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1、第十二章 弯曲菌与螺杆菌,弯曲菌属与螺杆菌属,弯曲菌属与螺杆菌属是分类学上两个独立的菌属 大小及形态相似，显微镜下为革兰染色阴性菌，呈弧形或螺旋形菌，较难区别 为了便于鉴别诊断，将这两类细菌放在同一章介绍,第一节 弯曲菌属,弯曲菌属（Campylobacter）是一类呈逗点状或S形的革兰阴性菌，广泛分布于动物界 其中有些可引起动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病 对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等，其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病原菌,一、分类,弯曲菌原归属于弧菌属，1973年正式命名为弯曲菌属 Campylobacter源自希腊语意为弯曲的杆状 1984年在伯杰手册中将其分为5
2、个种(亚种)。近年来发现了弯曲菌的许多新种和亚种。,二、临床意义,空肠/大肠弯曲菌广泛分布于温血动物。未经处理的水以及生牛乳是人类感染的主要来源。弯曲菌的传播途径主要以食物和水的传播为多见，经口摄入是本菌最主要的传播方式 腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现 感染后可引发吉兰-巴雷综合症和反应性关节炎 胎儿弯曲菌主要引起肠外感染 其中胎儿亚种为主要的人类致病菌 可致人类菌血症、心内膜炎、血栓性静脉炎、活动性关节炎、脑膜炎、肺部感染、胸膜炎、腹膜炎、胆囊炎等,三、生物学特性,革兰阴性，菌体弯曲呈逗点、弧形、S形、螺旋形或典型的海鸥展翅（gull wing）形。陈旧培养物可呈球形或长丝状。无芽胞。
3、弯曲菌的运动非常活泼，呈投镖样或螺旋样前进,弯曲菌Gram Stain,三、生物学特性,本属细菌的抗原成分有菌体(O)抗原、热不稳定抗原(HL系统)和鞭毛(H)抗原。 根据O抗原不同，将空肠弯曲菌和大肠弯曲菌分为65个血清型。 根据HL系统抗原，将空肠弯曲菌、大肠弯曲菌和海鸥弯曲菌至少分160个血清型,三、生物学特性,弯曲菌为微需氧菌，空肠弯曲菌和其他大多数弯曲菌生长时需氧浓度为5%10%（V/V）。最佳气体环境为含5%氧气、10%二氧化碳及85%氮气 细菌抵抗力不强，室温可迅速死亡。对热敏感，标本在4冰箱可保存3周。,四、微生物检验,(一)检验程序,（二）微生物检验,标本采集 采取新鲜粪便与
4、肛拭子、血液、脑脊液等立即送检。如不能及时送检应种入Cary-Blair运送培养基，放4冰箱保存。血液、脑脊液标本应先进行增菌。,（三）标本直接检查,直接显微镜检查 粪便与肛拭子可直接镜检，查找革兰阴性呈弧形、S形、“海鸥形”或螺旋形的小杆菌；或用暗视野或相差显微镜观察，查见该菌呈投镖式或螺旋式运动可初步诊断 核酸检测 PCR方法直接检测粪便标本中的弯曲菌，但目前尚未被广泛采用,（四）分离培养与鉴定,1. 分离培养 粪便或肛拭标本直接接种改良Campy-BAP选择平板 血、脑脊液标本先接种于布氏肉汤增菌后转种分离培养基 微氧环境培养 空肠/大肠弯曲菌最适生长温度4243，24h可观察菌落，如于
5、37培养则需4872h 胎儿弯曲菌于25和37均可生长 临床标本需分别置37和42中培养，方不致漏检。在同一培养基上出现灰白、湿润、扁平边缘不整的蔓延生长菌落及半透明、圆形、凸起、有光泽的小菌落等两种菌落,2鉴定,鉴定要点：弯曲菌属鉴定要点：氧化酶阳性，革兰阴性，菌体弯曲或呈S形，生长温度 (25、37、42)试验； 奈啶酸、头孢噻吩敏感试验 空肠弯曲菌对奈啶酸敏感、对头孢噻吩耐药； 胎儿弯曲菌对奈啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。 但近年出现对奈啶酸耐药的空肠弯曲菌 马尿酸盐水解试验 凡马尿酸盐水解试验阳性、42生长、氧化酶阳性、与镜检形态相符者，即可报告空肠弯曲菌空肠亚种醋酸吲哚水解试验 空肠弯曲
