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1、中国药典2010年版附录,通用检测方法和指导原则 主要增修订内容,一、主要报告内容,1、附录增修订原则 2、拟增修订项目 3、主要增订项目内容 4、主要修订项目内容 5、评价与展望,二、附录增修订原则,1、新增通用检测方法应是目前药品检验检测急需的、能解决目前存在突出问题的，并能引导药品检验检测水平不断增高，能充分反映现阶段国内和国际药品质量控制先进技术的成熟可靠的方法。 急需、前瞻、先进、成熟 2、指导原则的增订，理由和意义要充分，应对药品质量标准和质量控制有实际指导意义。 3、修订内容应紧密围绕药品标准以及药品监督管理工作，修订必须有充分的理由和科学依据，不轻易修改。,三、拟增修订项目,1
2、、一部共16项，其中新增6项： 电泳测定法 渗透压摩尔浓度测定法 等离子体发射光谱法 大孔树脂有机残留物测定法 聚合酶链式反应法 中药特征图谱指导原则,三、拟增修订项目,2、二部共45项，新增12项： 核磁共振波谱法 离子色谱法 电导率测定法 锥入度检查法 2-乙基己酸测定法 光学显微镜法 拉曼光谱法指导原则 溶出度测定指导原则 药物多晶型研究指导原则 蛋白质含量测定法 合成多肽中醋酸测定法 氨基酸测定指导原则,四、主要增订项目内容,核磁共振波谱法1、未知物的结构测定2、已知物的结构确证功能团分析异构体分析打假工作（肝素钠中的掺伪物在2.16ppm有特征信号）3、含量分析（多组份抗生素,对映异
3、构体分析）,四、主要增订项目内容,离子色谱法1、有机、无机阴阳离子和低分子量亲水性有机分子的分离测定（电导检测器）2、氨基酸不经衍生化直接测定 （脉冲积分安培检测器） 3、某些抗生素的有关物质检查（脉冲积分安培检测器）4、金属的形态与价态分析,四、主要增订项目内容,拉曼光谱法指导原则1、与红外光谱一样，同为分子的振动光谱IR 与偶极矩变化相关Mnm=Raman 与极化率变化相关(aij)nm=2、两者选一 互为补充3、拉曼光谱测定快速、准确，样品制备简单甚至无需制备4、拉曼光谱通常处于可见与近红外区可以有效地用光导纤维将各光学元件联结样品可以包封在对激光光源透明的玻璃、塑料中或将样品溶于水中5
4、、一些特殊的拉曼技术，如共振拉曼和表面增强拉曼光谱可以使谱带强度增加103106倍，使痕量物质的结构研究成为可能。,四、主要增订项目内容,重金属检查与测定法1、重金属检查法（化学法）一法 硫代乙酰胺比色法 适用于溶于水、稀酸或乙醇等的药物甲（Pb标准管） 乙（样品） 加设监控管丙（Pb+样品）要求丙甲乙 合格如丙甲 采第二法二法 炽灼后的硫代乙酰胺比色法 适用于含芳环、芳杂环以及难溶于水、稀酸或有机溶剂的药物。配成溶液后同一法操作。三法 硫化钠比色法 适用于碱溶性药物，同原附录未加监控管。,四、主要增订项目内容,2、原子吸收与光焰光度法 无实质修改 3、等离子体质谱 修订附录完善了原附录 增加
5、了干扰与校正，样品溶液的制备以及测定方法中增加了标准加入法等段落。本法是重金属测定中最灵敏的一个方法（10-1210-15） 4、等离子体发射光谱 新增附录本法灵敏（10-910-12）、准确、线性范围宽、元素覆盖范围宽、可实现多种元素同时测定。 5、离子色谱 新增附录可实施金属的形态与价态分析 6、原子荧光 未收载与ICP-MS和ICP-AES比 差与AA比相仿,四、主要增订项目内容,制药用水1、生产工艺纯化水 饮用水经蒸馏、离子交换、反渗透等方法注射用水 纯化水经蒸馏灭菌注射用水 注射用水按注射剂生产工艺制备2、修订后质量标准增二项检查a、电导率检查 新增附录用于检查各种阴阳离子的污染程度
