《抗生素检验知识培训资料-供参考》由会员分享，可在线阅读，更多相关《抗生素检验知识培训资料-供参考（67页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、抗生素检验知识培训资料,提纲,一、抗生素定义及分类 二、微生物试验相关知识 三、抗生素微生物检定法,第一部分：抗生素定义与分类,抗生素：抗生素（antibiotics）是某些细菌、放线菌和真菌等微生物的次级代谢产物，在低微浓度下对各种病原性微生物具有杀灭或抑制作用的物质。主要是指通过传统发酵工艺直接获得的抗生素和部分或完全由人工合成的与天然抗生素具有同种作用的物质。 初级代谢：微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢，生成维持生命活动所必需的物质和能量的过程，称为初级代谢。次级代谢：某些生物为了避免在初级代谢过程某种中间产物积累所造成的不利作用而产生的一类有利于生存的代谢类型。,第
2、一部分：抗生素定义与分类,随着抗生素研究工作的发展，发现抗生素的来源更加广泛，其作用也更加广泛，其来源包括微生物产生的物质、高等动植物产生的代谢物和用化学方法合成或半合成的化合物；其性能包括抗细菌的物质、抗病毒的物质、抗寄生虫的物质和抗原虫的物质等，甚至抗肿瘤的药物都属于抗生素的范畴。,第一部分：抗生素定义与分类,抗微生物药： 一、 -内酰胺类：（一）青霉素类包括青霉素钠、青霉素钾、氨苄西林、氨苄西林钠、海他西林、阿莫西林、阿莫西林钠、苯唑西林钠、氯唑西林钠、苄星氯唑西林、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素等。（二）头孢菌素类包括 头孢噻呋、盐酸头孢噻呋、头孢噻呋钠、头孢氨苄、头孢维星钠、硫酸头孢喹肟
3、等。,抗生素分类,第一部分：抗生素定义与分类,二、氨基糖苷类：包括：硫酸链霉素、硫酸双氢链霉素、硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸新霉素、盐酸大观霉素、硫酸大观霉素、硫酸庆大小诺霉素、硫酸安普霉素等。,三、四环素类：包括土霉素、盐酸土霉素、四环素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素等。,第一部分：抗生素定义与分类,四、大环内酯类：包括红霉素、乳糖酸红霉素、硫氰酸红霉素、吉他霉素、酒石酸吉他霉素、泰乐菌素、酒石酸泰乐菌素、磷酸泰乐菌素、酒石酸泰万菌素、替米考星、泰拉霉素等。,第一部分：抗生素定义与分类,五、酰胺醇类包括 甲砜霉素、氟苯尼考等。,第一部分：抗生素定义与分类,六、林可胺类主要有盐酸林
4、可霉素、盐酸吡利霉素等。,第一部分：抗生素定义与分类,七、多肽类包括硫酸黏菌素、杆菌肽锌、亚甲基水杨酸杆菌肽、恩拉霉素、维吉尼霉素、那西肽等。,第一部分：抗生素定义与分类,八、多糖类包括阿维拉霉素、黄霉素等。,第一部分：抗生素定义与分类,九、其他：包括延胡索酸泰妙菌素、泰妙菌素、盐酸沃尼妙林、赛地卡霉素等。,第一部分：抗生素定义与分类,抗寄生虫药： 一、抗蠕虫药（抗线虫药） 包括 伊维菌素、阿维菌素、乙酰氨基阿维菌素、多拉菌素、越霉素A、潮霉素B等。 二、抗原虫药（抗球虫药）包括 莫能菌素、莫能菌素钠、盐霉素钠、拉沙洛西钠、甲基盐霉素、马杜米星铵、海南霉素钠、赛杜霉素钠等。,第一部分：抗生素定
5、义与分类,第二部分：微生物试验相关知识,一、名称解释 1.消毒（disinfection）：杀死物体上或者环境中病原微生物并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。通常用化学的方法来达到消毒的作用。 2.灭菌（sterilization）：是指把物体上所有的微生物（包括细菌芽孢在内）全部杀死的方法。通常用物理方法来达到灭菌的目的。,3.抑菌（bacteriostasis）：抑制人体内部或外部细菌生长繁殖的。 4.防腐（antisepsis）：是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。 5.无菌（asepsis）：不存在任何活菌。,第二部分：微生物试验相关知识,6.无菌操作：防止细菌进入机体或其他物品
