3.3. 常规的 0.2mg/ml 肝素和 150mmol/L 的 EDTA-2Na 及2.5枸橼酸钠抗凝剂不影响检测结果。B14.3.4. 溶血标本不适用于
4、本试剂。B14.3.5. 在标本中加入 0.1NaN3 不影响检测结果。3HQBJS/MYXM-14-2014 SOP 文件B14.4【试剂盒组成成分】规格型号组份名称 主要生化成份HAV-HEV 胶体金法试纸卡由甲型肝炎病毒 IgM 抗体试纸、戊型肝炎病毒IgM 抗体试纸、塑料卡、干燥剂、吸管和铝箔袋组成。HAV 试纸由塑料基片、胶体金垫、纤维素膜、上样垫、吸收垫构成。胶体金垫上预包被金标记 HAV 抗原和鼠单抗,在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗人 IgMu 链单抗和抗鼠 IgG 抗体。HEV 试纸由塑料基片、胶体金垫、纤维素膜、上样垫、吸收垫构成。胶体金垫上预包被金标记 HEV
5、抗原和鼠单抗,在硝酸纤维膜检测线和质控对照线处分别包被抗人 IgMu链单抗和抗鼠 IgG 抗体。说明书纸制印制卡型稀释液PH 值为 8.0,主要含有 Tris-Hcl 缓冲液、防腐剂、络蛋白B14.5【检验方法】进行测试前必须先完整阅读使用说明书:4B14.5.1. 在测试卡(不要打开铝箔袋)及待测的样本恢复至室温(20-30)HQBJS/MYXM-14-2014 SOP 文件B14.5.2. 将采集的血清或血浆样品用稀释液按 1:100 倍比例稀释(取 2ul 样本加入到 198ul 稀释液中,混匀)B14.5.3. 从铝箔包装袋中取出测试卡,并标记病人或样品编号,将测试卡平放于台面上。B1
6、4.5.4. 用一次性塑料吸管吸取上述已稀释的血清或血浆,分别滴加 2 滴于二个加样孔内。B14.5.5. 阳性标本可在 115 分钟内检出,建议 15 分钟时在最终观察并记录实验结果,20 分钟后显示的结果无临床意义。注意:从包装铝箔袋中取出的试纸,在室温低于 30及相对湿度小于 65%条件下应于 1 小时内尽快使用;在室温高于 30或相对于湿度大于 65%条件下应立即使用。B14.6【检验结果的解释】B14.6.1.结果显示 编号T(HAV)T(HEV)CHAVHEV1未出现未出现出现阴性阴性2出现出现出现阳性阳性3未出现出现出现阴性阳性4出现未出现出现阳性阴性5未出现未出现未出现无效无效
7、6出现出现未出现无效无效阳性结果表明:标本中检测出甲型肝炎病毒 IgM 抗体/或戊型肝5炎病毒 IgM 抗体。HQBJS/MYXM-14-2014 SOP 文件阴性结果表明:标本中检测不出甲型肝炎病毒 IgM 抗体和戊型肝炎病毒 IgM 抗体。无效:质控对照线未出现紫红色条带,表明不正确操作过程或试剂盒失效。在此情况下应再次阅读说明书,并用新的试纸卡重新检测。如仍存在问题,应立即停止使用该批号产品,并与当地供应商联系,更换新批号合格产品。B14.6.2.质控对照线处出现紫红色条带是作为试纸卡内在控制的标准,以确定是否使用了正确的操作步骤和得到正确的测试结果。B14.6.3.检测不同标本时,检测
8、不同标本时,检测线处的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象,这是由于甲型肝炎病毒 IgM 抗体或戊型肝炎病毒 IgM 抗体浓度高低不同的原因。但是在规定内,不论该色带颜色深浅,即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果。B14.7【检验方法的局限性】B14.7.1. 本产品检测结果仅供临床参考,不应作为临床诊治的唯一依据,对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑。6B14.7.2. 感染初期,病毒特异性 IgM 抗体未产生或滴度很低会导致阴性结果,如怀疑有病毒感染,应提示患者在 7-14 天内复查,抽取第二份样本,并和第一份样本在同条件下同时检测,以确定
