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1、生物样本的收集保存方法及测序建库的基本流程,刘艳奎 GCBI生物技术中心 上海其明信息技术有限公司,生物样本的收集保存方法,Page 2,生物样本类型,细胞,组织,血液,Page 3,其他,细胞收集保存方法,Page 4,提取RNA:贴壁细胞：细胞培养好后，去除培养液，用PBS快速的洗 一遍,将PBS弃干净,直接加入TRIZOL，并吹打裂解细胞，待细胞裂解完全后,即可收集样本，-80储存。（不必胰酶消化） 悬浮细胞：细胞培养好后,3000RPM离心5MIN,去除培养液, 用PBS快速的洗一遍,将PBS弃干净,直接加入TRIZOL，并吹打裂解细胞，待细胞裂解完全后, -80储存。TRIZOL用量
2、：106 的细胞需要1ML TRIZOL。,提取DNA：收集细胞后，离心去除培养液，PBS快速洗2次，弃掉PBS，保存于-80C冰箱。,组织样本的收集方法,Page 5,提取RNA: 样本离体后,用生理盐水迅速洗一遍,装管后迅速投入液氮速冻30分钟,转移至-80度保存。,RNALATER作用：如样本无法立即液氮，分离组织（薄膜状的组织等）,注：植物样本处理方法均可参照组织样本。,组织样本的用量：以脂肪组织为例，一般黄豆大小的样本即可提出5-10UG的TOTAL RNA。,提取DNA:样本离体后,用生理盐水迅速洗一遍,装管后迅速投入液氮速冻30分钟,转移至-80度保存。,注意事项：,1、要用冻存
3、管保存组织样本（不可用EP管），并且管盖不宜拧的过紧，以防止从液氮取出时管子炸裂，样本损失。 2、用油性记号笔直接在样本管上标记样本名称，如果用标签纸或胶带粘贴，在长期的低温状态下很容易脱落，照成样本信息丢失。,血液样本的收集保存方法,Page 6,提取DNA: 血液抗凝收集后，-80度保存,提取RNA: 1、采用PAXgene blood RNA tube 收集,注意收集血液后混合均匀需室温至少放置2小时，详细操作参照PAXgene说明书。 2、全血加TRIZOL LS裂解液保存，详细操作参照TRIZOL LS说明书。,如需血液中的特定细胞：需新鲜血液抗凝分离细胞，按照细胞样本处理保存。,注
4、：抗凝剂不可以使用肝素,其他样本类型收集保存方法,石蜡样本：石蜡块或石蜡切片常温保存,血清、血浆、尿液等液体样本 提取DNA:样本收集后，-80保存。 提取RNA:样本收集后，加入3倍体积的TRIZOL，迅速摇匀后，-80保存。,外泌体： 提取DNA:样本收集后，-80保存。 提取RNA:样本收集后，加入TRIZOL，放置5分钟后，-80保存。,Page 7,测序建库的基本流程,Page 2,生物样本类型,DNA建库,RNA建库,Page 3,DNA建库,Page 5,RNA建库,Page 5,预告,第六讲 全基因组测序结果解读_SNP,4月28日 星期四 20：00,Page 13,联系我们,微信,QQ,服务热线 400 600 4643,
