《检验科微生物室模版最好》由会员分享，可在线阅读，更多相关《检验科微生物室模版最好（77页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、临床微生物质量控制,湖南省肿瘤医院检验科 黄宏君 电话号码：13974844233 Email:,内 容,二、临床微生物的质量控制,三、标本采集和运送,四、细菌鉴定的基本步骤,五、细菌药物敏感试验,六、实验室质量保证和报告规范化,七、工作中常见的问题和解决方法,八、目标,一、临床微生物实验室的重要性,一、临床微生物实验室的重要性,人类面临着微生物的挑战，要打赢这场战争不仅需要有经验的医生，还需要一支优秀的临床微生物检验队伍。 与过去的10年或20年相比，临床微生物实验室的规模和发展速度已经发生了巨大的变化。目前，我们离CLSI(临床实验室标准化研究所)标准化文件要求还相差很远，我们应进行规范操
2、作，才可能应对微生物向人类的挑战，才能适应临床的需要。 临床微生物检验，在感染性疾病及相关病患的诊断治疗预防及研究工作中起着越来越重要的作用，为了保障检验结果的准确性和可靠性，日常工作中要注意开展质量控制。,一、临床微生物实验室的重要性,临床微生物检验的目的和意义 提供感染性疾病诊断的病原学依据 为医院感染流行病学调查提供依据 为感染性疾病治疗提供用药依据 细菌耐药性监测需要 为合理使用抗菌药物提供依据 为生物安全、医院感染管理和监控预防提供科学依据,分析后,质量控制范畴,分析前,分析中,二、临床微生物的质量控制,质量保持持续改进,临床微生物检验质量控制的有关概念,为了保证质量控制，我们需注意
3、： 标本的质量（数量、体积、可接受的合格标本、运送方式等） 试验方法的有效性（根据临床症状、诊断和其他临床资料，采用适当检测方法） 试验的操作方法和步骤、试剂、培养基、仪器、环境、人员等。 有临床意义的结果报告（报告的准确、清楚、及时和完整）,二、临床微生物的质量控制,临床微生物质量控制的依据标准 卫生部医政司颁布的全国临床检验操作规程，美国临床实验标准化委员会（CLSI）主要颁布的最新的质量控制和评议方案。 检验方法学、操作手册应不断更新，开展循诊医学，不断淘汰无价值的试验，增加新的有临床价值的试验。,二、临床微生物的质量控制,临床微生物制度 制定程序性文件（可参考ISO 15189认可准则
4、中应用说明要求） SOP操作手册 仪器的性能验证等,二、临床微生物的质量控制,临床微生物实验室的基本装备,孵育箱、CO2培养箱、高压器,生物安全柜或安全罩,试剂、染液、质控菌株、培养基,冰箱、酒精灯、接种环、游标卡尺、温度计等,二、临床微生物的质量控制,光学显微镜,室内质控 室内质控内容包括对各种实验条件及实验过程进行监督 监督的对象有仪器设备、培养基、鉴定系统及操作全过程 室间质量评价,二、临床微生物的质量控制,临床微生物室需建立室内质控,1,1,2,3,4,常规试验室内质控,培养基质控,药敏试验的质控,自动化设备质控：鉴定和药敏、血培养系统,二、临床微生物的质量控制,ATCC：美国典型菌株
5、保存中心-主要来源 NCTC：英国国家典型菌株保存中,实验中用标准方法鉴定，鉴定值95典型菌株，并经多次传代，特征衡定的菌株,质控菌株,参考菌株,临床分离菌,二、临床微生物的质量控制,质控必备菌株 细菌名称 菌号 用途 金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 纸片扩散质控 金黄色葡萄球菌 ATCC 29213 MIC测定质控 大肠杆菌 ATCC 25922 纸片和MIC 绿脓假单胞菌 ATCC 27853 纸片和MIC 粪肠球菌 ATCC 29212 胸腺嘧啶含量测定 淋病奈瑟菌 ATCC 49226 淋球菌药敏 流感嗜血杆菌 ATCC 49247 嗜血杆菌药敏 肺炎克雷伯菌 ATCC 7006
