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1、第五章 中药制剂含量测定反映其制剂中有效成 分或者毒性成分的含 量衡量其制剂工艺的稳 定性和中药材的质量 优劣 第一节 常用含量测定方法一、化学分析法n适用于含量较高的成分及无机成分的测定n包括：重量分析和滴定分析（一）重量分析w挥发法：如水分测定w萃取法：如冰片散中冰片的含量测定w沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定（二）滴定分析w酸碱滴定法：测定生物碱、有机酸、内酯类 w沉淀滴定法n银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物n四苯硼钠法：+生物碱白色沉淀n亚铁氰化钾法w配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）：测定鞣质、生物 碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等矿物类制剂的含量w氧化还原滴
2、定法：酚类、糖类及矿物药中Fe、As等万氏牛黄清心丸中朱砂的含量测定硫氰酸铵法 本品剪碎，取5g，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸 30ml与硝酸钾8g，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml 锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加1% 高锰酸钾溶液至显粉红色，两分种内不消失，再滴加2%硫酸 亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵 滴定液（0.1mol/L）滴定。 本品按干燥品计算，每丸含朱砂以硫化汞（HgS）计，小丸应为 6990mg；大丸应为138180mg。二、紫外可见分光光度法n对照品比照法对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（10010）n吸收
3、系数法A=ECLn计算分光光度法w等吸收点法，系数倍率法，三波长法，导数光谱法cf. 标准曲线法紫外可见分光光度法，标准曲线法排石颗粒中总黄酮的含量测定含量测定 对照品溶液的制备 取120干燥至恒重的芦丁对照品20mg ，精密称定，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使溶解，并稀释至 刻度，摇匀，即得（每1ml含无水芦丁0.2mg）。标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分 别置10ml量瓶中，各加50%甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀 ，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠 试液4ml，再加50%甲醇
4、至刻度，摇匀。以相应的溶液为空白。照紫外-可 见分光光度法（附录V A），在510nm的波长处测定吸光度，以吸光度为 纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法 取装量差异下的本品，研细，（甲醇超声提取）。精密量 取2ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为空白对照。另精 密量取2ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加50%甲醇 至5ml”起，依法立即测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水 芦丁的量，计算，即得。本品每袋含总黄酮以无水芦丁（C27H30H16）计，不得少于0.12g。紫外可见分光光度法，吸收系数法戊己丸中总生物碱的含量测定含量测定 取本品粉
5、末（过三号筛）0.70.9g，精密称定，置索氏提 取器中，加盐酸-甲醇（1:100）适量，加热回流至提取液无色，提取液浓 缩后移至25ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法（附录VI C）试验，精密量取5ml，置氧化铝柱（内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿 法装柱，用乙醇30ml预洗）上，用乙醇洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶 中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，用 0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法（附录V A），在345nm的波长测定吸光度，按盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4）的吸 收系数（E1%1cm）为728计算
6、，即得。本品按干燥品计算，每1g含总生物碱以盐酸小檗碱（C20H18Cl16NO4） 计，不得少于30mg。三、原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法是以待测元素的气态基态原子对该元素特征普贤的吸收为基础。准确度高、灵敏度高、选择性好、分析速度快。四、薄层色谱扫描法n薄层吸收扫描法w光源：氘灯(190-340nm)和W灯(340-900nmw 薄层板引起的散射现象（散射系数SX）标准 曲线（Kubella-Munk曲线）弯曲校正（曲线校直 法和计算机回归法）n薄层荧光扫描法w光源：汞灯(250-580nm)w直线式扫描，无需曲线校直n系统适应性试验w检测灵敏度w分离度 R=2(d1-d2)/(W
7、1+W2) R1.0w重复性，相对标准偏差RSD3.0显色后测定，RSD5.0 健脾丸中熊果酸的含量测定含量测定 取小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸，剪碎，混匀，取约4g ，精密称定，加水30ml，放置使溶散，滤过，残渣用水30ml洗涤，在室 温干燥至呈松软粉末状或低温干燥后研细，连同滤纸一并置索氏提取器 内，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣用石 油醚（3060）浸泡两次，每次10ml（浸泡约2分钟），倾去石油醚， 残渣加适量三氯甲烷-无水乙醇（2:3）混合液使溶解，转移至2ml量瓶内 ，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品适量，精 密称定，加无水乙醇制成每
