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1、2012-XX-XX 定稿参照GB/T 13092-2006 饲料中 霉菌总数测定方法编制人审核人批准人1 霉菌总数检测操作规程1 原理根据霉菌生理特性，选择适宜霉菌生长而不适宜细菌生长的培养基，采用平板计数法测定霉菌总数。2 试剂与仪器2.1 所用器具三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000L 枪头、5mL 枪头、称量勺、接种环、接种针、移液器2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅2.3 所用试剂和培养基高盐察氏培养基取高盐察氏培养基109g，加入蒸馏水 1L，搅拌加热至完全溶解， 分装三角瓶， 115高压灭菌 30 min，备用。3、操作步骤3.1 配制
2、 0.85%生理盐水称取氯化钠 8.5g溶于 1000mL 蒸馏水中。3.2 锥形瓶加入生理盐水90mL，试管中加入生理盐水9mL，121灭菌 30min。 （三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关）。3.3 将 1000L 枪头、培养皿、 5mL 枪头、称量勺、带6 颗玻璃珠具塞试管， 121灭菌30min。 （注意计算数量）3.4 枪头、培养皿置于烘箱103烘干。 （1-3 步需提前一天完成）3.5 对称量房间进行紫外灭菌30分钟， 关灯静置 60 min。 以无菌操作取样品10g于含 90mL生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡30min，制成 1:10 的均匀稀释液。3.6
3、吸取 1:10 稀释液 10mL 注入带玻璃珠的试管，置微型混合器上混合3min。3.7 用 1000L 枪头吸取 1:10 稀释液 1mL，沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水9mL 的试管中，于振荡器上混合均匀，制成1:100 的均匀稀释液。3.8 另取一只 1mL 灭菌吸管，按照上述操作方法，作10 倍递增稀释，如此每递增稀释一2012-XX-XX 定稿参照GB/T 13092-2006 饲料中 霉菌总数测定方法编制人审核人批准人2 次，更换一支灭菌吸头。3.9 选择 3 个适宜稀释度，分别在作10 倍递增稀释的同时，吸取该稀释的吸管移1mL 稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。3.1
4、0 稀释液移入培养皿后，及时将凉至461的高盐察氏培养基（可放置461水浴锅内保温）注入培养皿约15mL，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀。3.11 待琼脂凝固后， 倒置平皿于 281恒温培养箱内培养3 天后开始观察， 培养观察一周。计算平板内菌落总数目，菌落总数乘以稀释倍数，即得每克试样所含霉菌总数。4 霉菌总数计算方法做平板菌落计数时，可用肉眼观察，如菌落形态较小可借助放大镜观察。在计算出各平板菌落总数后，求出同稀释度的两个平板菌落的平均值。4.1 霉菌总数的报告形式菌落总数在 100 以内时，按其实有数报告，大于100 时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法修
5、约。为了缩短数字后面的零数，也可以用10 的指数表示。（见表 1）4.2 霉菌总数计数的报告4.2.1 平板霉菌总数的选择选择菌落总数在10100 之间的平板进行霉菌总数测定，每一稀释度使用两个平板菌落的平均数。两个平板其中一个平板有较大片状菌落生长时不宜采用；若片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘2 以代表全平皿霉菌总数。4.2.2 稀释度的选择应选择平均菌落总数在10100 之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表1 中例次 1）若有两个稀释度，其生长的菌落总数均在10100之间，则视两者之比如何来决定。若其比值（高稀释度数值：低稀释度数值）2，应报告其平
6、均值；若 2 则报告其中较小的数字（见表 1 中例次 2 及例次 3） 。若所有稀释度的平均菌落总数均大于100，则应按稀释度最高的平均菌落总数乘以稀释倍数报告之（见表1 中例次 4） 。若所有稀释度的平均菌落总数均小于10， 则应按稀释度最低的平均菌落总数乘以稀释倍数报告之（见表1 中例次 5） 。2012-XX-XX 定稿参照GB/T 13092-2006 饲料中 霉菌总数测定方法编制人审核人批准人3 若所有稀释度均无菌落生长， 则以小于 1 乘以最低稀释度报告之 （见表 1 中例次 6） 。若所有稀释度的平均菌落总数均不在10100 之间，其中一部分 100，或者小于 10时，则以最接近
7、 10 或 100 的平均菌落总数乘以稀释倍数报告之（见表1中例次 7） 。表 1 稀释度选择及菌落总数报告方式例次稀释液及菌落总数稀释液之比稀释度选择霉菌总数/CFU/g （ mL） 报告方式/CFU/g（mL） 10-110-210-31 多不可计80 8 取平均菌落总数在10100 之间的稀释度8000 8.01032 多不可计87 12 1.4 10100 之间，比值 （12000： 8700）2，报告平均值10350 1.01043 多不可计95 20 2.1 10100 之间，比值 （20000： 9500）2，报告较小的数值9500 9.51034 多不可计多不可计110 所有稀释度的平均菌落总数均大于 100，报告稀释度最高的数110000 1.11055 9 2 0 所有稀释度的平均菌落总数均小于 10，报告稀释度最低的数90 90 6 0 0 0 所有稀释度均无菌落生长，则以1 乘以最低稀释度1 10107 多不可计102 3 所有稀释度的平均菌落总数均不在 10100 之间，报告最接近10 或 100 的数10200 1.0104注： CFU/g（mL ）与个 /g（mL）相当
