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1、第二节 血液凝固分析仪,学习目标,掌握：血凝仪的检测原理熟悉：半自动、全自动血凝仪的特点和基本 结构、各种检测方法的优缺点了解：血凝仪的分类、临床应用、仪器的维护,内容提要,一、血凝仪的分型 二、血凝仪的检测原理 三、血凝仪的基本结构 四、血凝仪的临床应用 五、血凝仪的维护 六、血凝仪的注意事项,血凝仪是采用一定分析技术，对血栓与出血有关成分自动检测的临床常规检验仪器。在血栓/出血实验室中最基本的设备就是血液凝固分析仪（简称血凝仪）。,一、血凝仪的分型,按自动化程度分类： 1. 半自动血凝仪：需手工加样加试剂、检测方法少、速度慢，但操作简单、价格便宜；检测一些常规检测项目。 2. 全自动血凝仪
2、：自动化程度高、检测方法多、通道多、速度快、精度好，但价格昂贵；检测常规凝血项目、监测抗凝及溶栓的治疗。 3. 全自动血凝工作站：自动识别、接收样本，自动离心加样、分析等,二、血凝仪的检测原理,主要检测方法：凝固法底物显色法免疫学法干化学法,1凝固法原理通过检测血浆在凝血激活剂作用下发生一系列物理量（光、电、超声、机械运动等）的变化，再由计算机分析所得最终结果，也称生物物理法。按具体测量原理分为电流法、超声分析法、光学法和磁珠法四种。 血栓/止血实验中最常用、最基本的方法,二、血凝仪的检测原理,1凝固法原理 （1）电流法：利用纤维蛋白原无导电性而纤维蛋白具有导电性的特点，将待测样品作为电路的一
3、部分，根据凝血过程中电路里电流的变化来判断纤维蛋白的形成。 缺点：不可靠、单一,二、血凝仪的检测原理,1凝固法原理 （2）超声波法 依凝血过程使血浆的超声波衰减程度判断终点。只能进行半定量，项目少，目前已经较少使用。,二、血凝仪的检测原理,（3）光学法（比浊法）：是根据血浆凝固过程中浊度的变化导致光强度变化来测定相关因子。 当向样品中加入凝血激活剂后，随着样品中纤维蛋白凝块的形成过程，样品的光强度逐步增加，仪器把这种光学变化描绘成凝固曲线，当样品完全凝固以后，光的强度不再变化。,纤维蛋白的形成与吸光度,光学法（比浊法）,透射比浊法光源、样本、接受器成直线，接收器接收到的是很强的透射光和较弱的散
4、射光。当测定物中有溶血、黄疸、脂血等干扰成分或低纤维蛋白原血症的特殊标本时，由于样本本身浊度的影响，测量精度变差。,光学法（比浊法）,散射比浊法光源、样本、接收器成直角，散射比浊法，接收器接收到的完全是散射光，不受本底浊度的影响。 散射比浊法优于透射比浊法,1凝固法原理 （4）磁珠法 根据磁珠运动的幅度随血浆凝固过程中黏度的增加而变化来测量凝血功能。分为光电探测法和电磁珠探测法。,二、血凝仪的检测原理,光电探测法测量原理测试时，永久磁铁在测试杯的下面旋转，带动测试杯中磁珠沿杯壁旋转，测试杯侧壁外安有红外反射式光电探测器元件来检测磁珠运动变化。依运动力学原理，磁珠的旋转随血浆黏度的增大逐渐向测试
5、杯中心靠拢，根据磁珠运动规律来判定血浆凝固终点。,（4）磁珠法,电磁探测法（双磁路磁珠法）：测试杯的两侧各有一组驱动线圈，其中一对磁路产生恒定的交变电磁场，使杯内特制的去磁小钢珠保持等幅振荡运动；凝血激活剂加入后，随着纤维蛋白的增多，血浆黏稠度增加，小钢珠运动振幅逐渐减弱，将运动幅度衰减到50时确定为凝固终点 。,（4）磁珠法,双磁路磁珠法原理,双磁路磁珠法原理,用电磁检测磁珠摆动衰减幅度,磁珠法与光学比浊法原理主要区别 前者是检测血浆凝固过程中磁电信号变化 后者是检测该过程中光信号的变化,光学法与磁珠法原理主要区别 光学法原理：是用光探测凝固过程中血浆浊度的（吸光度）变化来判断终点； 光电磁