6、的操作技术，称为无菌操作。 7.清洁：能减少微生物附着在无机物体表面的数量的方法。 8.净化：能显著减少或破坏一定空间中微生物数量和生物活性的方法。,第二部分：微生物试验相关知识,二、消毒灭菌抑菌防腐方法：1.物理法2.化学法3.生物学,第二部分：微生物试验相关知识,1.物理法1）热力灭菌法干热灭菌法 湿热灭菌法焚烧 巴氏消毒法烧灼 煮沸法干烤 高压蒸气灭菌法红外线,第二部分：微生物试验相关知识,湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下：湿热情况下菌体蛋白容易凝固;湿热穿透力比干热大；湿热的蒸汽具有潜热。,第二部分：微生物试验相关知识,2）紫外线 原理：利用适当波长的紫外线能够破坏微生物机体细胞中的
7、DNA（脱氧核糖核酸）或RNA（核糖核酸）的分子结构，造成生长性细胞死亡和（或）再生性细胞死亡，达到杀菌消毒的效果。 特点： 穿透力比较差。普通玻璃、纸张、尘埃等均可阻挡紫外线，因此它只适用于空气消毒或物体表面的消毒。 紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。,第二部分：微生物试验相关知识,3）滤过除菌法 4）超声波杀菌法 5）干燥与低温抑菌法,第二部分：微生物试验相关知识,2.化学法 化学消毒剂：迅速杀灭病原微生物的化学药物。如：二氧化氯、戊二醛等。 防腐剂：抑制病原微生物生长繁殖的化学药物。如：苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠等 。 化学治疗剂：用于治疗传染病的化学药物，可选择性地作用于细
8、菌代谢不同环节，杀灭或抑制病原菌，对宿主无毒或很低，如异烟肼、无环鸟苷等。,第二部分：微生物试验相关知识,3.生物学法 1）抗生素 临床治疗 2）细菌素 为微生物代谢产物，破坏同源性细菌。 3）噬菌体 感染细菌、真菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒。 4）中草药,第二部分：微生物试验相关知识,三、影响消毒灭菌效果的因素 1.消毒剂的性质、浓度与作用时间：各种消毒剂的理化性质不同，对微生物的作用大小也差异。例如表面活性剂对革兰氏阳性菌的灭菌效果比对革兰氏阴性菌好，龙胆紫对葡萄球菌的效果特别强。 同一种消毒剂的浓度不同，其消毒效果也不一样。大多数消毒剂在高浓度时起杀菌作用，低浓度时则只有抑菌作用。在
9、一定浓度下，消毒剂对某种细菌的作用时间越长，其效果也越强。若温度升高，则化学物质的活化分子增多，分子运动速度增加使化学反应加速，消毒所需要的时间可以缩短。 2.微生物的污染程度：微生物污染程度越严重，消毒就越困难，因为微生物彼此重叠，加强了机械保护作用。所以在处理污染严重的物品时，必须加大消毒剂浓度，或延长消毒作用的时间。,第二部分：微生物试验相关知识,3.微生物的种类和生活状态：不同的细菌对消毒剂的抵抗力不同，细菌芽胞的抵抗力最强，幼龄菌比老龄菌敏感。 4.环境因素：当细菌和有机物特别是蛋白质混在一起时，某些消毒剂的杀菌效果可受到明显影响。 5.温度、湿度、酸碱度：消毒速度一般随温度的升高而
10、加快，所以温度越高消毒效果越好。湿度对许多气体消毒剂有影响。酸碱度的变化可影响剂杀灭微生物的作用。例如，季胺盐类化合物的戊二醛药物在碱性环境中杀灭微生物效果较好；酚类和次氯酸盐药剂则在酸性条件下杀灭微生物的作用较强。 6.化学拮抗物阴离子表面活性剂：可降低季胺盐类和洗比泰的消毒作用，因此不能将新洁尔灭等消毒剂与肥皂、阴离子洗涤剂合用。,第二部分：微生物试验相关知识,第三部分：抗生素微生物检定法,一、概述：抗生素微生物检定法是利用抗生素在低微浓度下有选择地抑制或杀死微生物的特点，以抗生素的抗菌活性为指标，来衡量抗生素中的有效成分效力的方法。该方法是与临床要求相符，更能确定抗生素的临床医疗价值。,
11、抗生素微生物检定法分为稀释法、浊度法和琼脂扩散法（管碟法），每种方法的试验操作差别较大，但相同之处都是将标准和供试品两者的抗菌效力比较。稀释法：通过观察不同浓度的抗生素抑制试验菌的生长情况，从而测定抗生素最低抑菌浓度。常用于新药研制及临床药敏试验。,第三部分：抗生素微生物检定法,浊度法： 采用分光光度法测定不同浓度的抗生素抑制试验菌的生长情况（混浊程度），从而测定抗生素抑菌效力的方法。该方法国外使用较为普遍，而且快速（3-4小时），中国兽药典（2010年版）收载了该方法，且有18个品种在含量测定中收载了浊度法。如庆大霉素、链霉素、红霉素、大观霉素、安普霉素、泰乐菌素。,第三部分：抗生素微生物检
