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1、北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除酱香型大曲中蛋白酶产生菌发酵条件及代谢产物研究答辩人：孙李平专业：生物科学北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除课题研究目的和意义 课题研究内容 研究方法和研究思路 预期研究结果北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除课题
2、研究目的和意义:对酱香型大曲中蛋白酶产生菌进行分离鉴定， 并对其酶学性质进行研究，包括最适作用温度、最 适pH、最适pH稳定性、最适热稳定性，从而发现酱 香型大曲中蛋白酶产生菌发酵条件及代谢产物。 有 助于揭示酱香的形成机制，提高优质酒率，对我国 整个酱香食品工业的发展都会起到重要的促进作用 类，同时亦可能揭示出这些复杂酿造微生物间一些 尚未知晓的协同作用和微生物代谢方式，并可能发 现一些对食品工业生产有益的微生物北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除 课题研究内容:1、对酱香型大
3、曲中蛋白酶产生菌进行分离鉴定 ：利用稀释平板法和平皿生化反应，对大曲中产蛋 白酶微生物进行分离，并对其进行纯化，然后观察 其个体形态、群体形态、生长形态。2、蛋白酶的分离纯化：以分离的蛋白酶产生菌 为出发菌株，制备菌株蛋白酶粗酶液，测定其酶活 力，采用 20% 70% 不同饱和度(NH4)2SO4对其 进行分段沉淀及纯化。3、蛋白酶的酶学性质研究：分别研究菌株蛋白 酶的最适作用温度及热稳定性，最适pH及pH稳定性 。北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除 研究方法和研究思路菌株的鉴
4、定 蛋白酶的分离纯化酶学性质研究北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除菌株的分离：北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除 目的菌株的分离及初筛预期研究结果：右图为培养菌株使用的是干扰素 培养基，因为产蛋白酶菌株产生的蛋 白酶能在培养基上发生平皿生化反应 ，故产生透明圈，根据透明圈直径大 小（D）和菌落直径大小（d）可以初 步判断出，该菌株产蛋白酶活力的大 小。由表1-1
5、可以初步得出：2#菌株 所产生的透明圈直径比最大，故2#菌 株为产蛋白酶能力最大的一株。北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除菌落呈白色，褶皱，边缘不整齐该菌株为革兰氏阳性菌，个体状态为杆状 初步判定分离菌株为杆菌属菌落生长形态特征菌株的个体形态特征北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除目的菌株的复筛：取3个250mL锥形瓶，洗净，分别装入液 体发酵培养基。然后用8层纱
6、布封口，牛皮纸 包扎，放入灭菌锅内，121灭菌20min。以 5106个/mL的接种量接种1mL到各个锥形瓶 中，然后将锥形瓶放入37，恒温摇床培养 48h。北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除样品蛋白酶活力测定：预热 反应 中止反应 离心加液显色保温显色空白对照 北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除目的菌株的蛋白酶活力结果预测：将分离纯化得到的3株蛋白酶产生菌菌株
7、 进行蛋白酶活力测定，结果见表由表可知， 2#菌株的酶活力达到最高北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除为什么采用盐析以及盐析方法:盐析法的优点是在常温沉淀过程中不会造 成酶的失活，沉淀物在室温下长时间放置也 不容易失活。(NH4)2SO4是较为常用的盐析 剂，溶解的温度系数小，低温度下其溶解度 较高，浓度高时也不容易引起蛋白质生物活 性的丧失。北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂
8、草难治杂草防除盐析结果预测:由图2-3可见，(NH4)2S04沉淀蛋白酶的饱和度应为70% .北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除 酶学性质研究:不同的蛋白酶有不同的最适pH、不同的 pH稳定性、不同的最适作用温度、不同的热 稳定性。蛋白酶最适作用pH及pH稳定性:由上图可知，在pH 5至7的范 围内，随着pH不断增加，酶活力 不断变大；当pH为7.0时，酶活 力最大，且为50.43Ug-1；随着 pH继续增加，酶活力开始不断下 降；可见酶最适作用pH为7.0。酶最适作用pH 测
9、定:pH的稳定性:由上图可知，在有底物的情况下，pH 为7.0时达到最高，值为39.17Ug-1； 不管pH降低或是升高，酶活力都是减 小，pH为5.0时，酶活力最小，值为 16.65Ug-1，且为最高酶活的42.5%； 故得出蛋白酶在pH7.0时最稳定。北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除蛋白酶最适作用温度及热稳定性结果预测：酶最适作用温度的测定：由上图可知，30后酶活力不断增加 ，到50时达到最大值50.85Ug-1 ，50后酶活力又不断减小，故酶最 适作用温度为50。酶的热稳定性由上图可知，无底物存在的情况时 ，酶保温1h，蛋白酶酶活力从30 的34.18Ug-1力一直降到80的 4.76Ug-1，故蛋白酶酶活随温度的 升高而降低，到50后酶活下降较 快，温度在3050较为稳定。由 此可知随着温度的升高，酶的热稳 定性越差。北京地铁矿山法区间隧道结构设计方法研究-石家庄铁道大学常用血管活性药物药物在危重病儿童应用的护理进展春光集团企业宣传片创意方案大豆玉米田杂草难治杂草防除谢谢观赏！
