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1、免疫组化的基本应用山里人应用免疫学及组织化学原理， 对组织切片中的某些化学成分进行 原位的显示，这种技术称为免疫组 织化学（免疫组化）。 免疫组化的发展l1941年建立免疫荧光技术l1970年建立免疫酶标技术l1975年建立单克隆抗体技术l80年代以来，免疫组化技术 不断革新、持续发展基本原理 抗原抗体标记物优 点l特异性强 抗原与抗体是“一对一”的特 异结合l敏感性高 抗体稀释上千倍、上万倍仍 可在组织细胞中与抗原结合。l定位准确、形态与功能相结合 可在组 织和细胞中进行抗原的准确定位，可以 同时对不同抗原在同一组织或细胞中进 行定位观察。抗原：凡能刺激机体产生相应抗体或致 敏淋巴细胞，并能
2、与抗体或致敏淋巴细 胞发生特异性结合的物质称为抗原。（1）全抗原 它兼有免疫原性和反应原 性。全抗原具有较大的分子量，并具有较 复杂的化学组成。（2）半抗原 只具有反应原性而没有免 疫原性。它是一种低分子量的决定基团。抗体：是机体受抗原刺激后，在体液中 出现的一种能与相应抗原发生特异性结 合的球蛋白。*多克隆抗体 多克隆抗体是将纯化后的抗原直 接免疫动物（大多数为兔），并从该动物血中 所获得的免疫血清。它是多个B淋巴细胞克隆 所产生的抗体混合物。 *单克隆抗体 单克隆抗体是针对一种抗原决定 簇的一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体。它是应 用细胞融合杂交瘤技术通过免疫动物（大多数 为小鼠）而制备的。I
3、gG免疫组化应用 l提高病理诊断准确性 l激素受体及生长因子检测对预后及治疗的意义 l肿瘤相关基因蛋白的临床应用 l对肿瘤细胞增生程度的评价 l发现微小转移灶 l在肿瘤分期上的意义 l指导肿瘤的治疗 l免疫性疾病的辅助诊断 l病原微生物的检查 原始神经外胚瘤 （小圆型细胞肿瘤、 Ewing瘤）CD99肠癌及癌旁组织骨髓微小癌转移灶CK胃粘膜肠化生套染两种不正确的倾向l免疫组化可以代替一切，一有百有，一 通百通，遇有任何困难都求助于免疫组 化，甚至当HE诊断与免疫组化诊断有 矛盾时，首先以免疫组化诊断为准。l免疫组化不可信，一无是处，什么结果 也不相信，任何情况都不应用。免疫组化在肿瘤鉴别诊断中
4、的价值 l上皮源性肿瘤标志 l间叶源性肿瘤标志 l神经源性肿瘤标志 l淋巴造血细胞肿瘤标志 上皮源性肿瘤标志l广谱上皮细胞标志 l选择性上皮肿瘤标志 广谱上皮细胞标志l细胞角蛋白（CK） l上皮膜抗原（EMA）l上皮特异抗原（ESA） l癌胚抗原（CEA）l上皮肿瘤相关抗原（CA199 、CA242 、 CA153）l 谷胱甘肽S转移酶（GST） 细胞角蛋白（CK）广谱CK可标记几乎所有类型的上皮 细胞及其肿瘤。理论上HCK多在鳞状细胞癌中表达 ，LCK主要分布于腺癌。但不同分子量 CK在肿瘤中存在交叉现象，采用单一分 子量CK免疫表型来确定某种特定的上皮 性肿瘤是十分困难的。上皮膜抗原（EM
5、A）l作为上皮性肿瘤及上皮分化肿瘤的重要 标志l标记谱系与CK大致相似，但角化上皮表 达不如 CK强，而内脏腺上皮则优于CK 。上皮特异抗原（ESA）lESA标记鳞状细胞癌不如 CK，而对腺 上皮肿瘤非常理想。l某些低分化上皮性肿瘤中则表达较弱。癌胚抗原（CEA）l广泛存在于各种腺上皮性肿瘤细胞中 ，为腺上皮性肿瘤标志。l绝大部分间叶源性肿瘤，包括间皮肿 瘤中不含CEA或低度表达。上皮肿瘤相关抗原l在息肉或腺瘤的恶性变和判断交界性上皮肿瘤中 恶性成分时，具有一定的辅助诊断价值。lCA199在腺癌中，尤其是胃肠腺癌、肺腺癌、 胰腺癌、乳腺癌、胆管腺癌和汗腺癌等可高度表 达，而正常腺上皮含量较低。
6、lCA242标记各种分泌粘液的腺癌，多数腺癌呈阳 性，正常结肠、胰腺、胆囊上皮也有少量表达。lCA153乳腺癌几乎为强阳性，但在其它部位腺 癌也可阳性。谷胱甘肽S转移酶（GST）l较广谱的上皮细胞及其肿瘤标记：正常 甲状腺、泌尿道、呼吸道、胃肠道、子 宫、肝和胆管上皮阳性表达；胃癌、肠 癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、肺 癌，部分鳞状细胞癌，肺类癌等上皮源 性肿瘤l与肿瘤细胞耐药性有一定关系选择性上皮肿瘤标志l甲胎蛋白（AFP） l结肠腺瘤相关抗原 l前列腺特异抗原（PSA） l前列腺酸性磷酸酶（PSAP） l卵巢浆液腺肿瘤相关抗原（CA125） l绒毛膜促性腺激素（HCG）l妊娠特异性-l糖