9、是否有初次感染的血清转化或病毒特异 IgM 或 IgG 抗体滴度明显升高。HQBJS/MYXM-14-2014 SOP 文件B14.7.3. 高滴度病毒特异性 IgG 抗体会与特异性 IgM 抗体竞争抗原结合部位,会使检测的敏感性降低,IgM 结果可能会出现假性低值或阴性结果。尤其是怀疑先天性病毒感染的新生儿样本,他们的血清中可能含有母亲来源的高水平病毒特异的 IgG抗体和胎儿产生的相对低水平的病毒特异 IgM 抗体,因此,对于该类样本的阴性结果应慎重分析。B14.7.4. 由于脐带血中可能含有源于母体的病毒特异性 IgM 抗体(胎盘渗漏),因此,最好在出生后 5 天内在对婴儿的后续样本进行检
10、测,以证实脐带血样本病毒特异 IgM 抗体的阳性结果。强烈推荐新生儿与母亲的血清样本平行测试,如果是胎儿的先天性感染,其 IgM 抗体水平(以及 IgG 抗体水平)会持续存在或上升趋势,反之,如果抗体来源于母体,则在平行试验中婴儿的抗体水平会逐渐下降或消失。B14.7.5. 由于孕妇的实验室检查不能可靠地鉴定胎儿患病的风险,故不建议采用本试剂对无症状的母体感染进行筛查,不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。7B14.7.6. 免疫功能受损或接受免疫治疗的患者,如人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患者或器官移植后接受免疫抑制治疗的患者,其血清学 IgM 抗体检测的参考价值有限,可能会导致错误
11、的医学解释。B14.7.7. 在近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群,对其阳性检测结果的分析应慎重。HQBJS/MYXM-14-2014 SOP 文件B14.7.8. 病毒特异性 IgM 抗体不仅出现于初次感染,当二次感染和复发感染时也可能出现。B14.7.9. 当疾病的流行程度降低时阳性预测值降低,对低危人群阳性结果的解释应当慎重。B14.8【预期用途】体外定性检测人血清(或血浆)中的甲型肝炎病毒和或戊型肝炎病毒 IgM 抗体,用于临床辅助诊断。甲型病毒肝炎简称甲型肝炎(hepatitisA),是由小核糖核酸病毒科(picornaviridae)嗜肝病毒属(hepatovirus)的
12、甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)感染所致的急性传染病,经粪-口途径传播,多见于儿童和青少年,病程呈自限性,常无慢性感染。甲肝有 7 个基因型,但 HAV 只有一个血清型,因此仅有 1 个抗原抗体系统,感染后可产生 IgM 型和 IgG 型抗体。IgM 抗体出现早,一般可持续 812 周,少数病例可延续 6个月。IgG 抗体可持续数年,是主要的保护性抗体。甲型病毒8肝炎感染方式主要有:(1)日常生活接触,(2)水源传播,(3)食物传播,此外,苍蝇和蟑螂也是传播本病的重要媒介。戊型肝炎(戊肝,HE)是一种由戊型肝炎病毒(HEV)引起的急性传染性肝炎,主要经污染的水源传播,
13、也可通过食物和日常生活接触,既往称肠道传播的非甲非乙型肝炎,常引起爆发或流行,但也可散发。病死率约 0.51.5,稍高于甲肝,但孕妇戊肝的病死率可高达 20。我国是戊肝的高流行区之一,HQBJS/MYXM-14-2014 SOP 文件约占临床散发性肝炎病例的 1020。HEV 有 4 个基因型,基因 1 型是亚洲和非洲的发展中国家的流行株;基因 2 型分布在墨西哥和部分非洲国家;基因 3 型在全球广泛分布,并从除非洲之外的许多国家的散发急性肝炎患者体内检出;基因 4 型仅在亚洲国家的人体内检出。我国的 HEV 主要是基因 1 型,部分为基因 4 型。目前发现 HEV 只有一个血清型。B14.9【参考文献】体外诊断试剂说明书编写指导原则中国生物制品规程