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1、第九章粽合酶链反应第一节PCR基本原理高清变性低遐复性适温延伸*高温变性,94;C左右,目的基因解链为单链,以作为扩增的模板:;*低温复性:55一60IC,一对特异性引物分别与模板3,“端互补结合;*适温延伴:72;C,延伸反应;*每一循环使DNA分子扩增一倍,n次循环后,理论上DNA分子可扩增为2n。联合酶链反应的原理。123高温变性侥温退火_适温延体月的MA片段异增100万借以H23一一Wantedgene-一一二2K加rk“一一一一艾deyle-一一=二lteytkeI扬35teycketempliteDNAx二r一4Lt一z54-_zcsE明2=皋bilioneopie(AodVest
2、et9皮克(pg10-1)量级扩增到徽克(ug=10-0水平能从100万个细胞中检出一个靶细胞病毒检测的灵敏度可达3个RFU,细菌为3个细菌*简便、快违一次性加妃反应波14-小时完成护蟠扩增产物般用电泳分析血液体腔液冼嗽液毛发、细胞、活组织等组织的粗提DNA第三节PCR体系组成和反应条件优化一、体系组成*DNA聚合酶。引物(Primer)dNTP原料)。目的DNA模板。缓冲液(Buffer)(一)DNA綦合酶表9-1PCR常用DNA聘合院DNA棣台酶来源核对洪性加接3dAMPgDNA梁台醛Themnuofualicurt+们DNA交史酯Thermuliermophites+KODDNA标台酸Tinjapormi+xTiyWentDNA亳台限Iieinoceuiomis+5MDKA棣台醛rfirions+HPoDNA花台酶E+EAmgifugDNA棣台酮TagDNA聚台酮修饰G+nfgDNA粽台酶TaqDNA精司修饰2-(二)引物。引物设计原则:15-30nt.引物组成G/C含量以40%-60%为宜3.引物结构*碱基随机分布、二级结构、引物二聚体,3“端不应有三个河缠的G1C。2引端可以修饰一引物特异性与其他序列的同源性一般70%5.引物浓度非特异性扩增,引物二聚体引物质量纯化