6、b、总有机碳检查 控制有机污染（有机小分子、微生物）c、上述两项检查的在线检测可对制水系统进行实时流程监控,总有机碳检查,通过测定水中的二氧化碳，间接测量水被有机物污染的程度 （1）方法与原理a.氧化:燃烧、氧化剂、光照b.检测：直接电导、薄膜电导、非色散红外（2）对TOC测量的各种原理和方法不作任何褒贬，只强调技术要求a、能区分水中的有机碳与无机碳，并能排除无机碳的干扰b、应满足系统适用性试验要求85% （rss-rw）/（rs-rw）100115%c、具有足够的灵敏度（0.05mg/L） （3）TOC测量的意义 控制化学污染与微生物污染A TOC measurement is not a
7、replacement test for endotoxin or microbiological control.While there can be a qualitative relationship between a food souce (TOC) and microbiological activity.there is no direct numerical correlation.,电导率检查,1、对电导率仪的一般要求a、仪器的最小分辨率和读数精度 0.1S/cmb、电导率仪须定期校正（a）采用电导标准溶液校正电导池常数，实测电导池常数应在规定值的2%（b）与校正过的仪器进行
8、间接比对 2、影响制药用水电导率测定的因素主要有温度、大气中二氧化碳的溶入、水的pH值等,电导率检查,3、判定标准 （1）纯化水 表1 温度与电导率限度（纯化水）（略） 采用内插法计算 （2）注射用水 表2 温度与电导率限度（注射用水）（略）,电导率检查,a、以小于测定温度的最接近温度所对应的电导率值即为限度值 b、调水样（不少于100ml）温度至25，剧烈搅拌，每5分钟测一次，当变化0.1S/cm时记录读数，读数应不大于2.1S/cm（合格） c、如b步读数2.1S/cm，则依法测定水的pH值，由表3查得对应的电导率限度，并与b步实测值比较，如b读数不大于对应的限度值，则为合格，如b读数大于
9、限度值或pH值超出5.0-7.0，则不合格 表3 pH值和电导率的限度（略）,电导率检查,（3）灭菌注射用水 a、温度25 b、装量10ml，限度为25S/cm c、装量10ml，限度为5S/cm,电导率检查,4、TOC和电导率检查用水 （1）TOC检查 TOC0.1ppm 电导率1.0S/cm （2）电导率检查 电导率0.1S/cm （3）可采用经超纯水装置制备并经检验合格的水，如仍不理想，建议再经全玻璃重蒸,五、主要修订项目内容,紫外-可见分光光度法1、波长校正 增加了高氯酸钬溶液的校正（以10%高氯酸为溶剂，配制含4%氧化钬的溶液）max nm：241.13，278.10，287.18，
10、333.44，345.47，361.31，416.28，451.30，485.29，536.64，640.52nm。2、波长允差 紫外区 1nm500nm 2nm700nm 4.8nm,五、主要修订项目内容,红外光谱1、原料药鉴别 遇多晶干扰（1）按规定对样品进行预处理（重结晶与干燥）（2）采用对照品平行操作（3）采用溶液法2、制剂鉴别（1）提取（溶剂的选择）辅料无干扰，晶型不变 直接与标准光谱比对辅料无干扰，晶型有变 与对照品同法处理后比对辅料有干扰，晶型不变 在指纹区选择35个特征谱带波数允差为0.5%辅料有干扰，晶型有变 不宜采用红外鉴别,五、主要修订项目内容,3、多组份原料药的鉴别 可
11、借鉴制剂鉴别的方法 4、混晶中无效或低效晶型的限度控制采用基线密度法计算指定谱带的吸光度后再计算各晶型的相对含量（甲苯咪唑和棕榈氯霉素）,五、主要修订项目内容,高效液相色谱法1、色谱柱（1）常用色谱柱填料粒径310m（2）微径柱填料粒径 约2m（UPLC或UFLC）硬件须匹配色谱条件可适当调整以品种正文规定条件的测定结果为准2、柱温（1）通常为室温（2）以硅胶为载体的普通色谱柱，最高使用温度不得超过60，（HTLC）（a）提高灵敏度 峰高的对数与柱温呈线性关系（b）改善选择性,五、主要修订项目内容,3、有些色谱条件可适当调整，但流动相比例的调整有明确规定。组分比例较低者（50%）相对于自身的改