6、03 ESBL阳性菌,二、临床微生物的质量控制,低温速冻 苛养细菌,冷冻干燥 长期保留菌株,参考菌株保存方法,高层琼脂 非苛养菌,二、临床微生物的质量控制,琼脂斜面 现用菌株,室间质评样本的检测操作程序 1. 测试环境、仪器、试剂的要求 室温：2025 湿度：80% 试剂：所用试剂或试条均为仪器配套产品 质控品：为仪器配套产品，并在使用效期内，同时无变质或污染。 仪器：仪器必须有质量控制保证。 2. 质评样品的准备 按测定日期从冰箱中取出参评物，放置至室温(约30min)。 根据标本种类，质控菌株分到各组进行培养分离鉴定。 3. 质评样品的测定 质控菌株用小牛血清或肉汤溶解，按标本种类接种各种
7、选择培养基，放适当环境培养。 培养分离病原菌，根据病原菌种类进行鉴定和耐药表型检测，并根据质控要求，病原菌进行药敏试验(重复2次)。 4. 填写报表或网上回报 填写报表时应按要求逐项填写，字迹清晰整洁。 填写完后再次核对，以防笔误、样本号顺序错误等。 然后则测定者、室负责人签字。 5. 结果存档 填写完后复印或将网页另存，一份寄出，一份存档，以备核查。,二、临床微生物的质量控制,室间质评的评价方法 1. 单项PT值评分标准 每一批号每一项目结果在允许范围内时，测定结果合格，得分为100%，若在允许范围外时，测定结果不合格，得分为0%。单个项目的得分计算公式为： (该项目的合格结果数该项目的总的
8、测定样本数)100%。 合格：该项目的测定成绩80% 不合格：该项目的测定成绩80% 2. 总项目的PT值评分标准 总项目的计算公式为： (总项目的合格结果数总项目的总的测定样本数)100% 合格：总项目的测定总分80% 不合格：总项目的测定总分80% 3. 部临检中心给参加实验室发证书的规定 合格证书：每年每个专业参加2次或3次以上，不得缺席，每次有五个调查样本。每次总项目的测定总分80%；颁发合格证书。 参加证书：不符合合格证书的要求和标准的均颁发参加证书。 注意：若失控，应将调查所有失控原因及相关纠正措施，并做好记录，上报科质量控制小组和科主任，由科主任签字后，质控结果归档保存。,二、临
9、床微生物的质量控制,实验室前的质量控制 患者的准备 标本采集 标本保存与送检 验收和登记 标本的正确评估,二、临床微生物的质量控制,标本的质量控制 采集原则：捕捉病原菌并保存其活性，以提高检出率，尽可能避免非病原菌的污染和干扰。 标本采前集的准备：向临床提供标本采集手册，对收集和运送标本的容器控制，无菌、不易碎、足够大，避免用木质的棉拭子（由于棉中所含的脂肪酸以及从木棒中渗出的树脂和甲醛对细菌有抑制作用）对细菌有毒害。,三、标本采集和运输,正确的运送和保存方式 需进行细菌学检测的所有标本，最好在收集后2h内送到实验室。 量少标本在采集后15-30分钟内送检。 对环境敏感的细菌包括志贺氏菌、淋病
10、奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌和流感嗜血杆菌（对低温敏感）等均应立即处理。 通常用于细菌学检验的标本在4C存放不超过24h，而病毒检测标本可于4C存放2-3天。,三、标本采集和运输,标本验收 仔细核对，标本标识是否与申请单一致和唯一，对不合格标本要拒收。,三、标本采集和运输,标本拒收的原则 错误标签 标本泄露，标本明显被污染 拭子上的标签干掉或者标本量不够 标本不适合所要求的试验 运送标本的时间过长或所用运送培养基不合适,三、标本采集和运输,标本评估有可靠的标本质量评价方法 痰标本中10个上皮细胞/LP、5个/HP，未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者粪便 伤口标本：如出现上皮细胞，提示标本已受皮肤菌群
11、的污染，高倍视野中超过5个鳞状上皮细胞的伤口标本不适合做厌氧培养,三、标本采集和运输,血液细菌培养 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血流感染的患者，需做血液细菌培养以明确病原。及时、准确地从患者血液中分离出病原菌，才能正确实施有效地抗菌治疗，从而有助于提高治愈率和降低医疗费用。 1.采血时机应在用抗菌素治疗前, 最好在患者发冷发热前半小时采血为宜。 2.采血次数与间隔 急性感染患者：从两臂分别采2份血样（两套）。 感染性心内膜炎患者：24h内采血3次, 每次间隔不少于30分钟。 发热原因不明患者：2448h后可再采血2次,间隔不少于60分钟。,三、标本采集和运输,呼吸道标本细菌培养 标本留取质