6、珠法原理：是用光探测钢珠振幅衰减程度来判断终点； 双磁路磁珠法原理：是用电磁探测钢珠振幅衰减程度来判断终点。,三、血凝仪的检测原理,2.底物显色法 通过测定产色底物的吸光度变化来计算所测物质的含量和活性，也称生物化学法 ，实质为光电比色原理。最常用的多肽底物是对硝基苯胺，呈黄色，波长405nm。,二、血凝仪的检测原理,3.免疫学方法 以纯化的被检物质为抗原，制备相应的抗体，然后利用抗原抗体反应对被检物进行定性或定量测定。血凝仪使用免疫比浊法。,二、血凝仪的检测原理,4.干化学法 将惰性顺磁铁氧化颗粒结合在可产生凝固反应或纤溶反应的干试剂中，在固定垂直磁场的作用下使颗粒来回移动。,二、血凝仪的检
7、测原理,血凝仪的检测原理,三、血凝仪的基本结构,（一）半自动血凝仪的基本结构主要由样本预温槽和试剂预温槽、加样器、检测系统（光学、磁场）及微机组成。,（二）全自动血凝仪基本结构包括样本传送及处理装置、试剂冷藏位、样本及试剂分配系统、检测系统、计算机、输出设备及附件等。,三、血凝仪的基本结构,四、血凝仪的性能评价,技术性能评价：重复性测定、正确度、线性范围、携带污染率、干扰因素等几方面。,五、血凝仪的操作与维护,半自动血凝仪的操作,（一）,1.半自动血凝仪的维护 保持测试槽、样本槽、试剂槽清洁，严禁有异物进 避免阳光直晒和远离强热物体； 放置在平稳的工作台面上，不得摇晃与振动； 防止受潮和腐蚀；
8、 远离强电磁场干扰源，使用一次性测试杯及钢珠； 使用稳压器电源； 仪器保持恒温370.2。,（二）血凝仪的维护,2.全自动血凝仪的维护 定期清洗或更换空气过滤器； 定期检查及清洁反应槽； 定期清洗洗针池及通针； 经常检查冷却剂液面水平； 定期清洁机械运动导杆和转动部分并加润滑油； 及时保养定量装置； 定期更换样品及试剂针； 定期数据备份及恢复等,六、血凝仪常用检测项目及应用,应用 1.凝血系统的检测 2.抗凝系统的检测 3.纤维蛋白溶解系统检测 4.临床用药的监测,（1）凝血系统的检测：凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、凝血因子、。 （2）抗凝系统检测
9、：AT-、蛋白C、蛋白S等。 （3）纤维蛋白溶解系统的检测：纤溶酶原（PLG）、纤维蛋白降解产物（FDP）、D-二聚体（D-Dimer）等。 （4）临床用药的监测：使用普通肝素（UFH）、低分子肝素（LMWH）及口服抗凝剂后。,任务小结,血凝仪根据自动化程度的高低，分为半自动和全自动仪器。前者需手工加样，检测速度较慢，原理较单一，检测项目少，仪器配备的软件功能也很有限。后者的特点是检测速度快，测定项目多，检测原理较复杂和仪器设计的智能化。使用全自动血凝仪时只要将分离出的血浆样品放置在指定的位置，仪器便可完成加样、预温、检测和报告打印等全过程。多数全自动血凝仪可任意选择不同的项目组合进行检测，样品的检测具有随机性，仪器的数据处理和存储功能也较强。,任务小结,早期使用的血凝仪多采用凝固法（凝固法据检测原理的不同又分为光学法、磁珠法和电流法）进行测定，仪器的检测项目也比较有限，随着免疫学方法（主要是 免疫比浊法）和发色底物法的应用，血凝仪的检测项目大大增加，免疫比浊法主要用于FDP、D-二聚体和AT-的测定，发色底物法可用于AT-、蛋白C 和纤溶酶原等项目的测定。凝固法、免疫比浊法和发色底物法的联合应用使血凝仪不仅可用于临床的常规检测，同时也为研究新的实验指标在止血、血栓性疾病中的应用提供了有利条件。,
