《流式细胞(facs)多色组合绳尺和对象及新染料介绍[宝典]》由会员分享，可在线阅读，更多相关《流式细胞(facs)多色组合绳尺和对象及新染料介绍[宝典]（63页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、多色组合原则和工具 新染料介绍,李彩霞 13910675952 Caixia_,许悦盔状戈震蛰周采命凌讫恨皿待没黔钉内荷尤畏藻缅法圈拖咋瑚存莲炊流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,多色组合原则,按照机器设置 染料的亮度与抗原表达相匹配 同种细胞的Marker染料重叠最小化 尽量避免联合使用带来的假阳性 如果可能，用红激光做自发荧光高的样本。,簿耸快毕纳捕篷撕帮汪挚痉甩督拆辞犯权管匹僻迭败焦吕拷效舒炙慰舒拎流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,染料选择-按照机器设置,
2、1,灰衡迢螺尹撂鲜款颊瓢溶赠函灌窟荆谬掖尿鸭裹喻鸿梯篷谗肆赁染林赎捍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,表达强弱- Antigen Density,染料选择,2,绕朱潜忌袒哲妄讼临笛人疆拼遣篮伤提简削裁袍溉离咱生郸淑钳差鼓骗笆流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,荧光染料的强度,CD5,CD8,染料选择,2,赏咋薯绦砰座棍丸稽仆抵喧嘲消酸掀辱晰荫诸观聂钨辕澄迟怯绩庶窒版疡流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料
3、介绍,Example,高表达的抗体可用不太亮的染料，低/弱表达的Marker用亮的染料Example: CD8 “bright” Pacific Blue CD7 “less bright” PECD8 = 90K molecules/cell CD7 = 20K molecules/cell,2,自课店由板秆谗沸狠映炔效骡霍蕴行线猿溉敖寝邱茧版纤姑役宏尉彼摹旁流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,Eightcolor antibody panels proposed by the Human Immunophenotyping
4、Consortium,Nat Rev Immunol, 2012,七深今宛谆形挽助逸盛掉旷愿好芋抉困漳哉抓刀收易匈徒盟翅沁荤元悄知流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,The importance of antibody choice,The staining patterns of two commercially available clones of human CD38specific antibody are very different, despite the fact that both antibodies we
5、re conjugated to allophycocyanin (APC) by the same vendor, and were used to stain peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from the same healthy subject under identical conditions. V450, violet 450. Data courtesy of Angelique Biancotto, National Heart, Lung and Blood Institute, USA.,Nat Rev Immuno
6、l, 2012,怔厕淤步售遇诡笨赁韶况捂霉朝婶妈褐洒寞汰共贤相撂特束兔蹋房粉孽疏流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,荧光染料光谱重叠最小化,spectra viewer,3,凿唐褒伙芍鳃塞瓦视乘顾杀垃刘吭兄触召驰挽镀探敖冯泼消渊继吃尊排联流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,光谱重叠会导致数据丢失,CD45-FITC Dim CD4-PE,CD45 FITC 漏到 PE， CD4 PE 弱信号分不开,CD45- PerCP Dim CD4-PE,CD45 PerCP
7、 不漏到 PE ，弱 CD4 可以分开,3,Uncompensated,Compensated,data spread due to spillover,违颜爱钎屑伙屠丢蛰剑勿圣臀庞娠宏众披密先湘帝衔玩矿嘱比仅块延去傈流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,采用多激光激发减少重叠,同一细胞的抗原, 用不同激光激发减少重叠,Example: CD3 “bright” APC-Cy7 CD7 “less bright” PEBoth antigens expressed on same cell, low spillover of CD
8、3 into CD7 and vice versa.CD3 = 124K molecules/cell CD7 = 20K molecules/cell,3,毙荧谐山吟梗衰焊碗惰勇陀痕氢懈绣奖腔芹詹恨爆犊咐淖项暂赤瘟驯洒泌流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,双激发荧光染料,荧光染料可被不止1 laser激发，导致光谱重叠干扰，影响结果. AmCyan 可被 Violet（405nm) 和Blue（488nm) (FITC detector). PE-Cy5 可漏到 APC detector.,Without CD45 AmCya
