药物分析 第2章 鉴别

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1、 第二章 药物的鉴别试验制作人：王玉华第一节 概 述鉴别试验：是根据药物的分子结构、理化性质,采用现有的分析方法来判断药物的真伪。是药检工作中的首项任务，只有在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物的杂质检查、含量测定。注意：这些鉴别试验用来证实贮藏在标签容器中的药物是否为所标示的药物，其方法虽有一定的专属性，但不足以确证其结构，故不能鉴别未知物第二节 药物的真伪鉴别性状 和 鉴别试验一、性状（definition)：外观、溶解度和物理常数聚集状态、晶形1、 外观色泽臭、味2.溶解度:药物的一种物理性质，在一定程度上反映了药物的纯度。极易溶解 指溶质1g(ml)能在溶剂不到1ml中溶解易溶 指溶质

2、1g(ml)能在溶剂1不到10ml中溶解溶解指溶质1g(ml)能在溶剂10不到30ml中溶解略溶 系指溶质1g(ml)能在溶剂30不到100ml 中溶解微溶 系指溶质1g(ml)能在溶剂100不到1000ml中溶解；极微溶解系指溶质1g(ml)能在溶剂1000 不到10000ml中溶解；几乎不溶或不溶 系指溶质1g(ml)在溶剂 10000ml中不能完全溶解。 如：磺胺嘧啶：“在乙醇或丙酮中微溶，在水中几乎不溶；在氢氧化钠试液中易 溶，在稀盐酸中溶解。3.物理常数：是鉴定药品质量的重要指标。其测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。如：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光

3、率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。（1）、 熔点：系指一种物质按 规定方法测定，由固体熔化成 液体的温度、熔融同时分解的 温度或在熔化时自初熔至全熔 的一段温度。如：本品的熔点为204-212C（2） 比旋度：在一定波长与温度下，偏 振光透过1dm且每1ml中含有旋光性物质 1g的溶液时测得的旋光度称为比旋度。例如Vc的测定：取本品，精密称定，加水溶解并定 量稀释使成每1ml中约含0.10g的溶液， 依法测定，比旋度为20.5至21.5C 。n（3）吸收系数：在给定的波长、溶剂 和温度等条件下，吸光物质在单位浓度 、单位液层厚度时的吸收度。常用百分吸收系数 如：取本品，精密称定，加

4、水溶解并定量 稀释制成1ml中约含30ug的 溶液，照分 光光度法，在290 nm波长处测定吸收度 ，吸收系数（E11cm)为133141。二、一般鉴别试验 （general identification test ）是依据某一类药物的化学结构和理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物真伪。一般鉴别试验只能证实是某一类药物,而不能证实是哪一种药物。必须在一般鉴别试验的基础上,再进行专属鉴别试验,方可确认哪一种药物2种以上鉴别方法结合起来共同鉴别一个药物一般鉴别试验的方法收在ChP附录中：丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟类、无机金属类（Na, K, Li, Ca, Ba, Fe.,A

5、l, Zn,Cu, Ag,Hg等）、有机酸盐类（水杨酸盐）、无酸盐类等（氯化物、硫酸盐等）专属鉴别试验收在正文中。1.有机氟化物有机氟氧瓶燃烧 无机氟离子 pH4.3茜素氟蓝硝酸亚铈蓝紫色络合物2. 有机酸盐(1) 水杨酸水杨酸 + FeCl3中性条件弱酸性条件红色配位化合物紫色配位化合物(2) 酒石酸盐供试品溶液（中性）+ 氨制硝酸银水浴中银镜3.芳香第一胺类供试品+稀盐酸亚硝酸钠碱性-萘酚试液黄色到猩红色4.托烷生物碱类（发烟硝酸、氢氧化钾醇溶液）此类生物碱中具有莨菪酸结构，有Vitali反应,显紫色。 5.无机金属盐（Na, K, Ca以及铵盐)焰色反应：Na显鲜黄色；K显紫色；Ca显砖

6、红色 供试品 + NaOH氨臭使湿润的 红色石蕊 试纸变蓝使硝酸亚汞试液湿 润的滤纸显黑色铵盐：6. 无机酸根氯化物： Cl- + Ag+ AgCl 乳白色硫酸盐： SO42- + Ba2+ BaSO4 白色三、专属鉴别试验 (specific identification test）证实某一种药物的依据如巴比妥类药物的母核是丙二酰脲，因此该类药物称为丙二酰脲类，它们共同 的反应是银盐反应和铜盐反应，操作方法 置于丙二酰脲类的鉴别方法项下，在药典 的附录中。苯巴比妥巴比妥司可巴比妥钠苯巴比妥（母核 丙二酰脲）一般鉴别试验区别不同类别的药物。专属鉴别试验则是在一般鉴别试验的基础上, 区别同类药物

7、的各个单体。第三节 鉴别方法鉴别化学鉴别法X射线粉末衍射法生物学法 光谱鉴别法色谱鉴别法 (1)利用呈色或颜色消失的鉴别法(2)沉淀生成反应鉴别法(3)荧光反应鉴别法(4)气体生成鉴别法 (5) 测定衍生物的熔点一、化学鉴别法一 化学鉴别法三氯化铁呈色反应(Ar-OH, Ar-OCOCH3)异羟戊酸铁反应(Ar-COOH;-COOR)1. 显色反应鉴别法 茚三酮呈色反应(脂肪氨基，氨基酸）重氮化-偶合呈色反应(Ar-NH2;-NHCOR)氧化还原显色反应及其它颜色反应与金属离子的沉淀反应 三氯化铁呈色反应第二章对乙酰氨基酚 异羟肟酸铁反应氯贝丁酯 Cl 茚三酮呈色反应 重氮化-偶合呈色反应第二

