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1、XX有限公司第 1 页 共 7 页环境微生物检测作业指导书文件编号Q/XYSP-YC-006 版 本 号A 生效日期编制2011 年 3 月 21 日审核年月日批准年月日受控状态受控文件用红色“受控章”，其他颜色均为非受控状态本文件资料属于XX有限公司所有 , 未经同意 , 不得复制。XX有限公司第 2 页 共 7 页文件更改历史序号修改内容简介修改方式页码修订次生效日期XX有限公司第 3 页 共 7 页一、目的：为监控生产过程中环境、人员、器具的微生物，保证产品质量的可追溯性，制定本指导书二、适用范围适用于公司检验人员对环境中空气沉降菌以及操作人员手部、生产器具接触面微生物检测过程的指导三、
2、内容（一）、空气沉降菌的检测方法1 、采样方法：在动态下进行，室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、外三点；室内面积超过30m2，分别在四个角以及四个角的对角线交叉点采样， 采样时，将含灭菌凝固后的平板计数琼脂培养基的平板置采样点，放置时需离地0.8m、离墙 1.2m，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min，盖上皿盖。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于 04条件时，送检时间不得超过24h。2 、菌落培养：（1）将准备好的平板计数琼脂培养基平板置361培养 482h 做空白对照试验（2）将已采集样品的培养基在6h 内送实
3、验室，细菌总数于361培养 482h，观察结果，计数平板上细菌菌落数。3 、菌落计算：（1） 、记录平均菌落数，用“ cfu/ 皿”来报告结果。用肉眼直接计XX有限公司第 4 页 共 7 页数，标记或在菌落计数器上点计，然后用510 倍放大镜检查，不可遗漏。（2） 、若培养皿上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或 2 个以上菌落计数。4 、标准要求：（二）、食品接触面微生物检测方法1 、采样方法：适用于直接接触食品的生产设备设施；员工手部、一次性手套、工作服等食品接触面；包装卷膜、饼托、包装袋等内包材；（1）棉签涂抹法：A 、 将生理盐水以 10ml 分装入试管中连同包好的装
4、入干燥平皿内的棉花团用高压灭菌器灭菌。B 、用经 75% 酒精棉擦拭消毒后的不锈钢镊子夹住用灭菌生理盐水浸湿的棉花团反复在内包装材料、生产器具和人员手部的表面檫拭，作业区包括场所标准要求清洁作业区生产车间、无菌室、无菌室缓冲间30cfu/ 平 皿准清洁作业区配料间、缓冲间、原辅料库房、成品库 房50cfu/ 平 皿一般作业区办公室、化验理化室、厕所、餐厅、更 衣室等100cfu/ 平皿；XX有限公司第 5 页 共 7 页面积约为 10c ，然后将带菌棉签放入有10ml 生理盐水的试管中，充分振荡后作原液备用。（2） 、滤纸涂抹法：A 、将滤纸裁成 5*5 的正方形纸片放入干燥平皿内包好，生理盐
5、水以 50ml 分装入 150ml 的三角瓶内，一起用高压灭菌器灭菌。B 、用经 75% 酒精棉擦拭消毒后的不锈钢镊子夹住用灭菌生理盐水浸湿的滤纸， 正反面各在内包装材料、 生产器具和人员手部的表面涂抹 1min，总共面积约为 50c ，然后将带菌滤纸放入有50ml 生理盐水的三角瓶中，充分振荡后作原液备用。2 、微生物检测：（1） 、菌落总数：将原液在无菌操作下取1ml 于两个平板中，再将灭菌平板计数琼脂倒入平板内并转动平皿，使混合均匀， 待凝固后倒转放入生化培养箱中（ 36+1）培养（ 48+ 2）h，培养结束后计数两个平行平板计数琼脂培养基表面上所生长的菌落数，计算其平均菌落数，结果以
6、cfu/cm2计。（2） 、大肠菌群：以无菌操作，将原液取1ml 样液分别接种到三管灭菌的乳糖胆盐发酵管中 （若接种量超过 1ml 选择双料乳糖胆盐发酵管） ，将接种好的发酵管于361培养 242h。记录所有发酵管产气管数。结果报告按发酵管产气管数，查GB/T4789.3-2003 的 MPN检索表报告每 100cm2食品接触面中大肠菌群的MPN 值， 即MPN/100cm2；若全部阴性，结果报告填阴性。XX有限公司第 6 页 共 7 页3 、标准要求：（三） 、取样频率：1 、车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。2 、全厂统一放长假后，车间生产前，进
7、行采样。3 、产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。4 、实验性新产品，按客户规定频率采样检验。5 、正常生产状态的采样，每周一次。采样点标准要求菌落总数大肠菌群直接接触食品的生产设 施设备50cfu/cm2阴性员工手、一次性手套、工 作服等食品接触面100cfu/cm2阴性包装卷膜、饼托、包装袋 等内包材30cfu/cm2阴性XX有限公司第 7 页 共 7 页Q/XYSP-YC-006-001 环境微生物检验原始记录序 号抽样地点检测点菌落总数 cfu/ 皿结果判定 结果序 号抽样 地点检测点菌落总 数结果 cfu/cm2大肠菌群结果 MPN/10 0cm2判定 结果检验日期：检验员：审核人：
