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1、食品中的菌落总数的测定,第三组：胡婷、黄纯、黄依洁,Contents,1. 实验目的与原理,2. 实验材料,3. 实验方法与步骤,4.检样中细菌菌落总数的计算,5. 室内空气中细菌总数检测实施细则,一、实验目的与原理,目的 1、学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法 2、学会菌落总数的报告方式 3、明确菌落总数测定对被检样品进行卫生学评价的意义。 原理 平板菌落计数法又称标准平板活菌计数法（standard plate count，简称SPC法），是最常用的一种活菌计数法。菌落总数可作为判定食品清洁程度（被污染程度）的标志，通常越干净的食品，单位样品菌落总数越低，反之，菌落总数就越高。因此，细
2、菌菌落总数测定对检样进行卫生学评价提供依据。,二、实验材料,1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。 2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.00.2 3、检样：伊利包装鲜牛奶250ml,三、实验方法与步骤,1、检验程序 菌落总数检验程序： 检样做成几个适当倍数的稀释液选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内每皿内加入4615-20ml营养琼脂置361恒温箱内培养（482）h取出
3、 菌落数报告,2、检样稀释及培养 （1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。,（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10-1、10
4、2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46营养琼脂培养基注入平皿15ml20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置361恒温箱内培养（482）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。,四、检样中细菌菌落总数的计算,1、菌落计算方法 （1）菌落计数方法 做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均
5、菌落总数。,公式计算：,N = 样品中菌落数C = 含适宜范围菌落数的平板菌落数之和n1 = 第一稀释度（低稀释度）平板个数n2 = 第二稀释度（高稀释度）平板个数d = 稀释因子（第一稀释度）,实验结果与记录,五、室内空气中细菌总数检测实施细则,一、范围适用于室内空气细菌总数测定。 二、引用标准GB/T18883-2002 室内空气中细菌总数检验方法 三、原理撞击法：采用撞击式空气微生物采样器采样通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37、48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。,四、仪器和设备1高压
6、蒸汽灭菌器。2干热灭菌器。3恒温培养箱。4冰箱。5平皿。（直径9）6制备培养基用一般设备：量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。7撞击式空气微生物采样器（FSC-IV便携式浮游生物采样器）。 五、培养基 1营养琼脂培养基1成分：蛋白胨 20g ，牛肉浸膏 3g ，氯化钠 5g 琼脂 15g20g ，蒸馏水 1000ml。2制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，12120min高压灭菌。营养琼脂平板的制备参照采样器使用说明。,六、选点要求1采样点的数量根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以期能正确反映室内空气污染物的水平。原则上小于50的房间应设（13）个点；50100设（35）个点；100以上至少设5个点。在对角线上或梅花式均匀分布。2采样点应避开通风口，离墙壁距离应大于0.5m。3采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一致。相对高度0.5m1.5m之间。,七、采样 将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。一般情况下采样量为30L150L，应根据所使用仪器性能和室内空气微生物污染程度，酌情增加或减少空气采样量。 八、样品培养样品采完后，将带菌营养琼脂平板置361恒温箱中，培养48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每立方米空气中的菌落数。以每立方米菌落数（cfu/m3）报告结果,Thank You !,