8、章左旋多巴 对乙酰氨基酚 氧化还原呈色反应第二章盐酸氯丙嗪 （1）与重金属离子的沉淀反应（2）与碘化铋钾的沉淀反应（3）其它沉淀反应第二章2、沉淀生成反应鉴别法（1）胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处理 生成氨气 ( NH3 ；NH(C2H5)2)（2）含硫药物经强酸处理后，加热，生成硫化氢气体3、气体生成反应 (H2S+Pb2+ PbS +2H+)鉴别法 （3）含碘有机药物，加热。生成紫色碘蒸汽（4）含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解 后， 加乙醇可产生乙酸乙酯 药物本身在可见光下发射荧光 药物溶液+硫酸 药物溶液+溴 药物溶液+间苯二酚 药物经其它反应后发射荧光第二章4、 荧光反应鉴别法5、 测定

9、衍生物的熔点1. 紫外光谱鉴别法 测定最大吸收波长,或同时测 定最小吸收波长.乙胺嘧啶 供试品在0.1mol/L盐酸介质 中的紫外吸收在272nm处为峰,216nm处 为谷.二、光 谱 鉴 别 法 规定吸收波长和吸收度比值法两性霉素在362nm、381nm、405nm波长处有最大吸收.规定362nm与381nm处吸收度比值不大于0.6、 381nm与405nm波长比值不大于0.9.第二章己稀雌酚注射液用供试品溶液250450nm波长吸收光谱与对照品是否一致鉴别.第二章 与对照品比较,对比吸收光谱的一致性 经化学处理后,测定其反应产物的 吸收光谱特性.第二章 规定一定浓度供试品在最大吸收波长处的

10、吸收度.主要用于组分单一、结构明确的原料药。ChP 采用标准图谱对照法BP 采用标准图谱对照法、对照品法USP 采用对照品法JP 规定条件下测定一定波数处特征吸收峰。第二章2 .红外光谱法3 .近红外光谱法400012800cm-14、原子吸收分光光度法利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为(Rf值或保留时间)进行鉴别试验。用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别,具有分离、分析同时进行的特点.三、色谱法（HPLC GC TLC)1、高效液相色谱法(HPLC)供试品和对照品色谱峰保留时间一致.2、气相色谱法 (GC)同HPLC要求第二章3、薄层色谱法(TLC)对照品比较法供试品斑点与

11、对照品的Rf值及斑点的颜色应一致。四、生物学法利用微生物或试验动物进行鉴别的方法 。五、x射线粉末衍射法具有晶体结构的化合物具有特定的X射线衍射图。 化学法和仪器法相结合, 相互取长补短。由 2种以上的方法可以共同鉴别一个药物的真伪。建立鉴别方法的概念： 方法要有一定的专属性、灵敏 性、且便于推广。例1.维生素C的鉴别：维生素C分子中具有2 个手性C原子,所以具有旋光性,可以通过测 定旋光度来进行鉴别.（1） 药典中规定： 维生素C的比旋度应 为+20.5+21.5（2）在维生素C的分子中具有烯二醇 的结构，这个结构具有很强的还原性 ,可以和一些氧化剂作用.（3）红外光谱与对照图谱一致.第四节

12、 鉴别试验的条件鉴别试验是以所采用的化学反应或 物 理特性产生的明显的、易于觉察的特征变 化为依据。因此，能影响鉴别试验判定结 果的特征变化的因素都是应当精心选择和 严格控制的。一、溶液的浓度溶液的浓度主要是指被鉴别药物的浓度，加入各种试剂的量一般是过量。鉴别试验多采用观测沉淀、颜色或各种光学参数的变化，来判定结果。药物和有关试剂的浓度直接影响上述的各种变化，必须由实验筛选后作出严格规定。 二、溶液的温度温度对化学反应的影响很大，一般温度每升高10，可使反应速度增加24倍。温度的升高可以促使一些化学反应的发生，颜色发生变化，对观察结果有直接的影响。应该作出规定。许多鉴别反应都需要在一定酸碱度的

13、条件下才能进行。溶液酸碱度的作用在于能使各反应物有足够的浓度处于反应状，又使反应生成物处于稳定和易于观测的状态。三、溶液的酸碱度四、干扰成分的存在在鉴别试验中，如药物结构中的其它部分或药物制剂中的其它组分也可参加鉴别反应，产生干扰鉴别试验结果的现象，就会混淆试验结果。这时必须选择专属性更高的鉴别方法或先对共存的干扰组分进行分离，然后进行鉴别。五、试验时间有机化合物的化学反应和无机化合物不同，一般反应速度较慢，达到预期试验结果需要较长的时间。这是因为有机化合物是以共价键相结合,同时在化学反应过程中，有时存在着许多中间阶段，甚至需加入催化剂才能启动反应。要使化学反应完成需一定的时间，要经过实验筛选加以确定，并作出规定。