7、蛋白（SP1） l甲状腺球蛋白（TG） 间叶源性肿瘤标志l广谱间叶肿瘤标志 l肌源性肿瘤标志 l纤维组织细胞肿瘤标志 l血管源性肿瘤标志 l间皮细胞肿瘤标志 l基底膜标志 广谱间叶肿瘤标志l波形蛋白（Vimentin）存在于全身所有间叶 细胞及其肿瘤细胞。常用于癌与肉瘤鉴别诊 断，因为绝大部分上皮来源的肿瘤阴性或弱 阳性，而软组织肿瘤则为阳性。l 纤维连接蛋白（FN） 存在于间叶细胞浆或 细胞表面，结缔组织及大部分基底膜。绝大 部分间叶源性肿瘤细胞为阳性，上皮性肿瘤 细胞多为阴性。肌源性肿瘤标志l广谱肌源性肿瘤标志 l横纹肌肿瘤标志 l平滑肌肿瘤标志 广谱肌源性肿瘤标志l结蛋白（desmin）
8、常见于多数平滑肌肿瘤 、横纹肌肿瘤和部分肌上皮肿瘤。高分化 平滑肌肉瘤其阳性率和标记强度显著高于 低分化肿瘤，某些低分化肌源性肿瘤可呈 阴性。l肌特异性肌动蛋白（MSA）一种广谱肌 动蛋白，广泛存在于心肌、平滑肌和横纹 肌细胞及其肿瘤中。敏感性高于desmin， 特异性不如 desmin。横纹肌肿瘤标志l肌红蛋白（Myoglobin）敏感性较差l肌球蛋白（Myosin）特异性较差l横纹肌actin l肌调节蛋白（MyoD1）l肌浆蛋白（ Myogenin） 平滑肌肿瘤标志l平滑肌肌动蛋白（SMA）l钙结合蛋白（Caldesmon）l肌结合蛋白（Calponin）纤维组织细胞肿瘤标志lCD68l
9、组织细胞抗原（MAC387）ll一抗胰蛋白酶（AAT）l1一抗胰糜蛋白酶（AACT）l溶菌酶（Lysozyme） 血管源性肿瘤标志lCD34lCD31 l第八因子相关抗原（F ） l荆豆凝集素（UEA） lVimentinlActin CD34HE卡波西肉瘤间皮细胞肿瘤标志 lCKlVimentin l钙结合蛋白（Calretinin）l间皮细胞（MC）基底膜标志 l层粘蛋白（Laminin）l胶原 胃癌细胞突破基底膜胃癌细胞突破基底膜 神经源性肿瘤标志l胶质细胞肿瘤标志l神经元肿瘤标志 l神经内分泌肿瘤标志 胶质细胞肿瘤标志l胶质纤维酸性蛋自（GFAP）星形胶质细 胞特异性蛋白，其表达与肿瘤
10、细胞分化密 切相关，某些肌上皮阳性表达。lS-100蛋白 特异性不强，必须与其它相 应的肿瘤标志物联合应用。l髓鞘碱性蛋白（MBP）是中枢和周围神 经鞘结构、少突胶质细胞和雪旺细胞及其 肿瘤的特异性标志物。敏感性不高。神经元肿瘤标志 l神经细丝蛋白（NF）l神经特异性烯醇化酶（NSE）l嗜铬素（CgA）l突触蛋白（Syn） 神经内分泌肿瘤标志 l催乳素（PRL）l生长激素（GH）l促肾上腺皮质激素（ACTH ）l促甲状腺素（TSH）l生长抑素（Somatostatin）l胰多肽（PP）l血管活性肠肽（VIP） 淋巴造血细胞肿瘤标志lB淋巴细胞标志 lT淋巴细胞标志 l霍奇金淋巴瘤标志 l组织细
11、胞及网状细胞肿瘤标志 B淋巴细胞标志lCD20（L26） lCD21 lCD45RA lCD74和CD75 lCD79 lBLA l轻链Kappa和Lambda T淋巴细胞标志lCD3 lCD8 lCD45RO lCD43 lALK lCD56 滤泡性淋巴瘤Bcl-2增生性滤泡大细胞间变型淋巴瘤lCD30 lEMA lCD20/CD3lALK霍奇金淋巴瘤标志lCD30（Ki-1）lCD15（GAA） 组织细胞及网状细胞肿瘤标志lCD68l组织细胞抗原（MAC387）ll一抗胰蛋白酶（AAT）l1一抗胰糜蛋白酶（AACT）l溶菌酶（Lysozyme）肿瘤免疫组化鉴别诊断 l小圆细胞肿瘤 l梭形细胞肿瘤 l上皮样肿瘤 l多形性肿瘤 l腺泡状肿瘤 l转移性肿瘤 免疫组化应用中的注意事项 l正确设计对照方法 l染色失败的几种原因 l抗原的“例外”表达 l抗原的联合表达 l应用“反证法”确保免疫组化检查在 病理诊断中的准确性 l标本的固定问题l不同实验室之间的 误差l肿瘤细胞群本身可 能存在的异质性l抗体的特异性问题免疫组化判断中应注意的问题l
