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1、骨髓细胞学检查,主要内容,概述 骨髓细胞形态学检查 血细胞生成发展规律形态特点 细胞化学染色 免疫分型、细胞遗传学分析 血液病的血液学特征(实例),概 述,骨髓是人出生后的主要造血组织。 骨髓组织造血微环境:基质细胞、微血管、神经和基质细胞分泌的细胞因子等。血细胞:充满在微环境中的发育各阶段血细胞。,骨髓细胞学细胞形态学:主要检查骨髓中各系列血细胞数量的增减及其比例的改变,形态的异常,可以了解骨髓的造血功能和病理改变。骨髓形态学检查是诊断、鉴别诊断造血系统疾病的最基本的方法。细胞化学染色:形态学与化学的结合,采用化学反应原理来定性、半定量和定位细胞各种化学物质。细胞化学染色是诊断和辅助诊断血液
2、病的重要手段:,细胞免疫学:采用单克隆抗体和免疫学技术检测细胞表面或内部特异性抗原。对细胞免疫学分型、血液病的诊断、辅助诊断和鉴别诊断中有重要意义。 细胞遗传学:采用染色体分带技术,对染色体质和量进行分析。其对遗传性血液病、血液肿瘤的诊断、分型、病因和发病机制研究均具有重要价值。,骨髓细胞形态学检查的应用,1. 诊断(肯定、提示、符合、疑似、排除性诊断) 确诊疾病:1.部分造血系统疾病,如各种白血病,再生障碍性贫血等2.某些非造血系统疾病,如传染病或寄生虫病,如疟疾、黑热病及伤寒等;代谢性疾病,如Gauchers病等;转移性肿瘤等 辅助诊断:某些造血系统疾病,如ITP,溶血性贫血等 鉴别诊断:
3、原因未明,如发热,肝脾淋巴结肿大,骨关节疼痛等 2. 观察疗效和病情变化,血液科基本操作,骨髓穿刺(扁平骨、短骨和长管状骨近心端)bone marrow puncture 骨髓抽吸(成人:髂骨后上棘,婴幼儿:胫骨粗隆) Bone marrow aspiration 骨髓涂片 Bone marrow smear 骨髓活检Bone marrow biopsy,骨髓穿刺术,适应症: 1.外周血细胞数量及形态异常。 2.不明原因的发热、肝、脾、淋巴结肿大。 3.不明原因骨痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸、紫癜等 4. 血液系统疾病定期复查和疗效观察 5.其他诊治需要:活检、免疫学、遗传学、细胞和微生物培
4、养、寄生虫检查等,禁忌症: 凝血功能障碍:出血或出血倾向,如血友病,DIC等 晚期妊娠:慎重,骨髓细胞形态学检查的方法,骨髓穿刺 骨髓液涂片 染色:Wright染色取材好否? 涂片好否? 染色好否?低倍镜检查 (判断细胞增生程度,巨核细胞,异常细胞)油镜检查骨髓象分析与报告 (有核细胞分类计数,观察细胞形态),标本采集,部位:髂后上棘、髂前上棘、胸骨 量:0.2ml(涂片)3-5ml (免疫分型、培养等) 穿刺成功标志: 抽取骨髓一瞬间,病人有特殊的疼痛感 抽取的骨髓液内含有骨髓小粒,脂肪滴 显微镜下可见骨髓特有的细胞如幼稚细胞、巨核细胞、浆细胞、组织细胞等 杆状核分叶核,有核细胞多于外周血,
5、骨髓标本的分类部位,骨髓形态学检查的内容,低倍镜检查: 观察取材、涂片、染色情况 骨髓增生程度 巨核细胞 特殊细胞,如转移癌,骨髓增生程度分级,极度减低 100/HP,增生活跃,N:E 1:20 常见正常骨髓 (中年), 增生性贫血,增生明显活跃,N:E 1:10 常见增生性贫血, 急性白血病,脾亢, 骨髓增殖性疾病, ITP,增生极度活跃,N:E 1:1 常见白血病, 尤其 慢性粒细胞性白血病,增生减低,N:E 1:50 常见再生障碍性 贫血(慢性),粒 细胞减少/ 缺乏 症,骨髓纤维化,增生明显减低,N:E 1:200 常见再生障碍性贫 血(急性),骨髓 坏死,骨髓增生程度及常见原因,増生