6、菌阳性，胎儿弯曲菌阴性,（五）其他方法测定,免疫学方法 用特异性抗体包被的乳胶颗粒，可用于鉴定空肠/大肠弯曲菌。也可采用酶免疫方法测定粪便中弯曲菌抗原进行诊断。血清中抗体测定用于流行病学调查 DNA探针和PCR扩增 DNA-DNA杂交在弯曲菌菌种的分类研究中是一种成功的参考方法。 PCR扩增技术也正在发展中,第二节 螺杆菌属,螺杆菌属（Helicobacter）：细菌有20余种，有9个种可从人体分离到能引起人类疾病菌种 幽门螺杆菌(H. pylori)、 H. fennelliae和H. cinaedi。 幽门螺杆菌与萎缩性胃炎，胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾病相关 其他螺杆菌也可感染胃粘膜，但少
7、见。,诺贝尔生理学和医学奖,1983年Marshall和Warren首先用微需氧技术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，获得了2005年诺贝尔生理学和医学奖,一、分类,最初因形态、分离培养方法与弯曲菌属细菌相似，又仅从胃标本中分离到，被称作胃弯曲菌样细菌 由于此菌在胃窦部多见，且形态、培养及某些生化特性与弯曲菌属相似，DNA G+Gmol%也在弯曲菌属范围内，故命名为幽门弯曲菌(campylobacter pylori) 1989年Goodwin等根据该菌的超微结构、形态、菌体脂肪酸组成、生长特征和酶的活力、16S rRN
8、A 序列等，提出该菌不应归于弯曲菌属，后称为幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, HP),Helicobacter Gram Stain,二、临床意义,HP感染非常普遍。该菌为一种高度适应或只能生活于胃粘膜的细菌，菌体周围微环境的pH值为7.0。胃窦为其定植的最佳部位HP感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎之间的病因关系已充分确立。流行病学资料表明胃癌发病率在一些HP感染率高的人群中较高,HP致病机理,尚不清楚，可能与下列因素有关： 特殊的螺旋状和端鞭毛有助于HP穿过胃粘膜表面粘液层与胃粘膜上皮细胞接触； 具有高活性胞外脲酶分解尿素，产生氨中和菌体周围胃酸，有助于细菌定植； 细胞毒
9、素相关蛋白（CagA）和空胞毒素（VacA） VacA在体外能诱导多种哺乳动物细胞胞发生空胞变性，体内导致小鼠胃粘膜上皮细胞损伤和溃疡形成。 CagA与致病岛的picB紧密相连，协同诱导胃粘膜上皮细胞产生多种细胞因子，吸引炎症细胞释放多种酶类致胃组织损伤。 cag A基因与胃癌发生密切相关。,三、生物学特性,菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形。 菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。 菌体长2.54.0m，宽0.51.0m。 革兰染色阴性，有动力。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。 固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出现杆状或圆球状。 电镜下菌体的一端可伸出26条带鞘鞭毛。