12、变量不超过30%，相当于总量的改变量不超过10%。如30%的相对改变量超过总量的10%时，则以后者为准。4、系统适用性试验（1）理论板数nn=16（ ）2或n=5.54（ ）2（2）分离度R（关键指标）R=2 或R=5、拖尾因子 必要时，应规定拖尾因子,五、主要修订项目内容,pH值测定法1、pH的含义 pH=-log aH+2、pH值的测定 pH=pHs+（E-Es）/RR=0.05916+0.000198（t-25）影响pH值测定的因素表观pH值3、弱缓冲液的pH测定 除另有规定外，按下法测定先用苯二甲酸盐缓冲液（pH4.01）校正仪器，1min内pH改变0.05时读数，再用硼砂缓冲液（pH
13、9.18）校正仪器，1min内pH改变0.05时读数，取二次读数的平均值。4、水的pH值测定 加KCl适量（由制药用水正文自行规定）,五、主要修订项目内容,电位滴定1、作图法零阶 EV曲线突跃部的中点或拐点所对应的滴定液体积一阶导数 一级微商（E/V）的极值所对应的滴定液体积二阶导数 二级微商（2E/V2）等于零时所对应的滴定液体积,五、主要修订项目内容,2、计算法二阶导数法较一阶导数法更准确，故最常用采用线性内插法V0=V+ V式中 V0：终点时的滴定液体积a：二级微商为零前的二级微商值b：二级微商为零后的二级微商值V：二级微商为a时的滴定液体积,V0=V+(a/a + b )V=34.30
14、+1100/(1100+3600) 0.10=34.32ml,五、主要修订项目内容,不溶性微粒检查法1、应用对象 由溶液型静脉注射液扩大至溶液型静脉注射液，注射用无菌粉末、注射用浓溶液及注射用无菌原料药2、统一了操作方法（1）取样体积 大于5ml取5ml小于5ml根据实际装量取或合并成不少于25ml，每次取5ml（2）有效读数不少于3个，取平均值计算3、仪器校正（1）标准粒子 10m 相对标准偏差不大于5%（2）8m与10 m或10 m与12 m两个通道的差值计数 68%10 m通道的累计计数,五、主要修订项目内容,可见异物检查法1、合并原附录H及可见异物检查法补充规定2、10ml及以下规格，
15、每次手持不超过2支3、目视检测时间不超过20秒4、所检样品必须系随机抽取,五、主要修订项目内容,渗透压摩尔浓度测定法1、供试溶液的浓度（1）由仪器可测定范围改为不大于700mOsmol/ （2）经稀释的供试液，其渗透压摩尔浓度不能简单地用实测值乘以稀释倍数表示，而应将实测值和稀释倍数完整表述2、扩大了应用范围，在制剂通则的注射剂和眼用制剂项下有明确规定。3、各类制剂的渗透压摩尔浓度范围暂不作统一规定，原则要求与血液等渗或接近等渗（285310mOs mol/ ）,五、主要修订项目内容,酸败度检查法羰基值的原计算公式有误羰基值=1、854的各种醛的2,4-二硝基苯腙的，而不是m2、V1 供试品稀释总体积V2 测定用供试品稀释液体积25ml5ml25ml3、修改为羰基值=,S,六、评价与展望,1、新版药典就采用的技术手段而言，已完全实现与国际接轨；各附录的技术要求也已达到或接近国际水平 2、农药残留量测定法与重金属检查法的增、修订使中药安全性检查的技术水准得以大大提升，不仅实现了方法学与国际接轨，而且所涉及的农药品种和重金属种类也涵盖了国际上主要控制的品种 3、总有机碳和电导率检查法的增修订以及在制药用水质量标准中的实施，使制药用水的化学污染与微生物污染得以有效控制 4、PCR扩增技术在中药鉴别中的应用,