6、极度活跃: 白血病, 尤其慢性粒细胞性白血病 増生明显活跃: 增生性贫血,急性白血病,脾亢, 骨髓增殖性疾病,ITP 増生活跃: 正常骨髓(中年),增生性贫血 增生减低: 再生障碍性贫血(慢性),粒细胞减少/ 缺乏症,骨髓纤维化、骨髓稀释 增生明显减低: 再生障碍性贫血(急性),骨髓坏死,巨核细胞计数,巨核细胞计数,数量: 735只/1.53cm涂片 分类: 原始巨核05,幼稚巨核010%,颗粒巨1050%,产板巨2070 %,裸核030% 成熟程度:五型中成熟两型所占比例颗粒巨+产板巨 2/3 产血小板功能:产板巨 1/3,油镜检查,计数200个有核细胞,有核细胞分类计数 M:E ratio
7、:粒/红比例各系细胞形态有无异常及有无异常细胞、寄生虫,骨髓象分析,骨髓有核细胞的组成,骨髓各系细胞及其各阶段的比例,粒细胞系: 5060% 随细胞成熟而比例增高原粒1%,早幼粒5%红细胞系: 2025% 原红1%, 以中晚幼红为主淋巴细胞系: 20% 以成熟淋巴细胞为主单核细胞系: 4% 以成熟为主浆细胞系: 2% 以成熟为主其他: 极少量的网状细胞, 内皮细胞, 组织细胞等,正常骨髓象,1、骨髓增生活跃 2、粒/红比值正常(24:1) 3、粒系占有核细胞的50%60%,原粒1%,早幼粒5%,中、晚幼粒各15%,杆状核多于分叶核,嗜酸粒5%,嗜碱粒1%,细胞形态无明显异常 4、红系占有核细胞
8、的20%左右,原红1%,早幼红5%,以中、晚幼红为主,各为10%,幼稚及成熟红细胞形态无异常,正常骨髓象,5、淋巴细胞约占有核细胞的20%(小儿可达40%),单核细胞4%及浆细胞5:1 粒细胞系增多,如急慢性白血病、急性化脓菌感染; 红细胞系减少,如纯红再障;比例减低 : 2:1 粒细胞系减少, 如粒缺; 红细胞系增多, 如各种增生性贫血;,3. 粒细胞系统细胞数量改变,粒细胞增多 (1)原始粒细胞增多为主:急性粒细胞白血病(原粒30%)、慢粒急变期(原粒20% )、急性粒单细胞白血病。 (2)早幼粒细胞增多为主:早幼粒细胞白血病,粒细胞缺乏恢复期 (3)中性中幼粒细胞增多为主:急粒M2b,慢
9、粒,粒细胞型白血病反应 (4)中性晚幼粒、杆状粒增多为主:慢粒、药物中毒、烧伤、失血、创伤后 (5)嗜酸性粒细胞增多:过敏反应、寄生虫感染、嗜酸性粒细胞白血病、慢粒、淋巴瘤、皮肤病等 (6)嗜碱性粒细胞增多:慢粒、嗜碱性粒细胞白血病、射线照射反应等,粒细胞系统细胞数量改变,粒细胞减少粒细胞缺乏症、再障、急性造血停滞,红细胞系统细胞数量改变,有核红细胞增多 (1)以原始和早幼红细胞增多为主:急性红血病和红白血病。 (2)以中幼和晚幼红细胞增多为主:各种贫血、ITP(急性)、真性红细胞增多症、铅中 毒、红白血病。 (3)巨幼红细胞或巨幼样变幼红细胞增多:巨幼贫、急性红(红白)血病、MDS、白血病化
10、疗后、铁粒幼红细胞性贫血 (4)铁粒幼红细胞增多:铁粒幼红细胞性贫血、MDS,红细胞系统细胞数量改变,有核红细胞减少 (1)纯红细胞再障 (2)急性粒细胞白血病未分化型 (3)急性单核细胞白血病未分化型 (4)急淋和慢粒 (5)化疗后,巨核细胞系统细胞数量改变,巨核细胞增多 (1)骨髓增殖性疾病(PV、CML、原发性血小板增多症、骨纤) (2)急性巨核细胞白血病 (3)全髓白血病 (4)ITP (5)脾亢、急性失血、急性溶血 巨核细胞减少再障、急性白血病、慢粒、化疗后,单核细胞系统细胞数量改变,单核细胞增多 (1)以原始及幼稚单核细胞增多为主: 急性单核细胞白血病(原+幼30%)、慢粒急单变、