10、鞭毛长为菌体11.5倍，粗约30nm。鞭毛在运动中起推进器作用，在定居过程中起锚住作用。,三、生物学特性,HP基因组约1.67106bp，DNA G+C百分含量为37mol%，其全部序列已有报道研究较多和较重要的基因有脲酶基因ure A、ure B、ure C，细胞毒素相关基因cag A，空泡毒素基因vac AHP菌株间具有共同抗原,三、生物学特性,为微需氧菌，在5%O2、10%CO2、85%N2的环境中生长良好。最适生长温度为37。相对湿度在98%以上为宜营养要求较高，一般需含血液或血清才能生长，常用的培养基有哥伦比亚血琼脂、心脑浸液血琼脂、布氏菌血培养基等,三、生物学特性,HP生长缓慢，需
11、经4872h才长出菌落 圆形孤立的小菌落，无色半透明呈露滴状，直径约0.51mm，血平板上有轻度溶血。 沿接种线扩散生长，融合成片，扁平，无色半透明 HP生化反应不活跃，不能利用糖类； 具有大量高活力的胞外脲酶，产生的脲酶相当于普通变形杆菌的2070倍。 此外还产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、-谷氨酰转肽酶和DNA酶等 pH降至3.5以下时活力明显减弱 生理浓度的胆盐可抑制HP生长,四、微生物检验,（一）检验程序,（二）微生物检验,标本采集 经胃镜用活检钳于近幽门部、胃窦部或病变邻近处取材，最好采取多位点样品 应立即行床边接种或放入20%葡萄糖运送液0.5ml内，4中保存不超过5h 受检者术前应
12、停服铋剂或抗菌药物一周,（三）标本直接检查,1. 直接显微镜检查 涂片或悬滴观察 将活检组织研碎，涂片或悬滴，置相差或暗视野显微镜下可见HP形态典型、运动活泼 直接涂片染色镜检 将活检粘膜组织在玻片上涂抹后，经革兰染色或单染色后镜检，如发现典型形态的HP即可诊断 组织切片染色镜检 组织块经福马林固定、切片经W-S银染色、姬姆萨染色、HE染色和荧光染色等染色后镜检HP，以W-S银染效果最好 免疫组化 用免疫组化法可检出胃粘膜组织切片中的完整HP及破碎的菌体或抗原成分 间接免疫荧光法（IIF）,2快速脲酶试验,Christensen尿素培养基 将小块的活检组织块放入装有培养基的瓶内，如培养基由黄变
13、为红色为阳性。提示由该菌产生的高活性的脲酶已将尿素分解，结果常在几分钟至24小时内得到,3核酸检测,现有的方法是从克隆的HP染色体DNA的特异性片段中构建引物 从HP脲酶A基因序列中构建引物 用PCR扩增结合限制性内切酶多态性分析技术鉴别HP 可检测出不能分离培养的HP,4粪便标本抗原检测,可采用ELISA方法直接测定粪便标本中的抗原。适用于不能进行13C或14C标记尿素呼吸试验或胃镜检查的患者,（四）分离培养与鉴定,分离培养 宜用新鲜配制的选择培养基。将标本的粘膜面在平板上反复涂擦，或将标本研碎后用研磨棒蘸取适量匀浆接种 将接种后的平板放入微需氧和98%以上湿度的环境培养 鉴定 主要根据菌落
14、特征、形态和染色性；37生长；氧化酶和触酶均阳性、脲酶强阳性；对萘啶酸耐药、头孢噻吩敏感；在1%甘油和1%胆盐中均不生长。,（五）抗体检测,用血清学方法检测患者体内的抗HP抗体（IgG、IgM和IgA）系最常用的无创伤性诊断HP感染的方法 目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及ELISA等，而以ELISA应用最为广泛，现有商品化的ELISA、胶乳凝集试验试剂盒 用于检测患者血清中HP的菌体抗体或脲酶抗体,（六）13C或14C标记尿素呼吸试验,基本方法是患者禁食一夜，进食用13C或14C标记的尿素，HP产生的脲酶分解尿素释放带有同位素的CO2，因此可测定患者呼气中释放带有同位素的CO2量，如CO2含量超过标准，提示有HP存在。 该方法敏感性与特异性均很好，只是需要特殊的同位素测定仪。,小 结,微氧环境， 营养要求较高。 弯曲菌：动物与人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。对人致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等。 幽门螺杆菌：引起胃炎的病原体，可以产生大量脲酶。通过快速测定脲酶的活性或代谢产物可以临床诊断,
