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1、动物细胞工程,最基础的是动物细胞培养技术,动物细胞工程常用的技术：,动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体 等,基础梳理,（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的_，将它分散成_，然后放在适宜的_中，让这些细胞_。 （2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）剪碎用_处理分散成_制成_转入培养瓶中进行_培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续_培养。,组织,单个细胞,培养基,生长和繁殖,胰蛋白酶或胶原蛋白酶,单个细胞,细胞悬液,原代,传代,（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为_。细胞数
2、目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面_时，细胞就会_，这种现象称为细胞的_。,细胞贴壁,相互抑制,停止分裂增殖,接触抑制,1.动物细胞培养,（4）动物细胞培养需要满足以下条件 无菌、无毒的环境：培养液应进行_处理。通常还要在培养液中添加一定量的_，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。 营养：合成培养基成分包括糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入_等天然成分。,无菌,抗生素,血清、血浆,温度及pH：哺乳动物的适宜温度多是_；pH为_。 气体环境：95%_5%_。O2是_所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的_。 （5）动物细胞培养
3、技术的应用：制备病毒疫苗、 _、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。,CO,36.50.5 ,7.27.4,空气,制备单克隆抗体,细胞代谢,pH,一、动物细胞培养,1、概念：从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,原理：,细胞增殖,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,10代细胞,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,过程：,动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。,去掉组织间蛋白,细胞增殖,动物细胞培养条件, 生物制品的生产 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 用于基因工程
4、 受体细胞 用于检测有毒物质 细胞的生理、病理、药理研究 筛选抗癌药物,动物细胞培养技术的应用,获得细胞,细胞的全能性,植物体,培养结果,或细胞产物,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物细胞和动物细胞培养的比较,细胞群体,（1）动物细胞融合也称_，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为_。 （2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方
5、法类似，常用的诱导因素有_、_、电刺激等。 （3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的_，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。,细胞杂交,杂交细胞,聚乙二醇,灭活的病毒,不亲和性,基础梳理,2.动物细胞融合与单克隆抗体,4.单克隆抗体 （1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种_。从血清中分离出的抗体_。 （2）单克隆抗体的制备过程,特异性抗体,产量低、纯度低、特异性差,（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量_，又能产生_。 （4）单克隆抗体的优点：_，_，并能_。 （5）单克隆抗体的作用 作为诊断试剂：准确识别各种_物质的细微差异，并跟_发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速
6、的优点。 用于治疗疾病和运载药物：主要用于_，可制成“_”，也有少量用于其他疾病治疗。,生物导弹,繁殖,专一的抗体,特异性强,灵敏度高,大量制备,抗原,一定抗原,癌症治疗,读下面一段文字资料，找出单克隆抗体的概念,人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,单克隆抗体的概念,单: 单个细胞 克隆: 无性繁殖 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质单一特异性强的抗体,提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无
