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1、精品河南中医学院本科毕业生论文河南中医学院本科毕业生论文 论文题目：论文题目：HPLCHPLC 法测定山茱萸中高效氯氰菊酯的含法测定山茱萸中高效氯氰菊酯的含量量姓姓 名：名： 专专 业：业： 中中 药药 学学 年年 级：级： 0808 级级 班班 级：级： 中中 药药 班班 学学 号：号： 08311000460831100046 精品HPLC 法测定山茱萸中的高效氯氰菊酯的含量法测定山茱萸中的高效氯氰菊酯的含量摘摘 要要目的目的：掌握高效液相色谱法在中药定量分析中的应用；建立 HPLC 法测定高效氯氰菊酯的方法。方法方法：采用 Aglient ZORBAX SB-C18（4.6150mm，5
2、m）色谱柱，流动相为甲醇：水（85：15） ，流速为0.8ml/min，检测波长为 230nm，柱温为室温。结果结果:高效氯氰菊酯浓度在 0.030.12g 范围内与峰面积呈良好的线性关系，线性回归方程为Y=439.57X+0.8229，相关系数为 0.9973，加样回收率为 97.8%100.3%。RSD为 5.0047 。 结论结论: 此方法简单、快速、分析结果准确、专属性强，可用于高效氯氰菊酯的质量控制。关键词：关键词：高效液相色谱法；高效氯氰菊酯；山茱萸；含量测定精品Determination of Beta cypermetnrin in Macrocarpium officinal
3、is （Sieb. et Zucc.）by HPLCAbstractObjective： To establish a method for the determination of Beta cypermetnrin in Macrocarpium officinablis （Sieb.et Zucc.） by HPLC. Grasping the using method of HPLC and the application of HPLC in Chinese traditional medicine quantitative analysis . Methods ：Using Agi
4、lent ZORBAX SB-C18 4.6150mm,5um as analytic column ,Methanol: water =85：15（V:V）as the mobile phase . At a flow rate of 0.8ml min The detection wavelength was 230nm. A Column temperature 25. Results :The linearity of forsythin in the range of 0.030.12g was good (r=0.9973).The average recover is 97.8%
5、100.3% and the RSD is5.0047%. Conclusion: The method developed simple rapid accurate sensitive and specific .it can be beapplied to the quality control of Beta cypermetnrin.Key Words ：HPLC Beta cypermetnrin Macrocarpium officinalis（ Sieb. et Zucc. ） Determination、精品、1 前言前言山茱萸(Macrocarpium officinali
6、s Sieb. et Zucc.)是山茱萸科（Cornaceae）山茱萸属(Macrocarpium)植物，主产于长江以北、浙江、河南、陕西等地，生于海拔 200 到 2000 米的杂林中，各地有栽培，其果实具有补肝益肾的功能，为我国传统珍贵药材，现代药理研究证明山茱萸具有较好的调节免疫系统功能和显著的降血糖作用，具有广阔的市场前景，同时果能作保健饮料和食品添加剂。但在中药材中有相当数量山茱萸为人工栽培，为提高药材质量，减少昆虫、真菌和霉菌的危害，在生产过程中常需喷洒农药。此外，土壤中残留的农药也可能引入到药材中，致使中药材中农药残留的问题较为严重，而农药对人体危害极大，故控制中药材及其制剂中
7、农药残留量已成为必然。高效氯氰菊酯就是中药材中的一种常见农药残留，高效氯氰菊酯为一种内吸性，具有触杀胃毒作用的杀虫剂，用于公共卫生和畜牧业中，可防止多种害虫，其入侵途径多样，对生态系统的危害较大，因此，有效地控制其含量对保护人体健康和保护生态环境可持续发展具有重要的意义.氯氰菊酯共有四个异构体，即 cisA、cisB、transA、transB.高效氯氰菊酯是指主含量为 cisB 和 transB 的氯氰菊酯。故要实现很好的分析，必须选定好的分析方法。近年来，随着科学技术的发展，农药残留分析领域取得了许多重要进展。样品提取和净化方法向着简单化、微型化和自动化发展。在定量分析方面也出现了新的变化
8、，在对残留物的分析中，占绝对优势的高效液相色谱法的使用也越来越广泛，用它可以很方便的测定热不稳定和极性强的农药及其代谢物。因此高效液相色谱法也成为含量测定中应用较为普遍的一种色谱分析方法，具有分析速度快，灵敏度高，以及流动相的选择较为广泛的优势。在具体选择时应考虑被分离物的化学结构、极性和溶解度的因素。本实验考虑到高效氯氰菊脂的性质和化学因素等各方面的因素采用了反相键合色谱法对其进行分析。精品2 仪器和试药仪器和试药实验材料：山茱萸果实及叶片（采摘于河南省嵩县车村镇天桥沟村）仪器：安捷伦 Agilent1100 高效液相色谱仪（二极管阵列检测器） 、SHB () 循环水真空泵、分析天平（） 、