12、定法,琼脂扩散法(管碟法）：是使用固体培养基，在培养基凝固前，将试验菌混进去，采用一定的方法，将含有抗生素的物质与含菌的培养基表面接触。目前，国际上采用将抗生素加入到特定的小钢管中，使小钢管中的抗生素与培养基表面接触，此方法称为“管碟法”。经过培养后，由于抗生素不断向培养基中扩散，凡抑菌浓度能到达之处，试验菌不能生长，从而形成透明的抑菌范围，此范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。,第三部分：抗生素微生物检定法,二、管碟法材料、仪器及试剂的准备及基本要求1、操作间：要求净化级别达到万级，安装紫外线杀菌灯，安装空调设备，能控制室温在20-25度之间。,第三部分：抗生素微生物检定法,2、双碟为硬质玻璃
13、或塑料培养平皿，内径约90mm，高16-17mm，碟底厚度均匀一致。使用前应清洗干净后置150-160 干热灭菌2小时或者121 高压蒸汽灭菌30分钟。,第三部分：抗生素微生物检定法,3、陶瓦盖 内径约103mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗、干燥。,第三部分：抗生素微生物检定法,4、钢管（牛津杯）每次使用后应置1：1000新洁尔灭溶液内浸泡2个小时以上，进行灭菌后再进行洗涤，在150-160 干热灭菌2小时备用。使用同一批次的钢管。钢管内外壁要求清洁光滑，两端面应平坦光洁，管壁应厚薄一致，重量差异不超过0.05g,第三部分：抗生素微生物检定法,5、钢管放置器：有全自动和半自动之
14、分，一般为四孔，要求钢管下落时应垂直平稳、位置正确。应定期用75%酒精擦拭。如果没有钢管放置器，也可用干热灭菌过的镊子放置钢管。,第三部分：抗生素微生物检定法,6、恒温培养箱：有隔水式、电热式。要求温度控制在35 -37 ，隔板要求水平，用于细菌培养。,第三部分：抗生素微生物检定法,第三部分：抗生素微生物检定法,第三部分：抗生素微生物检定法,7、抑菌圈测定仪： 用于测定细菌所致抑菌圈直径，也可以用游标卡尺进行测量直径。,第三部分：抗生素微生物检定法,第三部分：抗生素微生物检定法,第三部分：抗生素微生物检定法,第三部分：抗生素微生物检定法,8、超净工作台：用于菌种的接种、传代和菌悬液的制备。超净
15、台应放在洁净工作间或半无菌室内。,第三部分：抗生素微生物检定法,第三部分：抗生素微生物检定法,9、磷酸盐缓冲液：根据兽药典附录或者品种项下要求的配方进行配制、分装、灭菌后备用。常用的缓冲液pH值有6.0、7.0、7.8等。缓冲液的pH值对样品液的稳定性、细菌生长速度和抑菌圈边缘清晰等有影响。,第三部分：抗生素微生物检定法,10、培养基：尽量购置质量稳定的干粉培养基（如中国兽药药品监察所、中国药品生物制品监察所等生产的培养基）。常用的培养基有、 、VI号等培养基，用前应按使用说明书进行配制，注意调节培养基pH值。,第三部分：抗生素微生物检定法,11、菌种：菌种应由中国兽医药品监察所和中国药品生物
16、制品检定所等国家法定的菌种保藏中心提供。 常用的菌种包括： 枯草芽孢杆菌CMCC（B）63 501或CVCC717、 短小芽孢杆菌CMCC（B）63 202或CVCC709、 黄色葡萄球菌CMCC（B）26 003或CVCC1882、 藤黄微球菌 CMCC（B）28 001或CVCC1600、 大肠埃希菌 CMCC（B）44 103或CVCC2801、 肺炎克雷伯菌CMCC（B）46 117 等。,第三部分：抗生素微生物检定法,12、标准品标准品是指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或者效价测定的标准物质，一般以效价单位标示，标准品应由国家法定的单位制备、标定和供应，一般常用的标准品来源于中国兽医药品监察所和中国药品生物制品检定所。,第三部分：抗生素微生物检定法,三、管碟法操作步骤1、称量：标准品从冰箱内取出后，应放置至室温后称取。标准品的称取量往往少于100mg，需选用十万分之一的分析天平精密称量，称取量应大于10mg，并且为了减少实验误差，应使用小烧杯或特制的称量壶作为称量容器。,
