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1、紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案第十三章PCR 核酸扩增仪 (PCR nucleic acid Amplifier)紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 教学基本要求p掌握核酸扩增仪的工作原理和主要性能指标。p掌握梯度PCR仪和原位PCR仪的功能和特点。p掌握实时荧光定量PCR扩增仪的种类及特点。p熟悉PCR技术的原理；PCR扩增仪的种类；荧光 实时定量PCR（RQ-PCR）技术原理。p了解PCR扩增仪的操作规程；PCR扩增仪常见故 障的排除；PCR扩
2、增仪的应用。紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 内 容 提 要第一节 PCR核酸扩增仪的工作原理第二节 PCR核酸扩增仪的分类与结构第三节 PCR核酸扩增仪的性能指标、操作规 程及常见故障的排除第四节 PCR核酸扩增仪的临床应用紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 第一节 PCR核酸扩增仪的工作原理pPCR技术的发展简史pPCR技术的原理p核酸扩增仪的工作原理紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一
3、车展策划案 PCR技术的发展简史p1971年，Kjell Kleppe等描述的一项基于酶的 体外DNA复制实验 。 p1985年美国PE公司Kary MullisKary Mullis在开车前去北 加利福尼亚红树县的一条被月光笼罩的山路上 构思了PCR。p1993年，Mullis因此项技术获诺贝尔化学奖。紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 PCR技术的原理pPCR技术的本质是核酸体外扩增p加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下 引物同模板DNA杂交，在Taq DNA聚合酶， dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件
4、下延 伸引物，重复 “变性退火引物延伸”过程至 2540个循环，呈指数级扩大待测样本中的核 酸拷贝数。紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 PCR技术的原理PCR 循环 第一步 加热变性紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 PCR技术的原理PCR 循环- 第二步 引物与模板DNA分子退火Primer 1Primer 253553533紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 PCR技术的原理
5、PCR 循环-第三步 - 引物延伸Primer 1Primer 253553533Taq DNA Polymerase紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 PCR技术的原理第1个 PCR 循环完成后 得到两个拷贝的靶序列紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 PCR技术的原理30次循环后靶序列扩增的数量循环数 扩增产物量 （2n）121222243238424165253262664202201,048,576302301,073,741,824紫荆电影院成
6、都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 PCR核酸扩增仪的工作原理pPCR核酸扩增仪的工作关键是：温 度 控 制紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 PCR核酸扩增仪的工作原理控温方式水浴锅控温 压缩机控温 半导体控温 离心式空气 加热控温 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 第二节 PCR核酸扩增仪的分类与结构p普通定性PCR核酸扩增仪p实时荧光定量PCR核酸扩增仪紫荆电影院成都校园营销策划推广方
7、案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 普通定性PCR核酸扩增仪p按照变温方式分为以下三类：p水浴式PCR仪 p变温金属块式PCR仪 p变温气流式PCR仪 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案普通定性PCR核酸扩增仪水浴式PCR仪p一般由三个不同温度的水浴槽三个不同温度的水浴槽和机械臂机械臂组成。p采用半导体传感技术、电子技术和计算机技术进 行水浴温度的测量、显示和控制p并经计算机控制由机械臂完成样品在每个水浴槽 的置放以及槽间的移动。p特点：仪器体积较大，但变温快、时间准、温度 均一，目
8、前国内应用较少。 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案普通定性PCR核酸扩增仪变温金属块式PCR仪p中心是由铝块或不锈钢制成的热槽，上有不同数 目甚至不同规格的凹孔凹孔，用来放置样品管。凹孔 内壁加工精密，保证与样品管紧密接触。p一般通过半导体加热和冷却，并由微机控制恒温 和冷热处理过程，通过键盘和显示器实现人机交 流，并可编程、存储或删除程序。p特点：仪器装置比较牢固耐用，温度变换平稳， 有利于保持Taq DNA聚合酶的活性。 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一