8、1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄 层色谱法（附录VI B）试验，精密吸取供试品溶液4ul与6ul，对照品溶液 2ul与4ul，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以环已烷-三氯甲烷-乙酸乙 酯-冰醋酸（20:5:8:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙 醇溶液，在105加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小 的玻璃板，周围用胶布固定，进行扫描，波长：S=540nm，R=700nm， 测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。本品含山楂以熊果酸（C30H48O3）计，小蜜丸每1g不得少于 0.10mg；大蜜丸每丸不得少于0.90mg。五、气相色谱
9、法n适用于测定挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等中药制剂含水量、含醇量n系统适应性试验理论塔板数 n5.54(tR/W1/2)2最小理论塔板数，柱长，柱填充、载体性能等有影响分离度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2) R1.5（两峰完全分离）重复性，相对标准偏差RSD2.0 (n=5)拖尾因子T =W0.05h/2d1 (d1峰极大至峰前沿之间的距离) 1.05T0.95n实验条件的选择w固定相的选择气固色谱硅胶、石墨、化学键合相、高分子多孔微球等气液色谱烃类、硅氧烷类、醇类、酯类，特殊固定液（高温、手 性）w柱温的选择样品沸点范围柱温固定液用量 （固定液:载体）
10、 300400 200250 15% 200300 150180 510% 100200 各组分的平均沸 点2/3左右 1015% 气体等低沸点样品 室温或50下 1525% 宽沸程样品： 程序升温法n实验条件的选择w载气的选择H2，He：流速大，柱长，热导检测器N2：流速小，氢焰检测器，电子捕获检测器流速：2080ml/minw其它条件的选择w进样方式：直接进样、顶空进样（兼有分离分析作用）w进样口（汽化室）温度：样品的沸点或稍高于沸点， 30/ 30/ 50+T柱T汽 50+T沸点w检测室温度：30+T柱T检T汽n实验条件的选择w其它条件的选择n进样时间：1秒以内n进样量n理论允许最大进样
11、量使下降的塔板数不超过 10。n气体0.11ml；液体0.1-1ln分流器分流进样，1/101/100w检测检测 器：TCD, FID, NPD, ECD气相色谱法n毛细管柱柱长内径其它毛细管柱5-60m0.25mm,0.32mm ，0.53mm固定液厚度 0.1-0.5um填充柱2-4m2-4mm粒径为0.125- 0.25mmn气相色谱测定法w内标法加校正因子 n求算校正因子n待测组分含量测定w外标法w面积归一化法w标准溶液加入法气相色谱法川贝枇杷糖浆中薄荷脑的含量测定 含量测定 照气相色谱（附录VI E）测定。色谱条件与系统适用性试验 改良聚乙二醇毛细管柱（柱长30m，内 径0.32mm
12、，膜厚度0.25um），柱温110；进样口温度为250；检测器 温度为250；分流比为25:1。理论板数按萘峰计算应不低于5000。校正因子测定 精密称取萘适量，加环已烷制成每1ml含15mg的溶 液，作为内标溶液。另取薄荷脑对照品75mg，精密称定，置5ml量瓶中 ，加环已烷稀释至刻度，摇匀。精密量取1ml，置20ml量瓶中，精密加 入内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1ul，注入气相色谱仪， 计算校正因子。测定法 精密量取本品50ml，照挥发油测定法（附录X D）试验， (加环已烷回流提取），合并环已烷液，置20ml量瓶中，精密加入 内标溶液1ml，加环已烷至刻度，摇匀。吸取1ul
13、，注入气相色谱仪，测 定，即得。本品每1ml含薄荷脑（C10H20O）应不得少于0.20mg。 六、高效液相色谱法分离效能高、分析速度快及应用范围广 n适用于测定挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物及离子型化合物，如蛋白质、氨基酸、生物碱、甾体、类 脂、核酸、维生素及无机盐类 n系统适应性试验高效液相色谱法n实验条件的选择w色谱柱的选择 w流动相的选择优质纯或光谱纯，脱气，过滤（0.45m）n部分含水溶剂：适用于分离中等极性、弱极性药物 n非水溶剂：分离疏水性物质 n缓冲溶液：适用于可溶于水并具可解离特性的化合物，如 蛋白质、肽及弱酸、弱碱类化合物。 w洗脱方式：等度洗脱与梯度洗脱 w
14、检测检测 器：UVD, FD, ELSD, ECD,RID 高效液相色谱法双黄连口服液的含量测定（反相HPLC外标一点法）含量测定 黄芩 照高效液相色谱法（附录VI D）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）为流动相；检测波长为274nm。理论 板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇 制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲 醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇 匀，即得。测定法 分
15、别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相 色谱仪，测定，即得。本品每1ml含黄芩按黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于8.0mg。金银花 照高效液相色谱法（附录VI D）测定。七、离子色谱法离子色谱法（IC）系采用高压输液泵系统将规定的洗脱液泵入装有填充剂的色谱柱进行分离 测定的色谱分析方法。离子色谱法常用于无机阴离子、无机阳离子。 有机酸、糖醇类、氨基糖类、氨基酸、蛋白质 、糖蛋白等物质的定性和定量分析。在药学方 便的主要应用时药物的含量测定和有关物质检 查。八、毛细管电泳法毛细管电泳法（CE）是经典电泳技术与现代色谱技术相结合的一种新型现代电泳 技术，与传统电泳技术和现代HP
16、LC相比具有很多优点：搞笑；快速；进样量少； 低消耗、无污染；多模式，应用广。九、联用技术GC-MSLC-MS第二节 含量测定方法验证提取条件的考察n提取方式、浸泡时间、提取时间等分析方法的选择半月清散剂中红粉（HgO）的含量测定nF检验精密度nt检验准确度对照品的处理及标化n含量测定用n定性鉴别用用两种洗脱系统进行含量标化，归一化法计算n自制对照品纯度检查、含量测定、结构确认等测定条件的选择AASNH4SCN滴定工作曲线n确定线性化范围n相关系数r （HPLC法0.999；TLC法0.995 ） 稳定性试验确定最佳的测定时间精密度考察n相同方法对同一试样多次测定 RSD重复性试验n同一分析者在同一条件下对同一批样品的多次测定（n=5）再现性试验n不同分析者或不同实验室在不同实验条件下对同一批样品的 多次测定灵敏度检测限
