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基因组DNA的提取,原 理,细胞裂解液裂解组织匀浆,蛋白酶去除DNA结合蛋白,RNase去除RNA,饱和酚、酚/氯仿纯化DNA,无水乙醇沉淀获得DNA,DNA溶解于TE溶液,70%乙醇洗涤DNA、干燥,琼脂糖凝胶电泳鉴定,实验步骤,1、小鼠颈椎脱臼处死,取绿豆大肝组织,放入匀浆器,加入10倍体积TE于冰浴中匀浆后,分装至1.5ml EP管中(400l/支)。 2、加入10% SDS至终浓度为0.5%(20 l)。 3、加入RNase A (10mg/ml)至终浓度为20 g/ml(1 l)混匀,置37水浴60min。,4、加入蛋白酶K(20mg/ml)至终浓度为100g/ml (2 l)混匀,55 水浴2小时。 5、冷却至室温,加等体积饱和酚(450 l)充分颠倒混匀,12000rpm离心5min。 6、吸取上层水相移至另一干净EP管中,加入等体积酚/氯仿,颠倒混匀,12000rpm离心5min。,7、吸取上清移至另一干净EP管中,加入0.2倍体积5M KAc和2倍体积冷无水乙醇混匀,静置5分钟,12000rpm离心5min。 8、弃上清,用0.5ml 70% 乙醇洗涤DNA,弃上清,倒置干燥。 9、 加入10 l TE溶解DNA。 10、加入2 l 6loading buffer,充分混匀,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。,