12、量的好坏直接影响到对下呼吸道病原学的诊断 标本的采集要尽量减少上呼吸道正常菌群干扰 应在用药前或停药1天后留取标本。,三、标本采集和运输,痰 采集方法 自然咳痰：必须用清水漱口3次，应包括咽喉部，立即用力咳出痰，于灭菌容器中或输送培养基中；支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，建议直接种入输送培养基 处 理 痰首先用灭菌生理盐水将痰液洗3次，然后将痰块打碎，或加入等量10g/L的胰蛋白酶将痰块消化后再接种。 合格标本 外观为脓痰、粘液、血，涂片镜检25个WBC/LP 为合格标本。,三、标本采集和运输,泌尿道标本细菌培养 应在用药前或停药5天后留取标本, 并使尿液在膀胱内停留68h以上。 尽量避免或
13、减少尿道口正常菌群干扰。 清洁中段尿、导尿导管尿、经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液，送检标本以晨起第一次尿液为佳 尿量不宜太多，试管塞子与尿液不应直接接触 留取导尿管尿要排空导尿管内陈旧尿液，倘留置尿管超过三天应避免采用。 标本采集后立即送检，不能立即送检者，可暂存4冰箱，但保存不超过8h,三、标本采集和运输,粪便标本的培养 应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集，稀便不少于1ml，固体便不少于1克，无便患者可用直肠拭子采集标本。 要挑取含脓、黏液、血等病理改变或水样粪便送检。直肠拭子采样量要足够，拭子上肉眼应可见粪便。 注意事项： 虽然粪便标本本身含很多细菌但也要用无菌容器。 厌氧细菌（难辩
14、梭菌）培养的标本应尽量减少与空气接触。 注意挑取脓血便或粘液便做培养 要进行分区划线。如图所示。,三、标本采集和运输,分泌物的培养 1. 对开放性病灶的采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧的分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部的分泌物，也可取感染部位下的组织送检。 2. 闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭的脓肿常采用穿刺或引流的的方法采样，应在用药前采集，应注意脓液的气味、性状、颜色注意厌氧菌存在的可能。不能及时送检应应用输送培养基。,三、标本采集和运
15、输,脓液标本 要尽量避免病灶表面细菌污染。开放性脓肿，采样前无菌盐水冲洗伤口，拭去表面污染脓液，挑取病灶深部脓液；封闭性脓液，严格病灶皮肤或黏膜表面的消毒后用无菌干燥注射器穿刺抽取，置无菌试管内送检，或切开排脓时用无菌拭子采集深部脓液。,三、标本采集和运输,厌氧菌和伤口标本 厌氧菌标本 隔绝空气-氧对厌氧菌有毒性作用 液状标本应用注射器抽取密封送检 分泌物标本最好床边采集床边接种；另置厌氧环境送检（输送培养基） 伤口标本 在伤口切开排脓时留取标本 不能在伤口消毒清洗后留取标本 尽量采集伤口深部的脓汁送检,三、标本采集和运输,脑脊液标本 直接观察：革兰染色、抗酸染色、印度墨汁染色 无菌采集技术：
16、避免标本污染及患者被感染 病毒培养标本：置4 保存 分枝杆菌培养标本：2mL以上，置4 保存 细菌培养标本置35 保存,三、标本采集和运输,微生物试验分析中质量控制 种类和环节多（细菌鉴定、药敏、培养基、生化管、仪器、稀释液） 涉及知识面广 复杂性高 需要强烈的责任感,三、标本采集和运输,常规试验的质量控制-天天做（质控菌株） 触酶试验：3H2O2每三天更换一次 血浆凝固酶试验：人血浆或商品乳胶试剂 氧化酶试验：1盐酸四甲基对苯胺水溶液浸泡厚滤纸，室温吹干压成小纸片，置含干燥剂容器20保存，或买商品制剂 内酰胺酶：头孢硝噻吩(Nitrocefin)为底物，适于测试嗜血杆菌、淋球菌、卡他莫拉菌、肠球菌 革兰染色：革兰阳性菌染成红色；革兰阴性菌染成紫色；另涂片厚度、染色和脱色时间、染料沉渣等也影响染色质量,