9、微孔滤膜（0.45，水膜、有机膜） 、SRK 低温冷冻干燥器、KQ-250DB 数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司） 、TGL-16G-A 型离心机（上海安亭技术有限公司）试剂：乙腈（分析纯） 、甲醇（色谱纯） 、双蒸水、硫酸镁、氯化钠、丙基乙二胺（PSA） 、C18（天津博纳艾杰尔） 、高效氯氰菊酯对照品（98.5%）3 实验方法和结果实验方法和结果3. 1 实验方法实验方法3. 1. 1 干燥条件：取山茱萸果实和叶片分别置于 SRK 低温冷冻干燥器中干燥 24小时3. 1. 2 色谱条件：色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6x150mm，5m） ；柱温：25；流速
10、：0.8ml/min；流动相：甲醇：水=85:15（V：V） ；检测波长：230nm3. 1. 3 标准品溶液的配置精密量取 100g/ml 高效氯氰菊酯的标准溶液 1ml,置于 10ml 的容量瓶中，用甲醇（色谱纯）定容至刻度。3. 1. 4 供试品溶液的配置分别精密称取干燥粉碎的山茱萸果皮果肉和叶片约 0.5g，加入 10ml 乙腈溶液，再加入 3g 硫酸镁和 0.8g 氯化钠，振摇 1min，超声 15min，离心，取上清精品液 1ml，放入 10ml 离心管中，然后加入 0.08g 丙基乙二胺（PSA）和 0.08gC18,涡旋 1min，常温下离心 15min（速度为 1000r/m
11、in） ，取上清液 10l、3.2 实验结果实验结果3. 2. 1 干燥条件实验为了使山茱萸原药材更好的粉碎以便更好的提取目标物.采用了不同的干燥条件，结果如表 1 所示表 1 在不同干燥条件下对山茱萸进行干燥的结果干燥设备真空干燥器真空干燥器SRK 低温冷冻 干燥器温度60100现象果肉和种子不能很好的分离果肉和种子融合在一起果肉和种子能够 很好的分离3. 2. 2线性关系实验精密吸取浓度为 10g/ml 的标准品溶液 3l、5l、8l、10l 进样，结果如表 2 所示。以标准品质量（X）对峰面积（Y）进行线性回归，得到回归方程Y=439.57X+0.8229 R2=0.9973（图 1）表
12、 2 高效氯氰菊酯标准液的进样量与峰面积浓度（g/ml）体积（l）质量（g）峰面积1030.0313.231030.039.641050.0519.001050.0523.101080.0835.80精品1080.0838.3010100.1045.310100.1045.910120.1252.810120.1252.5高效氯氰菊酯 Beta cypermethrin1020304050600.020.040.060.080.10.12 质量/ug Quality峰面积/mAU Area图 1 浓度为 10g/ml 的高效氯氰菊酯的标准曲线3. 2. 3 精密度实验精密吸取上述对照品溶液 1
13、0l，连续进样 5 次，结果如表 3，RSD 为0.022表 3 高效氯氰菊脂对照品精密度实验结果（n=5）进样量（5g）0.10.10.10.10.1y = 439.57x + 0.8229 R2 = 0.9973020406000.020.040.060.080.10.120.14精品峰面积45.345.944.146.843.53. 2. 4 重现性实验取同一份供试品溶液，按 3.1.4 的方法制备，制得 5 份供试品溶液，然后进样，测定结果如表 4 所示，测定 RSD 为 5.0047。表 4 重现性测定结果测量值编号12345平均值标准偏差（%） 含量0.102580.1030340
14、.1021460.1098720.1139620.10635.00473. 2. 5 加样回收率实验用已知准确含量的高效氯氰菊酯样品中加入不同质量的标准品，按照上述条件测定回收率为 97.8%-100.3%。结果如表 5 所示：表 5 加样回收率实验结果样品中有效成份含量/g加入标准品的质量g测定量g回收率%平均值%0.050.048997.80.10.096796.79 月 7 号对照品空白0.50.5013100.398.33. 2. 6 样品测定取 3 批样品，每批 3 份，制供试品溶液测试结果如表 6 所示，图 1 为山茱萸中高效氯氰菊酯的色谱图。表 6 山茱萸中高效氯氰菊酯的含量测定
15、结果果皮+果肉（mg/g）叶片（mg/g）2009 年 8 月 25 日0.10140.00172009 年 9 月 7 日0.10160.00072009 年 10 月 13 日0.0077部位日期精品图 1 山茱萸中高效氯氰菊酯的色谱图保留时间 t 为 4.20min4. 讨讨 论论4.1 检测波长的确定检测波长的确定确定样品溶剂和流动相的组成之后，在 200400nm 波长的范围内进行扫描，可见最大吸收波长为 230nm，因此确定用 230nm 作为此方法的检测波长。4.2 超声时间的确定超声时间的确定取样品分别于 15、20、25、30min 条件下进行提取，分别测定含量结果，结果四种提取时间分离度、峰形、对称性均可行，因此采取的提取时间为15min。4.3 溶剂的考察溶剂的考察二氯甲烷、石油醚虽然也可用于高效氯氰菊酯的提取，但由于综合净化方法的考虑最终选定乙腈为提取溶剂，用
