G试验与GM试验

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1、G试验与GM试验,微生物室 范会,侵袭性真菌病(invasive fungal disease, IFD),概念：又称侵袭性真菌感染，是指真菌侵入人体组织、血液，并在其中生长繁殖导致组织损害、器官功能障碍和炎症反应的病理改变及病理生理过程。,侵袭性真菌感染因素增加,真菌感染的诊断,诊断标准由危险因素、临床特征、微生物学检查和组织病理学检查4部分组成。 根据真菌感染的可能性将诊断结果分为三个级别: 确诊、拟诊和疑似。,真菌感染的诊断,临床特征-特异性？ 影像学-特异性？ 真菌涂片、培养-特异性？敏感性？时间 病理-特异性！敏感性？ 早期、快速、特异、敏感、采样方便 G试验与GM试验,G试验,G试

2、验,（1-3）-D葡聚糖 占真菌细胞壁成分50%以上 与鲎试剂中的G因子发生级联凝固反应,G试验检测范围,检测底物：（1-3）-D葡聚糖 诊断：侵袭性真菌感染（IFD） 检测频率：每周一至周五 真菌细胞壁成分：念珠菌、曲霉、镰刀霉、毛孢子菌、卡氏肺孢子菌、支顶孢、组织胞浆菌等 不能检测：结合菌（毛霉、根霉）、隐球菌,G试验原理-反应特异性,G试验-国产检测方法,国产：MB-80（金山川） . 动态浊度法 . cut-off：阴性10ug/ml，中介10-20ug/ml，阳性20ug/ml，儿童阳性50ug/ml 国产：湛江安度斯生物有限公司 . 动态比色法 . cut-off：阴性100.5p

3、g/ml，中介100.5-151.5pg/ml，阳性151.5pg/ml 标本：血浆,G试验-试剂盒,鲎试剂来源：东方鲎、美洲鲎 检测方法：动态比浊法、动态比色法 试剂反应性不同，检测结果不同，cut-off值不同,30名AML、MDS念珠菌血症患者 连续2次G试验阳性，可提高特异性、PPV（阳性预测值） 确诊或拟诊IFD，平均比临床症状出现早10d,G试验-影响因素,假阳性： . 抗肿瘤准备：蘑菇多糖、裂褶菌多糖 . 免疫准备：白蛋白、球蛋白 . 血透使用纤维素膜 . 手术中使用棉纱垫、棉拭子等 . 脂肪乳等 假阴性： . 棘白菌素类：抑制BDG合成,G试验-小结,无热源采血管、清洁的检测环

4、境 高NPV，连续2次G试验阳性，可提高特异性和PPV IFD早期诊断 . 比出现临床症状体征早约10天 . 比HRCT改变早约9天 敏感性与感染程度（真菌负荷量）相关 念珠菌定植不引起G试验升高 动态反应感染程度和抗真菌治疗疗效 儿童BDG水平高于成人,GM试验,GM试验,诊断：侵袭性曲霉菌感染（IA） 检测底物：半乳甘露聚糖 . 曲霉细胞壁成分 . 菌丝在组织中生长时释放 . 热稳定 . 可溶性：serum、BALF、CSF 检测频率：一周两次,GM试验-方法及原理,伯乐试剂 . 原理：双抗体夹心法，采用小鼠单克隆抗体EBA-2，检测人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。 天津贻诺琦 .,GM试验

5、-临床价值,曲霉菌定植时很少释放入血，因此有利于鉴别侵袭与定植 GM释放量与菌量成正比，可反映感染程度 连续检测GM试验可作为治疗疗效的监测 在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高 非特异交叉反应：青霉较多、隐球菌,GM试验-27项研究荟萃分析,推荐用于恶性血液肿瘤和HSCT(造血干细胞移植)受体 不推荐用于SOT（实体器官移植）受体,GM试验-假阳性,抗菌药物：哌拉西林-他唑巴坦 . 采样：用药前，或药物浓度最低时 高剂量使用激素 透析：不能清除大份子GM 化疗的严重黏膜炎的患者 . 谷类食物中的GM抗原通过肠道入血 儿童和新生儿：假阳性占83% . 母乳或配方食品中双歧杆菌与GM有交叉反应

6、交叉反应真菌：青霉、拟青霉、隐球菌、头状地霉、组织胞浆菌等,GM试验-假阴性,抗真菌药物 . 三唑类-降低GM水平 . 米卡芬净-升高GM水平（能够破坏真菌细胞壁，但不能清除） 低侵袭性曲霉菌病 低曲霉负荷量,GM试验-小结,早期、快速、高特异性 GM水平反映曲霉负荷量 推荐用于恶性血液肿瘤、HSCT患者 IPA可考虑BALF标本，并适当提高折点 曲霉脑病可考虑CSF标本 动态变化指导抗真菌药物使用 结合患者临床情况进行分析,G+GM-缩小病原谱,病例一,男性，55岁，因“反复喘息发作31年，复发伴发热1月”入院 既往史：支气管哮喘，过敏性鼻炎，糖尿病 查体：37.6，双肺散在哮鸣音，未及湿罗

7、音 实验室检查： -血常规：WBC 10.6109/L,N 51.5%,E 15.2% -ESR 78mm/h,CRP 94.9mg/L -PPD皮试（-） -血ANA（-） -血清GM测定：阳性（3.1930.5） -痰真菌涂片及培养（-），细菌培养（-），抗酸（-） -肺功能：重度阻塞性通气功能障碍，低氧血症，支气管扩张试验（-）,诊断：过敏性支气管肺曲霉病（ABPA） 治疗及转归：抗炎、解痉、化痰、平喘，伊曲康唑+甲强龙静脉滴注；治疗后第三天出黑黄色痰栓，此后痰量渐少，气急好转，疗程两周后改伊曲康唑口服，激素递减。病情稳定后出院 治疗后化验 -血常规：WBC 6.0109/L,N 86.

8、5%,E 0% -ESR 7mm/h,CRP 2.7mg/L,病例二,肝炎，右肺实变，右胸腔积液 支气管镜做细菌、TB、真菌，血培养结果均阴性 8月20日 . 痰涂片：在中性粒细胞内可见革兰阳性球菌少量 . 痰培养：光滑念珠菌 . 治疗：特治星+万古霉素 . PCT 7.9ng/ml,PCT(ng/ml)变化情况,WBC内可见革兰阳性球菌+光滑念珠菌 不能脱机,8月26日 体温：38，不能脱呼吸机 WBC：15.0109/L 8月27日：会诊 COPD? 非典病原体？ PCP？ 真菌？ 抗菌药物？检查：G试验,PCT(ng/ml)变化情况,WBC内可见革兰阳性球菌+光滑念珠菌 不能脱机,G试验（pg/ml）变化情况,体温的变化情况,WBC（109/L）的变化情况,G+GM,G试验与GM试验，为临床增加了侵袭性真菌感染的诊断手段，但不能完全依赖 结合患者临床情况综合分析 注意分析假阳性、假阴性影响因素 注重动态监测，一次检测并不绝对 涂片、培养、药敏仍是最基本的真菌学监测手段，实验室和临床均不可忽视,