11、急粒单白血病 (2)以成熟单核细胞增多为主:慢单、慢性粒单、单核细胞型类白反应、感染,淋巴细胞系统细胞数量改变,淋巴细胞增多 (1)以原始及幼稚淋巴细胞增多为主:ALL、CML急淋变、淋巴瘤白血病、CLL急变 (2)以成熟淋巴细胞增多为主:CLL、lymphoma、AA、淋巴细胞型类白反应、传染性单核/淋巴细胞增多症、病毒感染等,其他血细胞数量改变,浆细胞增多、组织细胞增多等,骨髓报告单,骨髓细胞形态学检查结果分析 注意事项,有核细胞数量的变化大多数无特异性,相同的变化可能存在于不同的血液系统或其他疾病。 血液病的诊断应先排除其他继发疾病导致的血液细胞形态学的改变。 某一种血液病不可能只有一个
12、血液细胞系统改变,往往是多系统协同变化。 血液病的诊断多基于某些骨髓异常血细胞比例超过某一界值(医学决定水平)。 骨髓细胞形态变化具有复杂性,若BM检查对疾病无确诊价值,应结合临床资料和其他相关检查进行综合分析。,血细胞的生成、发育规律 及正常形态学特征,(一)血细胞的生成,所有的血细胞均起源于共同的造血干细胞 具有高度自我更新的能力,以保持干细胞池数量的恒定,维持机体终身的稳定造血; 具有多向分化的能力,即可向各系列祖细胞分化,然后经过增殖、发育和成熟,成为各系细胞。- 不对称有丝分裂。 造血干细胞:包括全能干细胞(TSC)及由其分化的髓系干细胞和淋巴系干细胞。 受造血微环境、造血细胞生长因
13、子和白细胞介素以及神经和体液因子的调控。,造血干细胞,数量少,约占骨髓的0.5% 主要在骨髓,少量在外周血(脐带血、动员血等) 具有自我复制和多向分化的能力,是维持正常造血的原因 易受到损害(异常增生或抑制),导致多种疾病,Stem cell,造血干细胞的分化及增殖示意图,(二)血细胞发育过程中形态演变规律,细胞大小及外形: 大小: 大小 (巨核细胞相反) 外形:圆形不规则性(红细胞始终呈圆形) 细胞核: 大小:大小(巨核细胞相反) 核膜:模糊显著 核仁:有无 染色质:细致稀疏粗糙致密,着色浅深 核形:圆形分叶或不规则形(成熟红细胞无核),细胞浆: 量:少多 颗粒:无有,非特异性特异性 染色:
14、深蓝浅染(红细胞渐变红)细胞核细胞浆:大小(巨核细胞相反),(三)血细胞的正常形态学特征,1、红细胞系统 erythrocytes 原红(normoblast) 早幼红(basophilic normoblast) 中幼红(polychromatic normoblast) 晚幼红(orthochromatic normoblast),2、粒细胞系统 granulocytes 原粒(myeloblast) 早幼粒( pro myelocyte) 中幼粒(myelocyte):中性、嗜酸、嗜碱 晚幼粒(metamyelocyte) 杆状核粒(stab granulocyte,band granu
15、locyte) 分叶核(Segmented granulocyte),3. 单核系统 monocytes,4. 淋巴系统 lymphocytes,5.浆细胞系统 plasmacytes,6.巨核细胞系统 magakarocytes,细胞化学染色,概述 细胞化学染色的基础是形态学; 不同血细胞内的各种化学成分含量及分布存在差异; 细胞化学成分在病理情况下会发生改变; 细胞化学染色主要检测酶类、糖类、脂类、铁含量及分布;,(一)过氧化物酶染色 (POX),【原理】 粒细胞及分化较好的单核细胞胞浆内的POX能分解H2O2,产生新生态氧使无色的联苯胺氧化为蓝色联苯胺,后者再与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色的颗粒,沉淀于胞浆内。中性粒细胞含有丰富的POX,主要为髓过氧化物酶(MPO),MPO是中性粒细胞内含量最多的蛋白质。,