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1、实验4：细菌划线分离与纯培养123Fcous1.掌握需氧菌分离培养的基本要领。 2了解细菌的分离培养原则及常用的方法一、实验目的1.融化培养基，倾注平板。 2.用普通琼脂平板每人做一次划线分离培养。 （病料） 3.用普通肉汤做一管大肠杆菌的移植培养。 注：上述接种的培养基注明班组后进行培养。二、实验内容三、作业1.为什么要进行细菌的分离培养？ 2.进行分离培养应注意哪些事项？ 3.细菌分离培养的方法有哪些？（重点叙述 平板划线法）“”实验四实验四小结在细菌学检验中，细菌的分离培养是重要的 基本技术之一。从混杂微生物中获得单一菌 株纯培养的方法称为分离。纯培养是指一株 菌种或者一个培养物中所有的
2、细菌都是由一 个细胞分裂、繁殖产生的后代。12分离培养的目的在于从被检的材料中，或 者从众多杂菌中分离出纯的病原菌。 细菌分离培养应先从被检材料或者病料中 分离培养出单个菌落，然后取可疑菌落进 行纯培养，再将纯培养物移植培养。“”实验四实验三小结3需氧性细菌分离培养法 1、平板划线分离法 2、倾注平皿分离法 3、芽孢需氧菌分离培养法 4、利用化学药品的分离培养法 5、实验动物分离法 6、琼脂斜面分离法 7、琼脂平板涂布分离法 8、营养肉汤分离法“”实验四实验三小结4厌氧性细菌分离培养法 1、生物学方法 植物组织（马铃薯、燕麦、发 芽谷物）动物组织（新鲜动物组织、加热的肌 肉） 2、化学方法 焦
3、性没食子酸法、硫乙醇酸钠法 3、物理学方法 利用加热、密封、抽气等物理 方法，驱除或者隔绝环境及培养基中的氧气， 造成厌氧环境。“”实验四实验三小结5兼性厌氧性细菌分离培养法 细菌培养中，有少数细菌（如牛型布氏杆菌） 在含有5%-10%二氧化碳的环境下才能生长。“”实验四实验三小结6平板划线分离培养法 菌种被其他杂菌污染时或混合菌悬液常用平板 划线法进行纯种分离。 此方法是借助将蘸有混合菌悬液的接种环在平 板表面多方向连续划线，使混杂的微生物在平 板表面分散，经培养得到分散的由单个微生物 繁殖而成的菌落，从而达到纯化目的。“”实验四实验三小结6平板划线分离培养法 1、划线分离的培养基必须事先倒
4、好，需充分冷 却待平板稍干后才可使用。 2、为便于划线，一般培养基不宜太薄，每一个 平皿倾倒约20ml培养基，培养基应厚薄均匀， 平板表面应光滑。 3、划线分离主要有连续划线和分区划线两种。“”实验四实验三小结6平板划线分离培养法 分区划线法：适用于含菌量较多的标本 连续划线法：适用于含菌量较少的标本 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 倾注培养法:用于细菌计数 液体培养基接种法 斜面接种法 “”实验四实验三小结7细菌接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境“”实验四实验三小结6平板划线分离培养法三段分区法四段分区法实验四实
5、验三小结分区划线法(3区)第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环实验四实验三小结连续划线法斜面接种法及接种后菌落生长 示意图实验四实验三小结细菌培养法一般培养（需氧培养）：培养温度：37（采用恒温培养箱）培养时间：1824h实验四实验三小结实验结果观察记录细菌生长情况的观察 观察琼脂平板表面生长的各种菌落，注意 其大小、形 状、边缘、表面结构、透明 度、颜色等性状。 实验四实验三小结实验结果在固体培养基观察记录 菌落 定义：指单个细菌在平板培养基上生长 繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、 表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R ）、黏液型（M）菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌 堆积物细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散 生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清 晰。实验四实验三小结细菌在液体培养基中的生长现象 混浊 沉淀：多见于链状排列的细菌 菌膜：多见于厌氧菌单菌落（clone)菌苔(lawn)液体培养时的群体形态：液体培养时的生长形态细菌在半固体培养基中的生长现象有动力现象无动力 现象
