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1、HIV抗体检测,十堰市疾病预防控制中心 刘经凤 2016年10月,规范性文件引用,艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-有效版本） 艾滋病病毒抗体快速检测技术手册（中国疾病预防控制中心，2011年版）,HIV抗体检测实验室要求,应符合国家对实验室生物安全的有关要求 实验室的质量控制按本规范相关章节规定,HIV抗体检测的目的和要点,HIV抗体检测的目的HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。 HIV抗体检测的要点1.严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。2.结果判定以试剂盒说明书为标准。,HIV抗体检测的目的和要点,3.筛查试验有反应，须作补充试验。 补充试
2、验是通过检测样本中是否存在艾滋病病毒抗体、抗原或者核酸而确定艾滋病病毒感染的检测方法。补充试验包括抗体确证试验（免疫印迹试验，条带/线性免疫试验，特定条件*下的替代检测，免疫层析或免疫渗滤试验）和核酸试验（核酸定性和核酸定量试验）。,HIV抗体检测的目的和要点,4.筛查试验无反应，不应做补充试验。5.对筛查及补充试验对象均应做好咨询工作。,常规HIV抗体检测方法,试剂和样品试剂必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的方法及试剂。样品可采用血清、血浆、全血、滤纸干血斑、口腔黏膜渗出液和尿液。,筛查方法,酶联免疫吸附试验（ELISA） 化学
3、发光或免疫荧光试验（CIA/IFA） ：采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果 快速检测（RT）及其它检测试验(1)明胶颗粒凝集试验(PA)(2)免疫渗滤试验(3)免疫层析试验,酶联免疫吸附试验（ELISA）,HIV抗体检测试剂（第三代）：检测HIV-1/2抗体 HIV抗原抗体联合检测试剂（第四代）：可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体 用酶标仪测定结果 有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定,ELISA试验中可能出现的问题和原因分析,ELISA试验中可能出现的问题和原因分析,ELISA测定中的干扰因素,内源性干扰因素 外源性干扰因素,内源性干扰因素,人血清标本中含
4、有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、医源性诱导的抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子等,外源性干扰因素,常常是由于血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝集不全、反复冻融等,酶联免疫吸附试验（ELISA）,优点：准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存 用途：流行病学监测及临床大量标本的检测,化学发光或免疫荧光试验,采用发光或荧光底物 既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体 酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物 用发光仪或荧光仪测定结果,全血样品 加50ul样品于样品垫中,手指血方法,
5、静脉血方法,加一滴缓冲液,15分钟内读取结果,快速检测（RT）及其它检测试验,病人条,质控条,快速检测（RT）及其它检测试验,优点: 快速 单份标本检测 不需额外试剂或设备 操作简便 缺点: 肉眼判断较主观 价格较贵 结果不易保存（建议拍照保存）,HIV筛查试剂的选择,检测目的 实验设施条件 价格 其他：检测数量、标本用量、复检问题、习惯等等,HIV抗体筛查结果的意义及处理,阴性：真阴性 未感染或暴露于HIV病毒假阴性 注意窗口期 阳性：真阳性 感染或暴露于HIV病毒假阳性 非特异性反应操作失误 处理：筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HI
6、V抗体阴性”，复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。,HIV抗体确证试验,确证试验的试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。确证样品：可采用血清、血浆、滤纸干血斑 确证试验方法：免疫印迹试验(WB)和条带/线性免疫试验（RIBA/LIA） 。国内常用的确证试验方法是WB和RIBA。,HIV确证试剂产品,HIV抗体WB确证实验结果（MP）,IMT,MP确证试剂盒判定标准：,WB不确定结果,原因：HIV感染早期、HIV感染晚期、非特异性反应、污染 依据：流行病学资料；临床表现；WB条带等 处理：核酸检测、2-
7、4周后随访、带型消失或无进展、出现新带型、重采血,HIV抗体 母亲 HIV 抗体经胎盘进入胎儿，出生时新生儿和婴儿早期抗体阳性，不一定是感染 出生时母亲的抗体，8090% 在生后 912 个月消失，出生后 18 个月基本上全部消失 18 个月后儿童 HIV抗体仍然阳性，视为自身感染产生的抗体,18个月以下婴幼儿的HIV诊断,婴幼儿HIV感染的抗体检测,适用于： HIV感染产妇所生婴幼儿； 母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。 婴儿12个月时进行HIV抗体检测阴性排除感染，纳入正常儿童保健；阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗体检测，结果阴性排
8、除感染。,结果报告,筛查报告HIV抗体筛查试验报告使用附表1（HIV抗体筛查检测报告）。筛查试验无反应报告为“HIV抗体阴性”；有反应必须进行复检，复检两次检测均无反应报告为“HIV抗体阴性”，,结果报告,复检检测均有反应或一个有反应一个无反应需进行“补充试验”；报告为“HIV感染待确定”，不能出具阳性报告。 HIV抗体筛查报告需由一名检验人员和一名审核者签字。,结果报告,确证报告 符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。 符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性”，并按规定做好检测后咨询和疫情报告。,结果报告,符合HIV抗
9、体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测或2-4周后随访，尽早明确诊断。 符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定”，在备注中应注明“2-4周后复检”或尽快做核酸检测。 HIV抗体确证检测报告应在收到样品后的7个工作日内发出。,质量控制,酶免或发光法抗体检测的室内质量控制试剂盒内部对照室内质控品Levey-Jennings质控图室内质控其他方式“即刻法”质控,质量控制,快速法抗体检测质控试剂内对照室内质控品对照开展抗体相关检测的实验室须参加有资质机构组织的能力验证，或室间比对。,艾滋病抗体快速检测质量控制,依据艾滋病病毒抗体快速检测技
10、术手册（2011年版）第8章,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测前质控： 1.样品要求唯一编号，检测前应仔细核对。 2.检测点的环境温湿度应符合检测试剂盒说明书的要求，并做好相关的记录。 3.保证试剂在有效期内使用。,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测过程质控： 1.做好实验过程中相关信息的记录：样品、检测试剂、操作者等。 2.保存在冰箱的试剂需在室温平衡后再使用；剩余的试剂条应立即封存冷藏；室温性下保存的试剂也应避免高温。 3.按照试剂厂家提供的说明书严格操作。（时间） 4.判定结果时，质控带必须出现，实验才能成立，否则需要重做并查找原因。,艾滋病抗体快速检测质量控制,检测后质控： 1.判读结果时应保证光线充足。对难以判读的条带建议又两人判读。 2.复核样品编号后填写实验结果。 3.清洁并处理实验废弃物。 4.发放规范的检测报告，整理实验过程中的各项记录存档。,图5 免疫印迹试剂（WB/RIBA）试验流程,图9血液抗原抗体筛查试验流程,谢谢！,