9、车展策划案普通定性PCR核酸扩增仪变温气流式PCR仪p由机壳、热源、冷空气泵、控制器及辅助元件等 组成。pp热源热源由电阻元件和吹风机组成，形成热空气枪借 空气作为热传播媒介，由大功率风扇及制冷设备 提供外部冷空气制冷，精确的温度传感器构成不 同的温度循环。p特点：仪器不用金属精密加工，成本较低；整个 系统没有液体流动及制冷剂，安全程度高。配上 微机和软件，可灵活编程。 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 普通定性PCR核酸扩增仪p按照功能用途可分为以下两类：p梯度PCR仪 p原位PCR仪 紫荆电影院成都校园营销策划推广方
10、案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案普通定性PCR核酸扩增仪梯度PCR仪 p由普通PCR仪衍生出的具温度梯度功能温度梯度功能的核酸扩 增仪。p多种变性温度和延伸温度可在一台扩增仪上同时 完成p既节省实验时间、提高实验效率，又节约实验成 本。p梯度PCR仪每个孔的温度可以在指定范围内按照 梯度设置，根据扩增结果，一步就可以摸索出最 适退火条件。 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案普通定性PCR核酸扩增仪原位PCR仪 p是原位杂交与原位杂交与PCRPCR技术的结合技术的结合。在细胞内进行
11、PCR扩增，而不破坏组织细胞的形态。p解决了以往手工方法操作复杂，扩增效果及实验 结果重复性不理想的问题。p与普通PCR仪的区别：其样品基座上有若干平行 的铝槽，每条铝槽内可垂直放置一张载玻片，每 张载玻片面均与铝槽紧密接触，温度传导极佳， 控温很精确。紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 实时荧光定量PCR核酸扩增仪p实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR，RQ-PCR)技术是在PCR反应体系中 加入特异性的荧光染料或探针，荧光信号荧光信号 的变化真实地反映了体系中模板的增加的变化真实地反
12、映了体系中模板的增加， 通过检测荧光信号达到定量的目的。紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 实时荧光定量PCR核酸扩增仪p实时荧光定量PCR核酸扩增仪由两部分组 成：PCRPCR系统系统和荧光检测系统荧光检测系统。p荧光检测系统主要包括激发光源和检测器 ，现在的主流是多色多通道检测，激发通 道越多适用的荧光素种类越多，仪器适用 范围就越宽。紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 实时荧光定量PCR核酸扩增仪p金属板式实时荧光定量PCR仪p离心式实时定量PC
13、R仪 p各孔独立控温的荧光定量PCR仪 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 金属板式实时荧光定量PCR仪p即传统的96孔板式定量PCR仪，由第三代的半导 体PCR仪发展而来，在原位PCR仪的基础上，增 加荧光激发和检测模块，升级为荧光定量PCR仪 。p可作普通PCR仪使用，带梯度功能，但温度均一 性差，有边缘效应，标准曲线的反应条件难以做 到与样品完全一致。 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 金属板式实时荧光定量PCR仪p激发光源多为卤钨灯，与5色滤
14、光镜配合，可同时 激发96或384个样品；检测器为超低温CCD成像 系统，可同时多点多色检测，能有效分辨FAM SYBRGreenI、VICJOE、NEDTAMRA Cy3等多种荧光染料。p随机配制的定量PCR引物和探针设计软件Primer Express可以设计定量PCR所需的Taq Man探针。p有实时动态实时动态(Real-Time)和终点读板终点读板(Plate Read)两 种模式。紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 实时荧光定量PCR核酸扩增仪p金属板式实时荧光定量PCR仪p离心式实时定量PCR仪 p各孔独立控
15、温的荧光定量PCR仪 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 离心式实时定量PCR仪p离心式实时定量PCR仪器的样品槽被设计为离心 转子的模样，借助空气加热空气加热，转子在腔内旋转， 每个样品孔之间的温度差异小于0.01，保障了 标准曲线和样品之间反应条件的一致性。p激发光源大多采用发光二极管(LED)冷光源，运 行前无需预热，无需校正。系统误差少，定量线 性范围可达l0个数量级。p缺点：离心转子小，可容纳样品量少，有的需用 特殊毛细管作样品管，增加了使用成本，也不带 梯度功能。 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训
16、精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 离心式实时定量PCR仪Rotor-Gene 3000荧光定量PCR仪 Light CycleTM荧光定量PCR仪 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 离心式实时定量PCR仪Light CycleTM荧光定量PCR仪结构示意图 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 实时荧光定量PCR核酸扩增仪p金属板式实时荧光定量PCR仪p离心式实时定量PCR仪 p各孔独立控温的荧光定量PCR仪 紫荆电影院成都校园营销策划推广方案海报设计培训精品教程海马M5新车试驾品鉴会活动策划方案海南第一车展策划案 各孔独立控温的荧光定量PCR仪p各孔独立控温的定量PCR仪设计非常独到，不同 样品槽分别拥有独立的智能升降温模块独立的智能升降温模块，各孔独 立控温，可以在同一台定量PCR仪上分进行