7、限增殖的？,提示3：从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？,问题：如何大量生产单克隆抗体？,单克隆抗体的制备,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞 B淋巴细胞- B淋巴细胞 B淋巴细胞-骨髓瘤细胞,多种杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,2、单克隆抗体的制备过程,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出
8、能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高并可能大量制备,免疫小鼠,培养骨髓瘤细胞,融合,骨髓瘤细胞,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,选择培养基上培养,专一抗体检验阳性,专一抗体检验阳性,注射到小鼠体内,体外培养,单克隆抗体,克隆杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞,多种杂交细胞,杂交瘤细胞有何特点？,本过程利用的那些技术？,动物细胞融合技术 动物细胞培养技术,是否注射抗原,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？,两次筛选的目的分别是什么？,2、单克隆抗体制备过程,与传统
9、制备的抗体相比具有什么特点？,细胞膜的流动性、细胞的全能性,细胞膜的流动性、细胞增殖,酶解法去壁,小鼠免疫处理、细胞分散,物理法 化学法,物理、化学、生物法,原生质体的制备,融合亲本细胞的准备,原生质体的融合与筛选,动物细胞融合与两次筛选,杂种细胞的形成与培养,产特定抗体的杂交瘤细胞培养,杂种植株的鉴定,单克隆抗体的分离提纯,单抗有助于疾病的诊断、治疗、预防,获得具优良性状的杂种植株,（1）哺乳动物核移植可以分为_核移植（比较容易）和_核移植（比较难）。 （2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较_，容易操作；卵(母)细胞细胞质_，营养丰富。,胚胎细胞,体细胞,大,多,基础梳理,3.动
10、物细胞核移植与克隆动物,（3）体细胞核移植的大致过程,（4）体细胞核移植技术的应用 加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； 保护濒危物种，增大存活数量； 生产珍贵的医用蛋白； 作为异种移植的供体； 用于组织器官的移植等。 （5）体细胞核移植技术存在的问题 克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。,1、概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称克隆动物,动物体细胞核移植技术,理论基础：,动物的细胞核具有全能性,2、核移植的种类 胚胎细胞核移植 （易） 体细胞核移植 （难）,供
11、体细胞培养,（M卵母细胞）,减数第二次分裂中期,去核的卵母细胞,供体细胞注入去核卵母细胞,激活受体细胞，完成分裂、发育,胚胎移植,代孕牛子宫,克隆牛,3、过程：,特别提醒 ： 细胞核移植技术中注入去核卵母细胞中的不是供体细胞核，而是整个细胞，伴随着两细胞融合。体现细胞膜的结构特点：具有一定的流动性。 受体细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞，此时在透明带内包含着第一极体，在去核的同时连同第一极体一并去掉。 该技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。 用卵母细胞做受体细胞原因 a.卵母细胞体积大，便于操作； b.卵黄多，营养物质丰富； c.易激发细胞核全能性
12、的表达。,克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致。 动物细胞培养基成分特有的动物血清含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等多种成分。 两技术手段培养过程中都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称克隆，都不涉及减数分裂。 植物组织培养最终产生新个体，体现全能性；动物细胞培养产生大量细胞，不形成新个体，故不能体现全能性。,基础梳理,1.克隆人：两种不同观点，多数人持否定态度。 否定的理由：克隆人严重违反了_，是克隆技术的滥用；克隆人冲击了现有的婚姻、家庭和两性关系等传统的伦理道德观念；克隆人是在人为地制造在心理上和社会地位上都_。,人类伦理道德,不健全的人,肯定的理由：技术性问题可
13、以通过_、_和_等方法解决。不成熟的技术也只有通过实践才能使之成熟。 中国政府的态度：禁止_，不反对_。四不原则：_、_、_、_任何生殖性克隆人的实验。,胚胎分级,基因诊断,染色体检查,生殖性克隆,治疗性克隆,不赞成,不允许,不支持,不接受,2.试管婴儿：试管婴儿根据目的可分为两种，对试管婴儿的态度也有不同观点，有人反对，也有人认可。 否定的理由：把试管婴儿当作人体零配件工厂，是对_的不尊重；早期生命也有活下去的权利，抛弃或杀死多余胚胎，无异于“谋杀”。,生命,肯定的理由：解决了不育问题，提供骨髓中造血干细胞救治患者最好、最快捷的方法，提供骨髓造血干细胞并不会对_造成损伤。,试管婴儿,3.基因身份证 否定的理由：个人基因资讯的泄漏造成_，势必造成遗传学失业大军、造成个人婚姻困难、人际关系疏远等严重后果。 肯定的理由：通过_可以及早采取预防措施，适时进行治疗，达到挽救患者生命的目的。,基因检测,基因歧视,“试管婴儿”与“设计试管婴儿”的区别 所谓“设计试管婴儿”，实际是指体外受精形成的胚胎（几个细胞期）在植入母体孕育前，根据人们的需要，将胚胎的一个细胞取出，进行某些基因检测。当检测结果符合人们需要时，再把胚胎植入母体孕育。而一般我们所说试管婴儿的产生，不必进行基因检测这一步骤。,细胞工程技术所涉及的原理,归纳整合,