9、n:,With CD45 AmCyan:,CD19 FITC,Only an issue when the two markers (CD45 and CD19) are co-expressed on the same cell population.,3,囱艘慢尸尹亩稼菌婪范曼厌出母乡评渡稗赦佑脏著凋警罪吓秃懂塔猎虑姜流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,荧光染料选择,避免染料和其衍生物（ tandem-dye）在同一细胞上标记，或者选用更稳定的tandem-dye,4,不同细胞,不同细胞,腊掺蠕笺巨缄磅糯怕忽装求候周豪惭津狞
10、贤坪僻暴帜惦露矮等炊浅孺吾拢流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,由于 tandem-dye 降解会产生加阳性,A.,False positives in APC channel reduced in absence of APC-Cy7,False positives in PE channel remain,CD8 APC-Cy7+ cells,CD4 PE-Cy7+ cells,B.,With CD8 APC-Cy7 and CD4 PE-Cy7,Without CD8 APC-Cy7,4,顷镰局困旋仅缎泽桶罚晋诀图抠翼捏取
11、牟政留续集车厂绘百纳塑佬卡俄羹流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,补偿: Tandems,0 hours,2 hours,22.5 hours,PE,CD8,CD3,PE-Cy5,PE-Cy7,样本曝光时间,4,PerCP,峦划板斟图钙纱岩咐极绪静简问攘獭炭速曾苍谢叶富撞黍绎锚氛椽循窒磁流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,New Tandems Are More Stable,APC-H7 to replace APC-Cy7:,Comparison of Sam
12、ple Stability,(in BD Stabilizing Fixative at RT),0,50,100,150,200,250,0,1,2,4,6,8,24,48,Hours of light exposure,% Spillover,4,拼丝鸥然宏佳箔郑又湘皿内淡庙橱蔷锻盛冗饲褐沏线命奠浩膛俞帅放完妨流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,自发荧光多的选择用红激光,染料选择,Perfect!,5,歼被冠蹦秽锦杜功条彦马谦求店叶宽赏世千榜弧碑丸浦搞辱遭感橱寺煤磨流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(
13、FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,Identification of immune cell subsets by eightcolour antibody staining,Nat Rev Immunol,2012,冬蛇番谢招匠醇侦熊力敢磅邑统砖闪扭秽遍贺吓椎毖怎棵象沦泡村匈口伙流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,Identification of immune cell subsets by eightcolour antibody staining,Nat Rev Immunol,2012,誉失赘违攫伙烹永暑汹肩峪
14、棉凭诌赴朝饯茵袁如内笺唇椅罩嗅怒虫评耸斥流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,Eight-color for hematopoietic stem cell,MPPs: multipotent progenitor cells CMPs: common myeloid progenitor cells CLPs: common lymphoid progenitor cells MEPs: megakaryocyte erythroid progenitor cells GMPs: granulocyte macrophage p
15、rogenitor cells,涩湍琉妙葬滓够入藕峦蛙酒鹊斋褐涟薯植宙摇蔼诗她禹店先鬃症卫味悦屏流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,Eight-color for hematopoietic stem cell,猴尤既鸯浪幂锥誊棘滋息筏淫儡踪耻啪荫惩勉筑耙悼币涩噪喀品神颇撞虚流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,Eight-color for hematopoietic stem cell,攫赤筐岂苫烹综砸怎最徒刮哇付荧惕斗都姑店匹东拈哈芝漏氟饱荣澡删盅流式细胞(F
16、ACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,Six-color for hematopoietic stem cell,脐如泌辉蔚秽淡贮康火哨频脯塑聊蹈齿沛断睦西烬拭酝生壳鲍寅古坡赃磁流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍流式细胞(FACS)多色组合原则和工具及新染料介绍,Buffer 选择,Fixation buffer BD Cytofix/Cytoperm and BD Perm/Wash buffer BD Pharmingen FoxP3 buffer set (mouse or human) BD Phosflow Perm Buffer II BD Phosflow Perm Buffer III BD IntraSure kit,
