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1、麻风分枝杆菌的 实验室检查,艾滋病性病皮肤病防治研究所,一、临床意义,(1) 麻风病人的诊断; (2) 麻风病人的疗效观察; (3) 确定三联化疗治疗方案; (4) 判断预后、确定复发; (5) 科研。如鼠足垫接种、药物筛选等。,二取材部位的选择,(1)常规查菌部位:眉弓、耳垂、下颌、皮损。(2) 结节取中央、斑块取边缘交界处。(3)不要选择冻疮、溃疡、裂口和结痂部位。,麻风面部结节伴巩膜麻风瘤,三取材方法,(1) 消毒。 (2) 使局部贫血。 (3) 伤口长约5毫米、深约2-3毫米。 (4) 止血。 (5) 取足够的组织液。(不得少于绿豆大小。),四涂片,(1)以45度角将皮肤组织液均匀地涂
2、布于载玻片上,涂点大小7毫米。 (2)自然干燥后妥善保管,防蚊蝇吃掉,防玻片断裂,注意编号,查对真实姓名,保证玻片编号及姓名与真实姓名吻合。 (3) 防止混血和污染。,麻风病人面部温度示意图,耳垂取材操作图,组织液涂片操作图,五染片,(1)染液配制: A 石碳酸复红液,取碱性复红4G,溶于95%酒精100ML中制成饱和液。再取饱和液10ML与5%石碳酸液90ML混匀即成。B 1%的盐酸酒精,取浓盐酸1ML,70%酒精99ML混匀即成。C 碱性美兰液,取美兰2G,溶于95%酒精100ML中制成饱和液,再取饱和液30ML加入蒸馏水100ML及10%的氢氧化钾0.1ML混匀即成。,(2)染色: A
3、固定,以钟摆的速度将涂片通过酒精灯火焰中部3次。B 滴入足够的石碳酸复红液(将涂膜全部覆盖)于玻片涂片上,加热使冒气,保持10分钟。C 待冷后用水冲去玻片上的染液,1%的盐酸酒精脱色10-30秒,以涂膜呈极淡红色或无色为宜。用水冲去脱色剂。D 加美兰液复染半至一分钟,水洗,自然干燥。,六镜检,(1) 麻风杆菌形态:麻风杆菌一般为短小直棒状或稍有弯曲,长约1-8微米,宽约0.3-0.4微米。没有鞭毛、芽胞和荚膜。麻风杆菌具有抗酸性,即具有抵抗稀酸类脱色剂脱色作用的性质。抗酸性是麻风杆菌的一个重要特征。麻风杆菌革蓝氏染色呈阳性。麻风杆菌另一个重要特点就是多形性。未经治疗的早期病人或复发病人其形态较
4、为完整。治疗后多为断裂或颗粒形。此外麻风杆菌数量较多时往往集簇存在,形成菌团或菌束。,抗酸染色镜下的麻风杆菌,抗酸染色镜下的麻风杆菌,(2)镜检方法:涂片自然凉干后放入分辨率较高的显微镜上,先用低倍镜对焦,找到涂膜中间部分,然后移去低倍镜,放入镜油,换上油镜,以弓字形方式逐一检视整个涂膜,按雷德里记数标准计算结果。要求,阳性涂膜至少检视50 个视野,阴性涂膜至少检视200个视野。,(3) 雷德里计数标准: 0=观察100个油镜视野未查见ML。 1=观察100个油镜视野查见1-10条ML。 2=观察100个油镜视野,平均每10个视野有1-10条ML。 3=观察25个油镜视野,平均每视野有1-10
5、条ML。 4=观察25个油镜视野,平均每视野有10-100条ML。 5=观察25个油镜视野,平均每视野有100-1000条ML。 6=观察25个油镜视野,平均每视野有1000或1000条以上ML。,平均每视野有100-1000条ML,(4) BI指数(细菌指数)计算公式:各涂膜BI总和 BI (细菌指数)=涂膜数,:,(5)菌团细菌数的估计方法: 细菌计数时,经常会遇到菌球或菌团,因此需按照菌团或菌束的大小估计其细菌数。一般大菌球约百条细菌,中菌球约50条细菌,小菌球约20条细菌。能直接计数的尽量直接计数。,麻风分枝杆菌形成的菌团,七报告,(1)麻风病细菌学检查需报告检查部位的细菌(“+”数)和雷德里分级数(BI指数)两种结果。(2) 不要直接报告“查见麻风杆菌”或“未查见麻风杆菌”。,八、注意事项,1、涂片质量要高:涂片厚薄一致,涂点大小一致,不含红细胞,最好每个视野有一两个巨噬细胞。2、染色质量要好:麻风杆菌成鲜红色,淋巴细胞呈兰色。3、显微镜分辨率要好;4、检验人员技术要硬。,谢谢!,